高效液相色谱法测定清开灵注射液中黄芩苷与绿原酸的含量

沈秀玲

高效液相色谱法测定清开灵注射液中黄芩苷与绿原酸的含量

沈秀玲

目的对高效液相色谱法检测清开灵注射液中黄芩苷与绿原酸含量的效果进行分析探讨，为今后的药学研究工作提供可靠的参考依据。方法固定相为C18硅胶柱，流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1.0ml/min，波长为323nm。结果绿原酸的线性范围4.251～105.900µg/ml，r=0.9998，黄芩苷的线性范围9.223～203.700µg/ml，r=0.9999。实验的重现性、精密度良好，样品稳定性理想。结论经高效液相色谱法对清开灵注射液中黄芩苷与绿原酸含量进行检测具有操作简单、快速、结果准确可靠、精密度与重现性理想，在清开灵注射液质量控制中具有重要作用，值得关注。

清开灵注射液；黄芩苷；绿原酸；含量测定；高效液相色谱法

本次研究出于对清开灵注射液中黄芩苷与绿原酸含量进行检测的目的，采取高效液相色谱法对清开灵注射液的有效成分黄芩苷和绿原酸展开了含量测定，现汇报结果如下。

1 实验材料

1.1 实验仪器 所用仪器为KNAUER高效液相色谱仪，包括有K-501HPLC泵、分析型动态混合器、K-2600UV Detector、7725i手动进样阀、Eero-chrom 2000 Basic Edition色谱工作站软件V2、O5和T3000柱温箱，除以上仪器外还需用到KQ-400BD型数控超生波清洗器、U-1900型紫外分光光度计、赛多利斯BP211D电子分析天平、离心机等。

1.2 试剂与试药 实验中所用试剂包括甲醇、磷酸均为分析纯，中蒸馏水。所用试药包括清开灵注射液，批号为 MP1231、MP1232、MP1233。绿原酸对照品、黄芩苷对照品均购自中国药品生物制品检定所。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为 C18硅胶柱，规格为150.0mm×4.6mm，5µm，流动相为：分析甲醇-浓度为 0.4%的磷酸水溶液，梯度洗脱，流速控制在1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长为323nm，进样量为20µl[1]。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称定5.31mg的绿原酸对照品和11.53mg的黄芩苷对照品，分别放置在25ml的棕色容量瓶中，绿原酸经甲醇-水=1:1溶解后定容，黄芩苷首先经纯甲醇溶解，而后经甲醇-水=1:1定容。制成浓度为0.2124mg/ml的绿原酸对照品溶液和浓度为0.4612mg/ml的黄芩苷对照品溶液，冰箱内低温保存。

2.2.2 供试品溶液制备 准确吸取1.0ml的清开灵注射液，放置在10ml的容量瓶中，经甲醇-水=1:1溶液定容至刻度，取1.0ml溶液放置在10ml的容量瓶中，甲醇-水=1:1定容至刻度。制成供试品溶液备用[2]。

2.3 线性关系考察 精密量取绿原酸、黄芩苷对照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别放置在 5ml的棕色容量瓶中，经甲醇-水=1:1定容至刻度，摇匀后经0.45微孔滤膜过滤，以2.1所示色谱条件进样检测，将标准物的峰面积作为纵坐标，将标准物的浓度作为横坐标，绘制标准曲线。经计算发现，绿原酸与黄芩苷的线性回归方程分别为：Y绿原酸=891.82C－0.6113，r=0.9998，证实绿原酸浓度范围在 4.251～105.900µg/ml之间存在良好线性关系；Y黄芩苷=671.02C－0.9891，r=0.9999，证实黄芩苷浓度范围在9.223～203.700µg/ml之间存在良好的线性关系。

2.4 精密度实验 精密量取线性关系下浓度的绿原酸、黄芩苷对照品溶液各0.8ml，经2.1色谱条件分别连续进样6次，测定绿原酸与黄芩苷的峰面积，计算RSD值。结果发现，绿原酸峰面积的RSD值为0.76%，黄芩苷峰面积的RSD值为1.82%，证实仪器具有良好的精密度。

2.5 重现性实验 取同一批次的清开灵注射液，经2.2所示条件制成供试品溶液，在2.1所示色谱条件下对绿原酸、黄芩苷的峰面积分别进行测定，计算RSD值。结果发现，绿原酸峰面积的 RSD值为1.98%，黄芩苷峰面积的RSD值为2.67%，证实重现性理想。

2.6 稳定性实验 精密量取0.1ml清开灵注射液，经2.2所示制成供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12h内以2.1所示色谱条件进样检测，计算RSD值，结果发现绿原酸峰面积的RSD值为1.7%，黄芩苷峰面积的RSD值为0.51%，证实清开灵注射液在12h内可保持足够稳定性。

2.7 加样回收实验 精密量取0.1ml样品，共3份，放置在 50ml棕色容量瓶中，分别加入绿原酸对照品0.4、0.6、0.8ml，黄芩苷对照品0.5、1.0、1.5ml，而后经甲醇-水=1:1溶解并定容，经2.1色谱条件进样检测。计算回收率，结果发现，绿原酸平均回收率为102.00%，黄芩苷的平均回收率为100.42%，见表1。

2.8 样品中绿原酸与黄芩苷含量测定 取3个批次的清开灵注射液，经2.2所示方法制成供试品溶液，在2.1所示色谱条件下进样检测，测定绿原酸与黄芩苷的峰面积，以线性回归方程计算二者的含量。结果发现，各批次样品中绿原酸与黄芩苷含量无明显差异，分别为（0.2246±0.0123）%、（4.2198± 0.2141）%。

表1 加样回收实验结果统计(%)

3 讨论

目前在临床上清开灵注射液具有良好的退烧、抗炎作用，其是由黄芩和金银花组成的一种复方中药注射剂，现代药理研究结果显示，清开灵注射液的主要有效成分为黄芩苷、绿原酸等，现阶段在清开灵注射液质量控制中，一般以这两种成分作为质控标准[3]。本次实验发现，经高效液相色谱法对清开灵注射液中绿原酸、黄芩苷进行测定时具有良好的精密度、重现性，结果准确可靠，操作简单迅速，值得关注。

[1] 唐奇.HPLC法测定复方金银花颗粒中绿原酸的含量[J].中国现代药物应用,2010,4(19):133-134.

[2] 李昌海,谭忠军.高效液相色谱法测定麻杏止咳合剂中绿原酸含量[J].中国药业,2010,19(19):21-22.

[3] 刘放,陈冰冰,吴小平,等.HPLC法测定菊花中绿原酸的含量[J].西北药学杂志,2010.25(05):350-352.

R927.2

A

1673-5846(2014)02-0030-02

吉林省集安益盛药业，吉林通化 134200