反相高效液相色谱法在吗替麦考酚酸酯合成新工艺检测中的应用

胥秀英，谢云，刘红，张洪兰，郑一敏

(1.重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆 400054;

2.北京大学国际医院集团重庆大新药业股份有限公司，重庆 400070; 3.重庆市现代中药制药工程技术研究中心，重庆 400054)

Chongqing 400054，China;2.Peking University International Hospital Group，Daxin Pharmaceutical Co.Ltd.，Chongqing 400070，China;3.Chongqing Modern Chinese Medicine Pharmacy Engineering Research Center，Chongqing 400054，China)

反相高效液相色谱法在吗替麦考酚酸酯合成新工艺检测中的应用

胥秀英1，3，谢云2，刘红1，3，张洪兰2，郑一敏1，3

(1.重庆理工大学药学与生物工程学院，重庆 400054;

2.北京大学国际医院集团重庆大新药业股份有限公司，重庆 400070; 3.重庆市现代中药制药工程技术研究中心，重庆 400054)

采用高效液相色谱法检测吗替麦考酚酸酯合成新工艺。采用Boston RP－18柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，流动相为乙腈∶0.05%磷酸水(35∶65)，流速为1.0 mL·min－1，检测波长为251 nm，柱温为室温。结果表明:吗替麦考酚酸酯线性范围为1.98～9.90 mg·L－1(y= 6.4×105x－3.5×105，r=0.999 1)，加样回收率为101.82%(n=5)，RSD=1.58%。该方法简便、准确、灵敏、重复性好，可作为一种检测手段。

反相高效液相色谱法;麦考酚酸酯;检测

吗替麦考酚酸酯(mycophenolate mofetil，MMF)是一种新型的免疫抑制剂，临床上与环孢素及肾上腺皮质激素合用于预防和治疗肾、肝、心脏等器官移植后的排斥反应［1］。传统合成方法获得的产物颜色较深，后续处理困难，导致产品纯度差、收率低。针对上述情况，在合成过程中采用添加鏊合剂的方法，降低反应温度及反应时间，以达到提高产物纯度及收率，实现环境友好的目的。本文采用反相高效液相色谱法对合成过程进行监测。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(Delta 600泵，2487检测器，Empower工作站);乙腈、甲醇:色谱纯;水:重庆理工大学药学与生物工程学院实验室自制;吗替麦考酚酸酯:北大国际医院集团重庆大新药业股份有限公司提供(批号为080301);吗替麦考酚酸酯样品:重庆理工大学药学与生物工程学院实验室自制。

2 实验方法

2.1 色谱条件选择

［2－4］，对色谱条件进行了筛选，最终以如下色谱条件分离较好，操作方便。色谱条件:色谱柱为C18(4.6 mm×250 mm，5μm);流动相为乙腈∶0.05%磷酸(35∶65);检测波长为251 nm，流速为1.0 m L·min－1;柱温为室温。

2.2 溶液配制

对照品溶液配制:精密称取吗替麦考酚酸酯标准品适量置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成质量体积比为0.99 mg·mL－1的对照品溶液，0.45μm滤膜滤过，备用。

供试品溶液配制:取实验室自制的吗替麦考酚酸酯样品适量置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成质量体积比为0.2 mg·mL－1的供试品溶液，0.45μm滤膜滤过，备用。

螯合剂溶液制备:取优化后的螯合剂适量，制成质量体积比为0.2 mg·mL－1的溶液，0.45μm滤膜滤过，备用。

底物2－羟乙基吗啉溶液制备:取2－羟乙基吗啉10μL，用甲醇稀释定容为1 m L。

底物麦考酚酸溶液制备:取麦考酚酸适量，用甲醇制成质量体积比为0.2 mg·mL－1的溶液，0. 45μm滤膜滤过，备用。

2.3专属性实验

在本文色谱条件下，分别将底物、螯合剂和产物各进样10μL，记录色谱图。结果表明:底物和螯合剂在吗替麦考酚酸酯相同保留时间处均无吸收峰，提示对样品测定不干扰(见图1～5)。

图1 底物2－羟乙基吗啉色谱图

图2 底物麦考酚酸色谱图

图3 螯合剂色谱图

图4 吗替麦考酚酸酯标准品色谱图

图5 合成吗替麦考酚酸酯样品色谱图

2.4 线性关系考察

精密量取对照品溶液，在本文色谱条件下，分别进样2、4、6、8、10μL，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，测得标准曲线为y=6.4×105x～3.5× 105，r=0.999 1，线性范围1.98～9.90 mg ·mL－1。

