核转录因子、cMYC在弥漫大B细胞淋巴瘤亚型中的表达及意义

肖建波等

[摘要] 目的 探讨不同亚型弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）组织中核转录因子κB （NF-κB）、原癌基因cMYC的表达及临床意义。 ABC-DLBCL 亚型，NF-κB、cMYC的表达与生存相关。在GCB-DLBCL亚型中，NF-κB和cMYC的阳性或阴性表达与总生存不相关。 结论 NF-κB、cMYC在ABC-DLBCL亚型表达率高于GCB-DLBCL亚型，同时可能是影响ABC-DLBCL亚型预后的不利因素。

[关键词] 非霍奇金淋巴瘤；弥漫大B细胞淋巴瘤；核转录因子NF-κB

[中图分类号] R733.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）04（b）-0010-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance and expression of determination of nuclear transcription factor κB （NF-κB）， and cellular myelocytomatosis oncogene （cMYC）， in patients of different subtypes of diffuse large B cell lymphoma （DLBCL）. Methods The expressions of NF-κB and cMYC in diffuse large B cell lymphoma in 57 cases were detected by immunohistochemistry. And its relationship with clinical pathological characteristics was analyzed. Results The positive expression of NF-κB was related with international prognosis index （IPI） and pathological subtype， pathological subtype the positive expression of cMYC was related with pathological subtype. The expression of NF-κB in ABC-DLBCL was significantly higher than that in GCB-DLBCL， positive rate of pathological subtypepathological subtypeits expression in ABC-DLBCL， GCB-DLBCL tissues were 72.7%， 41.6% respectively， there was significant difference between two groups （P = 0.029）. The expression of cMYC in ABC-DLBCL was significantly higher than that in GCB-DLBCL， its expression in ABC-DLBCL， GCB-DLBCL tissues were 66.7%， 54.4% respectively， there was statistical difference between two groups （P = 0.035）. In ABC-DLBCL subtype， the expression of NF-κB and cMYC were related with overall survival. In GCB-DLBCL subtype， the expression of NF-κB and cMYC were not related with overall survival. Conclusion The expression of NF-κB and cMYC in ABC-DLBCL are significantly higher than those in GCB-DLBCL. In the same time， they may be adverse prognostic factors for ABC-DLBCL subtype.

[Key words] Non Hodgkin lymphoma； Diffuse large B cell lymphoma； NF-κB

弥漫大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphomas，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）中最常见的一种亚型，占NHL的30%～40%，是一种异质性很强的疾病，在临床表现、组织形态和预后等多方面都具有很大差异。因此Alizadeh等[1]根据基因表达谱不同，将DLBCL分为生发中心型（germinal center B-cell-like，GCB）和活化B细胞型（activated B-cell-like，ABC）。但由于受技术条件的限制，基因芯片技术尚无法在临床中普遍应用。2004年Hans等[2]应用免疫组化的方法，通过检测淋巴瘤组织中CD10、BCL6和MUM1的表达情况进行分型，分为生发中心型（GCB）和非生发中心型（non-GCB，ABC）两个亚型。该免疫组化分型与基因芯片的分型结果具有较高的符合率，其中GCB型为71%，非GCB型为88%。在2008年WHO造血和淋巴组织肿瘤分类方案中，建议可用免疫组化方法对DLBCL进行分型。近年研究发现，DLBCL的两种亚型在预后上有很大差别，这与两种亚型的细胞遗传学不同有关，临床表现在蛋白表达不同。其中核转录因子κB（nuclear transcription factor κB，NF-κB）及原癌基因cMYC在DLBCL淋巴瘤的发生发展中起重要作用，本研究拟探讨NF-κB p65、cMYC在DLBCL不同亚型之间的表达情况及临床意义。endprint

1.2 免疫组化方法及阳性结果判定

患者淋巴结组织蜡块标本经10%中性福尔马林溶液固定，常规脱水，石蜡包埋，4 μm厚切片，切片常规脱蜡水化；0.3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，10%小牛血清封闭切片，滴加一抗，4℃过夜。PBS洗后滴加广谱生物素化二抗（1∶200），SP复合物（1∶200），DAB显色，苏木精复染胞核，脱水，透明，封片。分别设相应的阳性、阴性、空白对照。NF-κB p65及cMYC的主要阳性染色部位在细胞核和细胞浆。NF-κB p65及cMYC阳性表达为棕黄色或棕褐色细小颗粒。用已知阳性片为阳性对照，所有病理标本切片用PBS液代替一抗作阴性对照。阳性反应为细胞浆内或细胞核内出现黄色或棕黄色颗粒。阳性反应为细胞浆内或细胞核内出现黄色或棕黄色颗粒，阳性反应细胞> 10%为阳性结果。

