加味茯苓泽泻汤对高脂血症大鼠血清NO和MPO水平的影响

李文雄，孙 赫，韦伟标，刘文婷，华明康，陈 嘉

（1.广州中医药大学第三临床医学院，广东 广州 510405；2.广州中医药大学实验动物中心，广东 广州 510405）

高脂血症（hyperlipidemia，HLP）是临床上最常见的脂代谢紊乱性疾病，是动脉粥样硬化的主要危险因素之一，且与冠心病、脑血管病的发病率有直接的相关性[1]。随着社会压力的增加、膳食营养状况的失衡及饮酒量、吸烟量的上升，高脂血症患病率逐年增加。现代研究证明，医圣张仲景《金匾要略·呕吐哕下利病脉症治第十七》中的茯苓泽泻汤，以健脾利湿、化痰祛淤法为指导，经过加减用于治疗高脂血症的疗效肯定[2－3]。查阅诸多文献，前人所著文献大多偏重于临床疗效观察，而对茯苓泽泻汤防治高脂血症机制的研究很少。本试验在建立高脂血症大鼠模型的基础上，检测加味茯苓泽泻汤对大鼠血清一氧化氮（nitric oxide，NO）含量和髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活性的影响，旨在探讨该方剂治疗高脂血症的作用机制，为临床上应用该方剂治疗高脂血症提供一定的试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 选用健康SPF级雄性8周龄SD大鼠60只，体重180g～220g，由广州中医药大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（粤）2013－0020。

1.1.2 主要试剂 氯化钠注射液9g／mL，武汉市滨湖双鹤药业有限责任公司产品；维生素D3注射液1mL∶7.5mg：30万单位，哈尔滨市宏达动物药品厂产品；TC、TG、LDL－C、HDL－C试剂盒、一氧化氮（NO）试剂盒、髓过氧化物酶（MPO）试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供。

1.1.3 主要仪器 －20 ℃ FYL－YS－128L型冰箱，北京福意电器有限公司产品；－80℃Forma 88000型超低温冰箱，赛默飞世尔科技有限公司产品；UV－7504型单光束紫外可见分光光度计，上海欣茂仪器有限公司产品；Ultra Pure UF型和泰－凯弗隆实验室纯水系统，上海和泰仪器有限公司产品；DG5033A型酶标仪，南京华东电子集团医疗装备有限责任公司产品；BP121S型电子天平，美国塞多利公司产品；TGL－16M型高速离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司产品。

1.1.4 药物

1.1.4.1 中药 加味茯苓泽泻汤组成：瓜蒌15g，清半夏20g，薤白12g，生山楂20g，黄精10g，何首乌20g，泽泻15g，茯苓10g，白术10g，川芎10g，丹参10g，三七粉10g，水蛭10g，黄芪20g，甘草6g，广州采芝林药业产品。根据黄继汉等[4]提供的“标准体重动物由动物A到动物B的mg／kg剂量折算表”可知大鼠等效剂量为人的6.17倍，以粗略值6倍计算出大鼠相对于人的中药及辛伐他汀的等效剂量。具体药物制备方法：每剂中药加800mL纯净水煮取200mL提取液，合并每次提取液，过滤，收集滤液并分为2份（容积比约3∶2），分别浓缩至约1／3、1／2容积作为高剂量（含生药量约3g／mL）、低剂量（含生药量约2g／mL）加味茯苓泽泻汤，冷却至室温，保存于－20℃冰箱中，动物给药前以温水浴融化。

1.1.4.2 西药 辛伐他汀片10mg／片，上海信谊万象药业股份有限公司产品，辛伐他汀使用时按0.4 mg／mL溶解于纯净水中。

1.1.4.3 高脂乳剂 高脂乳剂由吐温 T－80（广州威佳济恒科技有限公司产品）60%＋食用油（广州市花都区花东信华实验动物养殖场产品）15%＋胆固醇6%＋胆酸钠2%＋丙基硫氧嘧啶0.2%（胆固醇、胆酸钠和丙硫氧嘧啶，上海蓝基生物科技有限公司产品）混合而成。具体制备方法：①食用油在80℃水浴中搅拌加热；②于加热后的食用油中加入胆固醇和丙基硫氧嘧啶，充分搅拌溶解；③再加入胆盐和适量蒸馏水，充分搅拌使胆盐溶解；④再加适量吐温，充分搅拌直至产生乳化现象；⑤缓慢加入37℃的温水稀释至100mL，即可成为稳定的高脂乳剂。备用时保存于－20℃冰箱中，大鼠灌胃前于80℃水浴中加热融化。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的制备 所有大鼠适应性喂养1周后，随机选取10只作为空白组，其余作为高脂饮食组。高脂饮食组于造模前一次性腹腔注射维生素D360万单位／kg[5]，空白组腹腔注射等体积的生理盐水。高脂饮食组采用张东等[6]筛选的高脂乳剂灌胃方法，按10mL／（kg·d）经口灌胃高脂乳剂，空白组给予等量的蒸馏水经口灌胃。试验过程中，所有大鼠自由饮水，基础饲料按每天30g／只，分早、中、晚三餐定时给予。连续给予高脂乳剂14d，末次给予高脂乳剂16h后，乙醚麻醉大鼠，用玻璃毛细管进行眦内静脉采血2mL，分离血清，检测血脂水平以确定高脂血症模型是否构建成功。

