亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天神经管缺陷的相关性研究

张洁琼　徐东萍

[摘要] 目的 研究亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与红细胞叶酸浓度的关系。 方法 采用PCR法对育龄女性5 128例进行亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性分析，并分别给予早孕者400μg、800μg叶酸口服补充1个月，比较干预前后红细胞叶酸浓度。 结果 纯合CC型早孕受试者口服400 μg叶酸1个月后平均红细胞叶酸浓度与口服800 μg叶酸者相比较，差异无统计学意义（P >0.05）；突变基因型CT型、TT型早孕受试者差异则均具有统计学意义（P <0.05）。结论 对育龄妇女开展MTHFR基因多态性检测有利于指导补充叶酸剂量，值得临床进一步研究。

[关键词] 亚甲基四氢叶酸还原酶； 基因多态性；叶酸；神经管缺陷

[中图分类号] R722.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）13-0016-03

出生缺陷的围生儿中神经管缺陷约占21%，占比最高，中国每年约有8万～10万名神经管缺陷儿出生 [1]。随着近年来分子生物学技术的发展，叶酸代谢障碍被认为与多种出生缺陷疾病有关，如神经管缺陷、唇腭裂、先天性心脏病和唐氏综合征等[2]。亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸代谢的关键酶，一旦MTHFR基因发生突变，则导致人体摄入的叶酸无法转换成有效形式，叶酸利用率下降；MTHFR基因677位核苷酸的多态性形成了CC、CT和TT 3种基因型，相对于正常的CC基因型，杂合的CT基因型MTHFR酶活性降低35%，纯合的TT基因型活性降低70%。MTHFR基因突变导致酶活性的改变，引起叶酸利用障碍，增加了发生神经管畸形（NTDs）的风险[3]。预防性补充叶酸防止出生缺陷已经得到了世界范围内的认可。妇产科医师通常按照统一的剂量（400μg）来建议孕期女性服用叶酸，标准剂量的叶酸补充可能无法满足MTHFR基因发生突变的女性胎儿发育需要[4]。因此对孕期女性进行基因检测以指导临床个性化用药是必要的，本研究拟通过本地区育龄女性的MTHFR基因大样本检测，了解该地区育龄女性MTHFR基因的多态性分布情况，并探讨MTHFR基因多态性与服用叶酸前后红细胞叶酸浓度的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

经我院伦理委员会批准，收集2009年1月～2013年6月期间就诊于我院门诊的育龄女性，入选标准：育龄期汉族女性，同意抽血化验。病例排除标准：中晚期孕妇；合并慢性肝肾疾病、血液系统病、恶性贫血、胃十二指肠切除术后、精神障碍性疾病。入选实验对象5 128例，其中早孕（孕8～14周）育龄女性753例作为早孕组。

1.2治疗干预方法

所有入选者均抽取空腹静脉血2mL到乙二胺四乙酸（EDTA）-Na2抗凝管中，置-70℃冰箱中备用提取基因组DNA进行MTHFR基因多态性检测。早孕受试者根据MTHFR基因多态性检测结果分为CC组、CT组、TT组，然后每个组再随机分为两组，分别给予400μg、800μg不同剂量的叶酸口服补充1个月。口服叶酸前及服用1个月以后均晨空腹抽取静脉全血4mL，加入EDTA抗凝试管内检测红细胞叶酸浓度。

1.3 观察指标及检测方法

所有入选者均采用PCR法进行C677T 位点MTHFR基因多态性检测；早孕者口服叶酸前后检测红细胞叶酸水平。

1.3.1 MTHFR基因检测 首先利用常规饱和酚-氯仿抽提法从全血中提取基因组DNA，测定DNA纯度和浓度后-20℃保存备用。MTHFR基因多态性检测采用PCR法：①MTHFR-C677T引物设计 参照文献进行，上游引物5-TGA AGG AGA AGG TGT CTG CGG GA-3，下游引物5-AGG ACG GTG CGG TGA GAG TG-3，均由上海生物工程技术公司提供；②PCR反应体系 总体积25μL，其中ddH20 18.5μL，10×缓冲液2.5μL，10mM的dNTPs 1μL，12.5pmol/μL的引物各lμL，DNA lμL，所用DNA提取试剂盒由Takara公司生产（Code No.： R004A）；③PCR反应条件 94℃预变性5 min。94℃变性30 s，58℃复性45s，72℃延伸45 s，35个循环；72℃终末延伸10 min，最后置于4℃保存；④扩增产物的限制性酶切 取PCR扩增产物8止，用8 U TaqI限制性内切酶于37℃酶切6 h，反应终止后，产物经3%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，染色后以DL 75 bp DNA片段长度标准物为参考，在紫外灯下判断结果，并拍照分析基因型[5]。