3 讨论

DLBCL是常见的NHL之一，尽管美罗华为基础的化疗方案在DLBCL中取得了很大成功，然而高危患者的预后仍然较差，尤其是在ABC亚型治疗效果不佳。在临床工作中，识别特殊患者进行规范的分层治疗，成为一个亟待解决的问题。

目前，IPI是公认的DLBCL的独立不良预后因素，IPI为3～5分患者预后明显差于0～2分患者，许多学者提出以此进行分层治疗，最近有文献报道NF-κB与IPI同为DLBCL的独立不良预后因素，NF-κB阳性表达预后差[3]。NF-κB是广泛存在于真核生物细胞内的一种可诱导的转录因子家族蛋白，与淋巴瘤的发生、发展密切相关。董佑红等[4]报道DLBCL患者组织中NF-κB的表达与IPI评分相关，本研究也发现了NF-κB在DLBCL组织中表达，NF-κB p65的表达率为59.6%，并且高IPI评分组NF-κB p65阳性表达率高，与报道相似，近而推测NF-κB表达很可能是影响DLBCL的一个不利因素。

研究发现NF-κB在DLBCL的不同亚型中，表达的临床意义不同，与ABC亚型预后不良有关[5]。Davis等[6]应用IκBα的特异性抑制剂阻断NF-κB通路后发现ABC亚型组的细胞出现快速的凋亡，而GCB亚型组细胞不受影响，提示NF-κB活化与ABC亚型DLBCL的增殖有关。孟伟等[7]报道NF-κB在ABC亚型中表达高于GCB型。NF-κB在ABC亚型DLBCL中的意义可能不同于GCB亚型。本研究NF-κB p65在ABC、GCB亚型组的表达率分别为72.7%、41.6%，ABC亚型表达率明显高于GCB亚型。生存分析发现，在ABC亚型DLBCL中，NF-κB p65阳性与阴性表达组的生存曲线明显不同，阳性组生存率低于阴性表组，差异有统计学意义。但在GCB亚型中，本研究并未观察到类似现象，提示NF-κB p65很可能是ABC亚型DLBCL的不利预后因素。

MYC基因是位于8q24的原癌基因，对细胞增殖、生长、分化、凋亡及促进新生血管形成等方面发挥重要作用[8]。许多国内外研究表明cMYC基因异常与NHL 的不良预后相关，MYC重排是独立于IPI的不良预后因子[6-9]。cMYC基因异常与DLBCL预后密切相关，可作为预测DLBCL的预后因素并指导治疗[9]。MYC基因重排是Burkitt淋巴瘤的特征，也发生在5%～10%的DLBCL患者中。近年来发现DLBCL患者的一个重要的危险因素是MYC易位，特别是它与BCL-2易位相连接时，预后极差。Johnson等[10]和Shimin等[11]研究发现，MYC蛋白在DLBCL的两种亚型中均有表达，当它与BCL-2共同表达时预后不佳，对标准的R-CHOP方案治疗效果差，MYC蛋白的高表达与易位相关。在DLBCL患者中，常有cMYC蛋白过表达的现象，Mossafa等[12]发现DLBCL患者中出现cMYC基因扩增，并且这些患者的预后较差。本研究也发现了cMYC在DLBCL中的表达，在ABC及GCB亚型中的表达率分别为66.7%、54.4%，差异有统计学意义。生存分析显示，在ABC亚型DLBCL中，cMYC表达阳性组与阴性组的生存曲线明显不同，阳性组生存率低于阴性组，差异有统计学意义。但在全部DLBCL及GCB亚型组并未观察到类似现象。MYC的负性预后作用在与BCL-2共表达患者中明显[10]，MYC基因扩增与BCL-2基因扩增正相关，均为ABC型显著高于GCB型[13]，BCL-2是NF-κB的重要靶基因，在ABC亚型中，常伴随NF-κB、BCL-2的过表达，由此推测在ABC亚型，cMYC的负性预后作用可能与NF-κB、BCL-2的表达有关，但仍需进一步研究证实。

本研究发现，NF-κB p65和cMYC在ABC亚型的表达率均高于GCB亚型，在ABC亚型，它们的阳性表达均与预后差相关，它们的临床意义有相似之处。既往研究发现ABC亚型DLBCL，许多基因上调，如MYC、BCL-2、cyclinD2等，Lim等[14]研究发现这些基因的上调可能与NF-κB在ABC亚型中不断激活有关。由此本研究推测NF-κB p65和cMYC可能在ABC亚型的发生、发展过程中存在一定联系，但其机制仍不清楚，需待进一步研究探讨。在ABC亚型，NF-κB p65、cMYC的表达与生存密切相关，有可能成为ABC亚型新的预后指标，需在临床工作中进一步研究证实。

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（收稿日期：2013-11-26 本文编辑：卫 轲）endprint

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