1.2.2 试验分组与给药 造模成功后随机选取40只大鼠平分为模型组、加味茯苓泽泻汤高、低剂量组和辛伐他汀组，每组10只。从造模成功后第2天开始，加味茯苓泽泻汤高、低剂量组和辛伐他汀组按每次10mL／kg灌胃给药，2次／d；模型组和空白组以同样方法给予等量蒸馏水，连续给药28d。试验过程中，空白组持续喂养基础饲料，其他各组持续喂养高脂饲料，定时记录摄食量及称量体重。

1.2.3 指标检测 检测各组大鼠治疗前后血清胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白－胆固醇（LDL－C）、高密度脂蛋白－胆固醇（HDL－C）、一氧化氮（NO）含量和髓过氧化物酶（MPO）活性。

1.2.4 统计学处理 采用SPSS 19.0进行统计学处理。数据结果以¯x±SD表示，多组间比较用单因素方差分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠体重及一般状况观察

试验过程中，空白组大鼠被毛有光泽、体质量增长稳定，精神良好，动作自如，反应灵敏；高脂饮食组大鼠给予高脂乳剂灌胃后，大鼠被毛蓬乱无光泽、甚至发黄，性情变温顺，精神困倦，嗜睡少动，排粪量较正常组偏少，色灰，质较软，体重增长较快；给药治疗期间，较肥胖的模型组大鼠体重仍有增长，但增长速度较之前缓慢，精神萎靡，动作迟缓，反应迟钝；加味茯苓泽泻汤高、低剂量组、辛伐他汀组大鼠给予相应药物治疗，但仍给予高脂乳剂灌胃，可观察到大鼠体重仍有增长，但增长速度显著降低，精神状态、动作及反应灵敏度等较前有所好转。

2.2 各组大鼠血脂指标变化结果分析

与空白组对比，模型组中TC、TG、LDL－C水平均显著升高，HDL－C水平显著降低（P＜0.05）；与模型组对比，加味茯苓泽泻汤高、低剂量组和辛伐他汀 组 中 TC、TG、LDL－C 水 平 均 显 著 降 低（P＜0.05），HDL－C水平显著升高（P＜0.05）；与空白组对比，加味茯苓泽泻汤高剂量组中4项血脂指标水平差异不显著（P＞0.05），低剂量组4项血脂指标差异显著（P＜0.05）；与辛伐他汀组对比，加味茯苓泽泻汤高剂量组4项血脂指标水平无显著差异（P＞0.05）（表1）。

2.3 各组大鼠血清NO含量和MPO活性水平变化结果分析

与空白组对比，模型组中NO含量水平显著降低（P＜0.05）、MPO活性水平显著升高（P＜0.05）；与模型组对比，加味茯苓泽泻汤高、低剂量组中NO含量水平显著升高（P＜0.05）、MPO活性均显著降低（P＜0.05）；与空白组对比，加味茯苓泽泻汤低剂量组中NO含量和MPO活性水平差异显著（P＜0.05），高剂量组中 NO水平稍低、MPO水平稍高，但差异不显著（P＞0.05）；与辛伐他汀组对比，加味茯苓泽泻汤高剂量组NO、MPO水平无显著差异（P＞0.05）（表2）。

表1 各组大鼠的血脂指标Table1 The levels of blood lipid parameters in each group of rats

表2 各组大鼠血清MPO活性和NO含量Table2 The seral of MPO activity and NO in each group of rats

3 讨论

祖国传统医学虽无高血脂的概念，但对人体膏脂已有一定的认识。早在《黄帝内经》中已有“脂者”、“油脂”、“脂膜”等记载。如《灵枢·卫气失常》篇说：“脂者，其血清，气滑少。”这是最早对HLP的记载[7]。根据高脂血症的临床表现将其归属于“痰浊”、“血淤”等症范畴。“血脂”的概念可以中医学血、津、液概括之，本属源于水谷精微，营养五脏六腑，濡润四肢百骸[1]。如若因饮食不节、劳倦过度、情志失常等直接或间接影响脏腑，使脾肾运化失职，肝胆疏泄失调，终致气机阻滞，痰淤内聚，膏脂不归正化。《灵枢·血络论》篇有云：“血气俱盛而阴气多者，其血滑，刺之则射，阳气蓄积，久留而不泻者，其血黑以浊，故不能射。”其中“其血黑以浊”形象地说明了气血津液代谢失调，破坏了“阴平阳秘”的动态平衡，以致痰淤胶结于血脉之中。临床治疗以健脾利湿、化痰祛淤法为指导，方剂选茯苓泽泻汤加味。