1.3.2红细胞叶酸浓度检测 采用化学发光法检测抗凝血中红细胞叶酸浓度，红细胞叶酸检测仪由山东鑫科生物科技股份有限公司生产提供。

1.4统计学方法

应用SPSS17.0软件包行统计研究，计量资料用平均数±标准差形式表示，采用t检验；计数资料用相对数表示，采用χ2检验，设定a=0.05、即P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 本地区育龄女性MTHFR基因的多态性分布情况

MTHFR基因型PCR扩增产物片段大小为134 bp，根据限制性内切酶Taq I酶切片段的情况，基因型有三种，CC型（134 bp 1条带），CT型（134 bp，75 bp，59 bp 3条带），TT型（75 bp，59 bp 2条带）。本次普查本地区育龄女性共检出CC型（正常基因）1 689例，CT型（杂合突变型）2 357例，TT型（纯合突变型）1 082例，基因多态性位点遗传平衡检验见表1。早孕组共检出CC型（正常基因）210例，CT型（杂合突变型）375例，TT型（纯合突变型）168例，基因多态性位点遗传平衡检验见表2。

表1 本地区育龄女性MTHFR基因的多态性位点遗传平衡检验

表2 本地区早孕女性MTHFR基因的多态性位点遗传平衡检验

2.2 MTHFR基因多态性与服用叶酸前后红细胞叶酸浓度的相关性

本组早期孕妇干预前CT型平均红细胞叶酸浓度（274.5±28.5）nmol/L，TT型平均红细胞叶酸浓度（257.3±33.4）nmol/L，与CC型平均红细胞叶酸浓度（297.2±31.3）nmol/L相比较，差异具有统计学意义（t1=8.152，P=0.015；t2=10.213，P=0.010）。口服400 μg叶酸1个月前后，CC型早孕受试者差异比较具有统计学意义（P<0.05），CT型、TT型差异无统计学意义（P>0.05）；口服800 μg叶酸1个月前后，CC型、CT型、TT型早孕受试者差异比较均具有统计学意义（P<0.05）。CC型早孕受试者口服400 μg叶酸1个月后平均红细胞叶酸浓度与口服800 μg叶酸者相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；CT型、TT型早孕受试者口服400 μg叶酸1个月后平均红细胞叶酸浓度与口服800 μg叶酸者分别相比较，差异均具有统计学意义（P<0.05），详见表3。

3 讨论

神经管缺陷（neural tube defects，NTDs）是因神经管上皮的早期发生及分化紊乱而导致的一种最常见且后果严重的出生缺陷畸形，包括脊柱裂、无脑儿、脊髓脊膜或脑膜膨出、颅脊柱裂等临床类型，是引起自然流产、死胎、死产及新生儿死亡最重要因素[6]。目前NTDs发病机制尚不清楚，一般认为是环境与遗传因素共同作用的结果，当前的研究热点是NTDs与同型半胱氨酸代谢相关性；近年来叶酸代谢途径中酶体系多态性与神经管缺陷发生相关性研究得到关注 [7]。

5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10-methyl-netetrahydrofolate，MTHFR）属人同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）代谢途径过程中的关键酶，其主要作用是催化5，10-亚甲基四氢叶酸经还原反应转变5-甲基四氢叶酸的[8]。5-甲基四氢叶酸是叶酸的一种重要活性形式。而叶酸是蛋氨酸代谢中限速反应过程，5-甲基四氢叶酸可脱落活性甲基并转给同型半胱氨酸（Hcy），生成蛋氨酸。叶酸过低，则会引起蛋氨酸合成量的减少，导致血中同型半胱氨酸（Hcy）积存过多，这在孕早期阶段会干扰神经管的闭合，从而发生神经管缺陷性胎儿[9，10]。研究发现，MTHFR基因的C677T突变可导致的酶活性和热敏感性降低，使身体对低叶酸水平的耐受范围缩窄[11，12]。但是如果机体摄入大量的叶酸而且没有其他半胱氨酸代谢酶缺陷存在时，由于酶活反应底物浓度增加，同样可以维持正常的Hcy代谢，MTHFR基因的C677T突变则不会引起高Hcy血症，但是叶酸摄入不足时，MTHFR基因突变则可导致高Hcy血症[13]。

