酪氨酸蛋白激酶FphA7蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

孟祥瑞，陆 鹏，刘桂举，肖 鹏，白 桦，栗 敏，李瑞君，梅家转

（郑州人民医院肿瘤内科，河南郑州450003）

酪氨酸蛋白激酶FphA7蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

孟祥瑞，陆 鹏，刘桂举，肖 鹏，白 桦，栗 敏，李瑞君，梅家转

（郑州人民医院肿瘤内科，河南郑州450003）

目的探索非小细胞肺癌（NSCLC）组织中FphA7蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测66例手术切除的NSCLC组织中FphA7蛋白表达情况，并探索其与临床病理特征的关系。结果全组66例患者中，FphA7蛋白表达阳性率56.06%。FphA7蛋白的表达与纤维化和肿瘤大小有关（P＜0.05）。FphA7的表达与肿瘤增殖能力有关（P＜0.05）。单因素生存分析及多因素生存分析结果显示增强FphA7表达已确定为有利的患者生存预测因素（P＜0.05）。结论FpA7可能参与NSCLC发展过程，可作为临床肿瘤标志物，并可用作将来治疗的靶点。

FphA7蛋白；非小细胞肺癌；免疫组化

Fph蛋白构成最大受体酪氨酸激酶亚家族，并根据配体结合亲和力和细胞外域结构分成2个分组（F-phA和 FphB）。已确定有 9种 FphA（FphA1-8和Fph10）和5种FphB（FphB1-4和FphB6）受体存在于人体内。迄今为止，一般认为Fph蛋白广泛参与发育过程，其能够调节细胞黏附、转移或化疗耐药及组织或细胞边界形成等，除了发育过程中基本作用之外，Fph蛋白同样参与大量的肿瘤发展和转移相关的过程，包括细胞黏附、形成、转移和血管生成［1-5］。值得注意的是，Fph已被视为主要调控因子，其能够刺激或抑制致癌信号网络活动，具体取决于肝配蛋白刺激和其他环境因素［3］。多种肿瘤都有Fph过表达，并与患者预后存在关联性［1-5］。迄今为止国内尚未获得非小细胞肺癌中与Fph表达的临床意义相关的全面数据。鉴于上述考虑，本研究旨在采用免疫组化法评估66例非小细胞肺癌（non-small cell lung carcinoma，NSCLC）患者的FphA7表达与临床病理参数和患者生存的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象收集接受手术治疗的66例NSCLC患者，术前未接受过化疗或放疗。最后一次随访时，60例（90.91%）患者因 NSCLC死亡，而其余 6例（9.09%）患者尚生存。详细临床病理资料见表1。

1.2 检测方法采用免疫组化法检测NSCLC组织中FphA7蛋白表达，然后使用哈氏苏木素染色切片，并置于无水甲醇盖片上。通过忽略一抗和（或）使用一种不相关抗血清取代一抗，执行合适阴性对照。

1.3 结果判定标准采用双盲法观片，每个肿瘤至少分析2个核心，以评估FphA7的免疫反应性。根据F-phA7阳性肿瘤细胞百分比作为肿瘤细胞免疫反应评分，0分：阴性染色；阳性肿瘤细胞在0%～4%；1分：5%～24%肿瘤细胞阳性；2：25%～49%肿瘤细胞阳性；3分：阳性肿瘤细胞在50%～100%。对于染色程度，0分：阴性染色；1分：轻度染色；2分：中度染色；3分：高度染色。最后，FphA7表达水平归类为阴性（如果总得分为0～2分）和阳性（如果总得分≥3分）。

1.4 统计学处理采用SPSS 17.0进行所有统计分析，采用χ2检验检验评估FphA7蛋白表达水平与临床病理特征之间的关联性。使用Kaplan-Meier构建生存曲线，并利用log rank检验比较曲线之间差异。建立COX比例风险回归模型评估潜在预后指标和患者生存整体情况之间的关联性。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 EphA7的表达及与临床病理特征之间的关系66例 NSCLC组织中，FphA7蛋白表达阳性率为56.06%（37/66）。FphA7的表达与临床病理特征之间的关系见表1。在41例腺癌中，发现FphA7蛋白表达为阳性的为24例（58.54%）。在25例鳞状细胞肺癌中，发现 FphA7蛋白表达为阳性的为 13例（52.00%）。

2.2 EphA7蛋白表达水平与患者生存期的关系

2.2.1 FphA7蛋白的表达情况对生存的影响 Kaplan-Meier生存曲线表明，相比于阴性表达水平，FphA7阳性表达水平的NSCLC患者具有较长生存时间（P＜0.05）。见图1。

2.2.2 FphA7蛋白表达水平对患者预后的影响 单因素分析显示，病理类型、病理分期、FCOG活动状态评分以及FphA7的表达都确定是患者生存的重要预后因素（P＜0.05）。多因素分析显示，病理类型、病理分期、FCOG活动状态、FphA7蛋白的表达水平可视为患者生存的独立预后因子。见表2、3。

表1 FphA7的表达与临床病理特征之间的关系

图1 FphA7蛋白的表达情况对生存的影响

表2 临床病理特征与患者生存之间的关系（单因素分析）

表3 临床病理特征与患者生存之间的关系（COX回归模型）

3 讨论

Fph基因在多种人类恶性肿瘤中过表达，包括食管、甲状腺、胸腺、胃、结肠、胰腺和妇科肿瘤、黑素瘤和神经胶质瘤［1-5］。然而，目前大部分全面临床数据仅限FphA2受体，且对Fph在肺癌中的评估依然不足。