方中茯苓健脾化痰利湿，《医学衷中参西录》谓之：“为渗湿利痰之主药”；泽泻利水渗湿，《本草纲目》云其能“渗湿热，行痰饮；痰饮肿胀等等诸症，用此甘淡微咸以为渗泄，则浊气自降，而清气上升，所谓一除而百病与之俱除也”，与茯苓配伍，利水渗湿祛痰，共为君药。脾为生痰之源，方中白术味苦性温，既能健运脾胃以杜绝生痰之源，亦可燥湿利水化痰，与茯苓相配，健脾益气，有去水湿、截痰源、助消导、去淤滞之功；山楂健胃消食，活血化淤，《滇南本草》谓之：“消肉积滞”，方中用之健胃化痰消积，既能助白术、茯苓健运脾胃，以绝生痰之源，亦可活血化淤，以防痰盛致淤之变，二者共为臣药。佐以川芎、丹参、水蛭、三七、活血化淤，通利血脉，开郁散结；清半夏、瓜蒌、薤白温化痰湿；黄芪益气健脾；何首乌、黄精补益肝肾，益精血以固本。甘草益气和中，调和诸药，为使药。诸药合用，通阳化气、健脾蠲饮，充分体现了健脾利湿、化痰祛淤法的精神，使脾气健、痰饮清、浊邪降、膏脂除，则病自愈。

现代药理研究表明，茯苓和白术利尿作用显著，泽泻具有抑制动脉粥样硬化、降血脂、利尿、降血压、抗脂肪肝等作用[8]。山楂可以调节脂质代谢，山楂及山楂酮能显著抑制试验性高脂血症大鼠的血清TG、LDL－C 和apoB浓度，显著升高HDL－C 和apoA浓度[9]。川芎、丹参能提高血小板内环磷酸腺苷的水平，抑制血小板聚集，降低血流黏稠度，抑制血栓形成[10]。三七、水蛭有一定的调节血糖、血脂的作用，对防止动脉硬化有积极作用，且因水蛭含肝素与抗血栓素，在抗凝溶栓、扩张血管的作用显著[11－12]。应用清半夏治疗高脂血症可以从根本上阻止动脉硬化的发病，瓜蒌、薤白协同作用，降脂效果显著[13－14]。黄芪有扩张血管和扩张冠脉作用，增加血流量，减少血栓形成，降低血小板黏附作用[15]。何首乌能阻止TC在肝内沉积，并可抑制血栓的形成[16]。黄精可降低血黏度，抑制 TC和 TG的合成[17]。甘草甜素可显著降低血浆TG和TC含量，减轻动脉粥样硬化程度[9]。诸药合用，其多种有效成分通过不同机制，作用于不同环节，协同起到了降脂作用。

现代研究表明，高脂血症时，动脉粥样硬化的发生、发展与血管内皮细胞的损伤和机体的脂质过氧化所造成的损伤有关，血清过氧化脂质的含量与血清TC呈正相关[18－19]。脂质的过氧化易引发NO生成减少[20]，导致NO的生物利用度降低，而NO的生物利用度下降可诱发氧化应激[21]，损伤内皮细胞，加剧炎性反应，激活核转录因子－kB（NF－kB），造成内皮功能障碍。且高脂血症状态下，血管内皮中的巨噬细胞、炎性细胞聚集所释放的超氧阴离子（·O2－）可加速NO降解，影响L－精氨酸转化为L－胍氨酸，使NO生成减少，造成内皮依赖性舒张功能调节失衡、血管张力增加、结构重建和内皮损伤[22]。髓过氧化物酶（MPO）是氧化应激的一个主要标志物。其水平与中性粒细胞激活程度之间存在极显著的相关性，是中性粒细胞的活化标志物，通过调节NO对血管信号传递和舒张的作用，直接改变血管的炎症反应性[21]。研究发现，高脂血症时 MPO大量聚集在血管内皮下基膜，通过沉淀NO引起血管内皮功能障碍；且MPO可以调节超氧阴离子（·O2－）的生成和消耗，通过产生过氧亚硝基（ONOO－）降低NO的生物活性，引起血管内皮功能障碍[23]。故笔者通过检测高脂血症模型大鼠经治疗后MPO活性以及NO含量水平的变化，以探讨本方治疗高脂血症的机理。