虽然MTHFR基因突变频率存在明显的地区、种族差异，但来自不同地区的大样本数据研究均证实，母亲C677T突变是导致NTD儿遗传风险的高危因素，MTHFR基因C677T型为子代发生NTD的危险因素之一[14]。我们的研究结果表明，早期孕妇CT型、TT型红细胞叶酸浓度相对较低，补充较大剂量（800 μg）叶酸时能够有效地维持红细胞叶酸浓度，常规剂量400 μg一定程度上不能满足MTHFR基因C677T型突变孕妇的正常叶酸水平需求。

综上所述，针对育龄妇女开展MTHFR基因多态性检测，并用以指导孕期口服补充叶酸剂量的选择，值得临床进一步研究尝试。

[参考文献]

[1] 毕胜，潘尚哈，张昱，等. 叶酸、维生素B12，MTHFR基因及血浆同型半胱氨酸水平与Alzheimer病关系的研究[J]. 中国现代医学杂志，2004，14（19）：15-18.

[2] 张海洋，张金华，张会敏，等. MTHFR基因多态性与脑卒中的相关性[J]. 中国老年学杂志，2012，32（4）：690-691.

[3] Weiner AS， Boyarskikh UA， Voronina EN，et al. Methylenetetrahydrofolate reductase C677T and methionine synthase A2756G polymorphisms influence on leukocyte genomic DNA methylation level[J]. Gene，2014，533（1）：168-172.

[4] 李军，史海龙，帖红莉，等. MTHFR基因多态性检测在神经管缺陷干预中的应用[J]. 中国优生优育，2008，14（4）：163-164.

[5] 贺宪民，张群，杨琦，等. 亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶还原酶基因多态性研究[J]. 中国计划生育学杂志，2010，18（1）：13-18.

[6] 沈立萍，仇小强. 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性、叶酸、同型半胱氨酸与神经管缺陷的关系[J]. 中华流行病学杂志，2004，25（10）：908-910.

[7] Liu R， Geng P， Ma M， et al. MTHFR C677T polymorphism and migraine risk： A meta-analysis[J]. J Neurol Sci，2013，10： 8.

[8] 周媛，王莉，张军，等. 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天神经管缺陷的关系[J]. 中国妇幼保健，2008， 23（22）：3105-3107.

[9] 卢庆彬，王志萍，宫蕊，等. 孕育神经管缺陷儿的育龄妇女生命质量及相关因素[J]. 中国心理卫生杂志，2011， 25（3）：185-190.

[10] 马辰凯，江峰，孙莲萍，等. 亚甲基四氢叶酸脱氢酶G1958A多态性与神经管缺陷易感性的meta分析[J]. 临床儿科杂志，2013，（6）：565-569.

[11] 李桂华. 加强农村育龄妇女增补叶酸管理预防神经管缺陷[J]. 中国医药导报，2013，10（2）：119-121，125.

[12] 徐霞，陈盛强，谢芳英，等. 广东汉族人N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与冠心病的关系初探[J]. 中国基层医药，2005，12（6）：661-662.

[13] 周世媛，周继苹，王莉娜，等. MTHFR基因多态性与法洛四联症的相关性研究[J]. 山东医药，2012，52（43）：1-3.

[14] 林茜，黄忆明. 孕妇维生素营养状况对胎儿生长发育的影响[J]. 中国现代医学杂志，2001，11（7）：50-51.