2.5 精密度实验

在本文色谱条件下，取对照品溶液连续进样8 μL共5次，计算峰面积RSD为0.69%，结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性实验

取吗替麦考酚酸酯供试品溶液，在本文色谱条件下，分别在2、4、6、8、16 h各进样10μL，计算峰面积RSD为1.64%。结果表明，样品在16 h内稳定性好。

2.7 重复性实验

取同一批吗替麦考酚酸酯供试品6份，分别按本文方法制备成样品溶液，测定峰面积，计算吗替麦考酚酸酯含量RSD为1.39%。结果表明，测定方法重复性好。

2.8 回收率实验

称取一定量吗替麦考酚酸酯，按对照品与样品量为1∶1加入对照品，按本文样品溶液制备方法制备5份供试液。在本文色谱条件下分别进样10μL，计算回收率为101.82%(n=5)，RSD= 1.58%，结果见表1。

2.9 样品含量测定

按2.2节方法制备合成3批吗替麦考酚酸酯供试品溶液，分别测定峰面积，计算含量，结果见表2，表明该合成工艺稳定。

表1 吗替麦考酚酸酯回收率试验结果(n=5)

表2 3批吗替麦考酚酸酯含量测定结果(n=3)

3 结束语

本文采用RP－HPLC法测定吗替麦考酚酯含量，底物及螯合剂对测定均没有影响，说明该方法的专属性好。同时该方法简单、快速、稳定性好，适用于吗替麦考酚酯含量测定。

在色谱筛选过程中，曾采用甲醇－水、甲醇－0.05%冰乙酸或乙腈－水、乙腈－0.05%冰乙酸作为流动相，其分离效果均不如磷酸好，最后筛选确定最佳流动相为乙腈∶0.05%磷酸(35∶65)。

参考文献:

［1］樊宏伟，朱余兵，于翠霞，等.麦考酚酸酯片在健康人体在药动学和生物等效性［J］.中国新药与临床杂志，2007，26(3):180.

［2］王素卿，贺广峰，李艳玲.高压液相色谱法测定麦考酚酸的含量［J］.河北化工，2008，31(1):69.

［3］阳国平，谭鸿毅，刘畅，等.吗替麦考酚酯胶囊在健康人体中的相对生物利用度［J］.中国医院药学杂志，2007，27(4):476.

［4］余自成，江涛，瞿江媛，等.用HPLC－MS/MS法同时测定Caco－2细胞单层转运介质中吗替麦考酚酯和麦考酚酸的浓度［J］.药学服务与研究，2012，12(6):423.

(责任编辑 刘舸)

Application of the RP-HPLC in Synthesis Technology of
M ycophenolate M ofetil

XU Xiu－ying1，3，XIE Yun2，LIU Hong1，3，ZHANG Hong－lan2，ZHENG Yi－min1，3(1.School of Pharmaceutical and Biological Engineering，Chongqing University of Technology，

A method for the simultaneous determination ofmycophenolate mofetil was developed by HPLC.The analysiswas carried outwith boston C18column(4.6mm×250 mm，5μm)，themobile phase was CH3CN－0.05%H3PO4(35∶65)，the flow－rate was 1.0 m L·min－1，the wave－length was 251 nm and the temperaturewas room temperature.The liner range of MMFwas1.98～9.90 mg·L－1(y=6.4×105x－3.5×105，r=0.999 1).Under the conditions，the correlation coefficient was 0.999 1.The average recovery was 101.82%(n=5)with RSD=1.58%.The method is simple，fast and can be used for determining MMF in the synthesis technology.

RP－HPLC;mycophenolate mofetil;determination

R914.5

A

1674－8425(2014)01－0060－03

Chongqing 400054，China;2.Peking University International Hospital Group，Daxin Pharmaceutical Co.Ltd.，Chongqing 400070，China;3.Chongqing Modern Chinese Medicine Pharmacy Engineering Research Center，Chongqing 400054，China)

10.3969/j.issn.1674－8425(z).2014.01.012

2013－06－28

国家科技重大专项课题(2011ZX09203－001－11)

胥秀英(1965—)，女，研究员，主要从事天然药物质量控制技术、中药新药研究。

胥秀英，谢云，刘红，等.反相高效液相色谱法在吗替麦考酚酸酯合成新工艺检测中的应用［J］.重庆理工大学学报:自然科学版，2014(1):60－62.

format:XU Xiu－ying，XIE Yun，LIU Hong，et al.Application of the RP－HPLC in Synthesis Technology ofMycophenolate Mofetil［J］.Journal of Chongqing University of Technology:Natural Science，2014(1):60－62.