本试验采用高脂乳剂灌胃SD大鼠复制高脂血症模型，初步探究加味茯苓泽泻汤对高脂血症的干预作用及其机制。试验中高脂饮食的4组大鼠血脂指标 TG、TC、LDL－C均显著升高，HDL－C显著降低，说明造模成功。治疗后，加味茯苓泽泻汤高、低剂量组均能显著降低血脂指标和MPO活性，并升高血清NO含量，高剂量加味茯苓泽泻汤对高脂血症的治疗效果较低剂量明显，其总体疗效与辛伐他汀基本等同。

综上所述，加味茯苓泽泻汤能够有效治疗高脂血症，且一定范围内升高药物浓度，其治疗效果更佳。其机制可能是通过抑制MPO活性，升高NO生物活性，以改善高脂血症血管内皮功能，从而对高脂血症的早期治疗有相当的疗效。

[1]张国胜.高脂血症的中医临床治疗进展[J].中国医药导报，2011，33（8）：121－123.

[2]展照双，王加锋.茯苓泽泻汤加味治疗高脂蛋白血症49例[J].北京中医，2004，23（1）：24－26.

[3]王加锋，郭 炜，展照双，等.茯苓泽泻加大黄山楂汤对高脂血症大鼠血脂的影响[J].吉林中医药，2012，32（4）：395－397.

[4]黄继汉，黄晓晖，陈志扬，等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算[J].中国临床药理学与治疗学，2004，9（9）：1069－1072.

[5]王园园，龙民慧，邹 民，等.大鼠动脉粥样硬化动物模型的建立和评价[J].中国实验动物学报，2008，16（6）：421－423.

[6]张 东，武海军，陈士萍等.大鼠实验性高脂血症五种造模方法的比较[J].中国药理学通报，2007，23（9）：1254－1256.

[7]崔丽娜.高脂血症的中医辨证论治研究进展[J].环球中医药，2010，3（1）：77－79.

[8]黄 珍，刘咏松.泽泻降血脂药理作用及物质基础研究进展[J].山西中医学院学报，2008，9（5）：55－56.

[9]展照双.茯苓泽泻加山楂汤对高脂血症早期干预治疗的理论与实验研究[D].山东济南：山东中医药大学，2005.

[10]杨成书，韩更辰.浅谈瘀证与活血化瘀法的临床应用[J].实用中西医结合杂志，1994，7（8）：495－497.

[11]贺小琼，熊祥玲，王珊珊，等.三七芦荟混合物调节动物血糖血脂作用研究[J].云南中医中药杂志，2004，25（2）：40－41.

[12]于丽华，姚丽华.水蛭临床应用举验[J].国医论坛，2003，18（3）：24.

[13]王玲玲，黄 莉，郑素霞，等.瓜蒌薤白半夏汤中不同半夏制品治疗高脂血症临床观察[J].世界中西医结合杂志，2008，3（9）：542－543.

[14]贺 立.瓜蒌、薤白降脂作用的析因研究[J].湖南中医药导报，2002，8（4）：205－206.

[15]阴 健，郭力弓.中药现代研究与临床应用（1）[M].北京：学苑出版社，1993：260.

[16]何首乌及其抗衰老作用.93年全国中医药学术论文集[G].北京：中国中医药出版社，1993：212.

[17]何慧明.黄精降脂方降血脂及抗动脉粥样硬化的实验研究[D].辽宁沈阳：辽宁中医学院，2000.

[18]陆再英，钟南山.内科学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2008：268－269.

[19]Suido H，Tanaka T，Tabei T，et al.A mixed green vegetableand fruit beverage decreased the serum level of low－density liprotein cholesterol in hyperchole－sterolemic patients[J].J Agr Food Chem，2002，50（11）：33－36.

[20]林 丽，唐朝枢，袁文俊.血管内皮的保护策略[J].国外医学：生理、病理科学与临床分册，2003，23（4）：334－337.

[21]Eiserich J P，Baldus S，Brennan M L，et al.Myeloperoxidase，a leukocyte－derived vascular NO oxidase[J].Science，2002，296（5577）：2391－2394.

[22]蔡 辉，徐玉顺，蔡佳宇，等.吡格列酮对高脂血症大鼠血清一氧化氮、髓过氧化物酶的影响[J].微循环学杂志，2010，20（4）：26－28.

[23]王叶红.吡格列酮通过抑制髓过氧化物酶保护高脂血症大鼠血管内皮功能[D].山西太原：山西医科大学，2008.