（收稿日期：2013-11-20）

表2 本地区早孕女性MTHFR基因的多态性位点遗传平衡检验

2.2 MTHFR基因多态性与服用叶酸前后红细胞叶酸浓度的相关性

本组早期孕妇干预前CT型平均红细胞叶酸浓度（274.5±28.5）nmol/L，TT型平均红细胞叶酸浓度（257.3±33.4）nmol/L，与CC型平均红细胞叶酸浓度（297.2±31.3）nmol/L相比较，差异具有统计学意义（t1=8.152，P=0.015；t2=10.213，P=0.010）。口服400 μg叶酸1个月前后，CC型早孕受试者差异比较具有统计学意义（P<0.05），CT型、TT型差异无统计学意义（P>0.05）；口服800 μg叶酸1个月前后，CC型、CT型、TT型早孕受试者差异比较均具有统计学意义（P<0.05）。CC型早孕受试者口服400 μg叶酸1个月后平均红细胞叶酸浓度与口服800 μg叶酸者相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；CT型、TT型早孕受试者口服400 μg叶酸1个月后平均红细胞叶酸浓度与口服800 μg叶酸者分别相比较，差异均具有统计学意义（P<0.05），详见表3。

3 讨论

神经管缺陷（neural tube defects，NTDs）是因神经管上皮的早期发生及分化紊乱而导致的一种最常见且后果严重的出生缺陷畸形，包括脊柱裂、无脑儿、脊髓脊膜或脑膜膨出、颅脊柱裂等临床类型，是引起自然流产、死胎、死产及新生儿死亡最重要因素[6]。目前NTDs发病机制尚不清楚，一般认为是环境与遗传因素共同作用的结果，当前的研究热点是NTDs与同型半胱氨酸代谢相关性；近年来叶酸代谢途径中酶体系多态性与神经管缺陷发生相关性研究得到关注 [7]。

5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10-methyl-netetrahydrofolate，MTHFR）属人同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）代谢途径过程中的关键酶，其主要作用是催化5，10-亚甲基四氢叶酸经还原反应转变5-甲基四氢叶酸的[8]。5-甲基四氢叶酸是叶酸的一种重要活性形式。而叶酸是蛋氨酸代谢中限速反应过程，5-甲基四氢叶酸可脱落活性甲基并转给同型半胱氨酸（Hcy），生成蛋氨酸。叶酸过低，则会引起蛋氨酸合成量的减少，导致血中同型半胱氨酸（Hcy）积存过多，这在孕早期阶段会干扰神经管的闭合，从而发生神经管缺陷性胎儿[9，10]。研究发现，MTHFR基因的C677T突变可导致的酶活性和热敏感性降低，使身体对低叶酸水平的耐受范围缩窄[11，12]。但是如果机体摄入大量的叶酸而且没有其他半胱氨酸代谢酶缺陷存在时，由于酶活反应底物浓度增加，同样可以维持正常的Hcy代谢，MTHFR基因的C677T突变则不会引起高Hcy血症，但是叶酸摄入不足时，MTHFR基因突变则可导致高Hcy血症[13]。

虽然MTHFR基因突变频率存在明显的地区、种族差异，但来自不同地区的大样本数据研究均证实，母亲C677T突变是导致NTD儿遗传风险的高危因素，MTHFR基因C677T型为子代发生NTD的危险因素之一[14]。我们的研究结果表明，早期孕妇CT型、TT型红细胞叶酸浓度相对较低，补充较大剂量（800 μg）叶酸时能够有效地维持红细胞叶酸浓度，常规剂量400 μg一定程度上不能满足MTHFR基因C677T型突变孕妇的正常叶酸水平需求。

综上所述，针对育龄妇女开展MTHFR基因多态性检测，并用以指导孕期口服补充叶酸剂量的选择，值得临床进一步研究尝试。

[参考文献]

[1] 毕胜，潘尚哈，张昱，等. 叶酸、维生素B12，MTHFR基因及血浆同型半胱氨酸水平与Alzheimer病关系的研究[J]. 中国现代医学杂志，2004，14（19）：15-18.

[2] 张海洋，张金华，张会敏，等. MTHFR基因多态性与脑卒中的相关性[J]. 中国老年学杂志，2012，32（4）：690-691.

[3] Weiner AS， Boyarskikh UA， Voronina EN，et al. Methylenetetrahydrofolate reductase C677T and methionine synthase A2756G polymorphisms influence on leukocyte genomic DNA methylation level[J]. Gene，2014，533（1）：168-172.