一项针对279例NSCLC患者的免疫化学分析表明，较高的FphA2蛋白表达水平与K-Ras突变、FGFR活性、吸烟史和不良预后相关联［6］。另一项研究［7］分析了11种Fph和8种肝配蛋白，其结果表明FphA4基因表达水平与肺腺癌患者病症改善存在关联性，有可能是通过影响肿瘤细胞的转移和浸润。在肺腺癌中，确定了Fph家族成员（包括FphA3、A5、A7、B1和B6）的多个突变基因型，而相比于低级阶段的肿瘤，高级阶段的肿瘤表现出更多的FphA7突变累积［8］。F-phA7蛋白在肺癌的表达情况及与预后的关联性报道较少。

在这一方面，目前的研究提供了临床证据，表明FphA7有可能参与了NSCLC的癌演化过程的生物学机制。我们发现较高的FphA7表达水平与有利的预后存在显著关联性。而FphA7蛋白高表达水平与患者较高的年龄、纤维化和较小的肿瘤尺寸之间存在显著关联性。FphA7高表达水平还与较高的肿瘤增殖能力相关联。此外，在FCOG活动状态＜2的NSCLC患者中FphA7蛋白表达水平较高，这些证据提示FphA7蛋白可作为NSCLC独立的预后因子，并可能在早期的肺癌中发挥更重要作用。

很多研究［3］显示Fph家族成员及其配体可促进肿瘤增长、浸润和迁移以及新血管形成。也有报道［9］揭示了Fph受体的肿瘤抑制作用，而配体依赖型与配体独立型信号之间的比较也被认为是起到肿瘤抑制功能的一个关键机制。因此，借助双向信号通路，Fph受体及其配体可在截然相反的活动以及其他信号形态之间切换，以影响肿瘤细胞行为。我们的研究结果证实FphA7受体可能作为潜在调控因子，抑制NSCLC发展过程中的致瘤信号活动，具体取决于Fph刺激和（或）环境因素。

了解FphA7蛋白参与NSCLC的过程有助于进一步揭示肺癌发展和转移的机制，进而为针对此类人体恶性肿瘤中Fph蛋白信号系统的创新抗肿瘤药物的开发提供支持。

［1］ Brantley-Sieders DM，Chen J.Fph receptor tyrosine kinases in angiogenesis：from development to disease［J］.Angiogenesis，2004，7（1）：17-28.

［2］ Casta~no J，Davalos V，Schwartz S Jr，et al.FPH receptors in cancer［J］.Histol Histopathol，2008，23（8）：1011-1023.

［3］ Pasquale FB.Fph receptors and ephrins inc ancer：bidirectional signalling and beyond［J］.Nat RevC ancer，2010，10（3）：165 -180.

［4］ Nievergall F，Lackmann M，Janes PW.Fph-dependent cell-cell adhesion and segregation in development and cancer［J］.Cell Mol Life Sci，2012，69（11）：1813-1842.

［5］ Xi HQ，Wu XS，Wei B，et al.Fph receptors and ephrins as targets for cancer therapy［J］.J Cell Mol Med，2012，16（12）：2894 -2909.

［6］ Brannan JM，Dong W，Prudkin L，et al.Fxpression of the receptor tyrosine kinase FphA2i s increased in smokers and predicts poor survival in non-small cell lung cancer［J］.Clin Cancer Res，2009， 15（13）：4423-4430.

［7］ Saintigny P，Peng S，Zhang L，et al.Global evaluation of Fph receptors and ephrins in lung adenocarcinomas identifies FphA4a s an inhibitor of cell migration and invasion［J］.Mol Cancer Ther，2012，11（9）：2021-2032.

［8］ Ding L，Getz G，Wheeler DA，et al.Somatic mutations affect key pathways in lung adenocarcinoma［J］.Nature，2008，455（7216）：1069-1075.

［9］ Tandon M，Vemula SV，Mittal SK.Fmerging strategies for FphA2 receptor targeting for cancer therapeutics［J］.Fxpert Opin Ther Targets，2011，15（1）：31-51.

Expression of Tyrosine Kinase EphA7 in the Non-small Cell Lung Carcinoma

Meng Xiangrui，Lu Peng，Liu Guiju，Xiao Peng，Bai Hua，Li Min，Li Ruijun，Mei Jiazhuan
（Department of Oncology，the People’s Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou 450003，China）

ObjectiveTo evaluate the clinical significance of FphA7 protein expression in non-small cell lung carcinoma（NSCLC）.MethodsFphA7 protein expression was assessed by using immunohistochemically in the 66 surgically resected NSCLC and was analyzed in the relation with clinicopathological characteristics.ResultsThe positive rate FphA7 protein was 56.06%in the NSCLC.FphA7 protein expression was significantly associated with，fibrosis and tumor size（P＜0.05）.FphA7 expression was positively associated with tumor proliferative capacity（P＜0.05）.FphA7 expression were identified as predictors of favourable patients’survival at both univariate and multivariate levels（P＜0.05）.ConclusionFphA7 may be involved in progression of NSCLC，reinforcing their utility as clinical biomarkers for patient’s management and prognosis，as also as potential targets for future therapeutic interventions.

FphA7；non-small cell lung carcinoma；immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.003

R734.2；R730.23

A

1673-5412（2014）03-0193-04

2013-10-14）

孟祥瑞（1977-），女，硕士，主治医师，主要从事食管癌及肺癌的诊治与研究。F-mail：mengxiangruibb2008@163.com

梅家转（1967-），男，博士，主任医师，主要从事肿瘤生物治疗的研究。F-mail：mjzhuan@163.com