[4] 李军，史海龙，帖红莉，等. MTHFR基因多态性检测在神经管缺陷干预中的应用[J]. 中国优生优育，2008，14（4）：163-164.

[5] 贺宪民，张群，杨琦，等. 亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶还原酶基因多态性研究[J]. 中国计划生育学杂志，2010，18（1）：13-18.

[6] 沈立萍，仇小强. 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性、叶酸、同型半胱氨酸与神经管缺陷的关系[J]. 中华流行病学杂志，2004，25（10）：908-910.

[7] Liu R， Geng P， Ma M， et al. MTHFR C677T polymorphism and migraine risk： A meta-analysis[J]. J Neurol Sci，2013，10： 8.

[8] 周媛，王莉，张军，等. 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天神经管缺陷的关系[J]. 中国妇幼保健，2008， 23（22）：3105-3107.

[9] 卢庆彬，王志萍，宫蕊，等. 孕育神经管缺陷儿的育龄妇女生命质量及相关因素[J]. 中国心理卫生杂志，2011， 25（3）：185-190.

[10] 马辰凯，江峰，孙莲萍，等. 亚甲基四氢叶酸脱氢酶G1958A多态性与神经管缺陷易感性的meta分析[J]. 临床儿科杂志，2013，（6）：565-569.

[11] 李桂华. 加强农村育龄妇女增补叶酸管理预防神经管缺陷[J]. 中国医药导报，2013，10（2）：119-121，125.

[12] 徐霞，陈盛强，谢芳英，等. 广东汉族人N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与冠心病的关系初探[J]. 中国基层医药，2005，12（6）：661-662.

[13] 周世媛，周继苹，王莉娜，等. MTHFR基因多态性与法洛四联症的相关性研究[J]. 山东医药，2012，52（43）：1-3.

[14] 林茜，黄忆明. 孕妇维生素营养状况对胎儿生长发育的影响[J]. 中国现代医学杂志，2001，11（7）：50-51.

（收稿日期：2013-11-20）

表2 本地区早孕女性MTHFR基因的多态性位点遗传平衡检验

2.2 MTHFR基因多态性与服用叶酸前后红细胞叶酸浓度的相关性

本组早期孕妇干预前CT型平均红细胞叶酸浓度（274.5±28.5）nmol/L，TT型平均红细胞叶酸浓度（257.3±33.4）nmol/L，与CC型平均红细胞叶酸浓度（297.2±31.3）nmol/L相比较，差异具有统计学意义（t1=8.152，P=0.015；t2=10.213，P=0.010）。口服400 μg叶酸1个月前后，CC型早孕受试者差异比较具有统计学意义（P<0.05），CT型、TT型差异无统计学意义（P>0.05）；口服800 μg叶酸1个月前后，CC型、CT型、TT型早孕受试者差异比较均具有统计学意义（P<0.05）。CC型早孕受试者口服400 μg叶酸1个月后平均红细胞叶酸浓度与口服800 μg叶酸者相比较，差异无统计学意义（P>0.05）；CT型、TT型早孕受试者口服400 μg叶酸1个月后平均红细胞叶酸浓度与口服800 μg叶酸者分别相比较，差异均具有统计学意义（P<0.05），详见表3。

3 讨论

神经管缺陷（neural tube defects，NTDs）是因神经管上皮的早期发生及分化紊乱而导致的一种最常见且后果严重的出生缺陷畸形，包括脊柱裂、无脑儿、脊髓脊膜或脑膜膨出、颅脊柱裂等临床类型，是引起自然流产、死胎、死产及新生儿死亡最重要因素[6]。目前NTDs发病机制尚不清楚，一般认为是环境与遗传因素共同作用的结果，当前的研究热点是NTDs与同型半胱氨酸代谢相关性；近年来叶酸代谢途径中酶体系多态性与神经管缺陷发生相关性研究得到关注 [7]。

5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10-methyl-netetrahydrofolate，MTHFR）属人同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）代谢途径过程中的关键酶，其主要作用是催化5，10-亚甲基四氢叶酸经还原反应转变5-甲基四氢叶酸的[8]。5-甲基四氢叶酸是叶酸的一种重要活性形式。而叶酸是蛋氨酸代谢中限速反应过程，5-甲基四氢叶酸可脱落活性甲基并转给同型半胱氨酸（Hcy），生成蛋氨酸。叶酸过低，则会引起蛋氨酸合成量的减少，导致血中同型半胱氨酸（Hcy）积存过多，这在孕早期阶段会干扰神经管的闭合，从而发生神经管缺陷性胎儿[9，10]。研究发现，MTHFR基因的C677T突变可导致的酶活性和热敏感性降低，使身体对低叶酸水平的耐受范围缩窄[11，12]。但是如果机体摄入大量的叶酸而且没有其他半胱氨酸代谢酶缺陷存在时，由于酶活反应底物浓度增加，同样可以维持正常的Hcy代谢，MTHFR基因的C677T突变则不会引起高Hcy血症，但是叶酸摄入不足时，MTHFR基因突变则可导致高Hcy血症[13]。

虽然MTHFR基因突变频率存在明显的地区、种族差异，但来自不同地区的大样本数据研究均证实，母亲C677T突变是导致NTD儿遗传风险的高危因素，MTHFR基因C677T型为子代发生NTD的危险因素之一[14]。我们的研究结果表明，早期孕妇CT型、TT型红细胞叶酸浓度相对较低，补充较大剂量（800 μg）叶酸时能够有效地维持红细胞叶酸浓度，常规剂量400 μg一定程度上不能满足MTHFR基因C677T型突变孕妇的正常叶酸水平需求。

综上所述，针对育龄妇女开展MTHFR基因多态性检测，并用以指导孕期口服补充叶酸剂量的选择，值得临床进一步研究尝试。

[参考文献]

[1] 毕胜，潘尚哈，张昱，等. 叶酸、维生素B12，MTHFR基因及血浆同型半胱氨酸水平与Alzheimer病关系的研究[J]. 中国现代医学杂志，2004，14（19）：15-18.

[2] 张海洋，张金华，张会敏，等. MTHFR基因多态性与脑卒中的相关性[J]. 中国老年学杂志，2012，32（4）：690-691.

[3] Weiner AS， Boyarskikh UA， Voronina EN，et al. Methylenetetrahydrofolate reductase C677T and methionine synthase A2756G polymorphisms influence on leukocyte genomic DNA methylation level[J]. Gene，2014，533（1）：168-172.

[4] 李军，史海龙，帖红莉，等. MTHFR基因多态性检测在神经管缺陷干预中的应用[J]. 中国优生优育，2008，14（4）：163-164.

[5] 贺宪民，张群，杨琦，等. 亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶还原酶基因多态性研究[J]. 中国计划生育学杂志，2010，18（1）：13-18.

[6] 沈立萍，仇小强. 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性、叶酸、同型半胱氨酸与神经管缺陷的关系[J]. 中华流行病学杂志，2004，25（10）：908-910.

[7] Liu R， Geng P， Ma M， et al. MTHFR C677T polymorphism and migraine risk： A meta-analysis[J]. J Neurol Sci，2013，10： 8.

[8] 周媛，王莉，张军，等. 亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天神经管缺陷的关系[J]. 中国妇幼保健，2008， 23（22）：3105-3107.

[9] 卢庆彬，王志萍，宫蕊，等. 孕育神经管缺陷儿的育龄妇女生命质量及相关因素[J]. 中国心理卫生杂志，2011， 25（3）：185-190.

[10] 马辰凯，江峰，孙莲萍，等. 亚甲基四氢叶酸脱氢酶G1958A多态性与神经管缺陷易感性的meta分析[J]. 临床儿科杂志，2013，（6）：565-569.

[11] 李桂华. 加强农村育龄妇女增补叶酸管理预防神经管缺陷[J]. 中国医药导报，2013，10（2）：119-121，125.

[12] 徐霞，陈盛强，谢芳英，等. 广东汉族人N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与冠心病的关系初探[J]. 中国基层医药，2005，12（6）：661-662.

[13] 周世媛，周继苹，王莉娜，等. MTHFR基因多态性与法洛四联症的相关性研究[J]. 山东医药，2012，52（43）：1-3.

[14] 林茜，黄忆明. 孕妇维生素营养状况对胎儿生长发育的影响[J]. 中国现代医学杂志，2001，11（7）：50-51.

（收稿日期：2013-11-20）