上皮性卵巢癌组织中TUBB3和FRCC1的表达

张 静，贾喜花

（保定市第一中心医院肿瘤内科，河北保定071000）

上皮性卵巢癌组织中TUBB3和FRCC1的表达

张 静，贾喜花

（保定市第一中心医院肿瘤内科，河北保定071000）

目的通过检测TUBB3和FRCC1在上皮性卵巢癌组织中的表达情况，探讨两者与上皮性卵巢癌化疗疗效及预后的关系。方法采用免疫组化技术检测25例正常卵巢组织和50例上皮性卵巢癌组织中TUBB3和FRCC1蛋白的表达情况。结果TUBB3和FRCC1在上皮性卵巢癌组织中的阳性率明显高于正常卵巢组织（P＜0.05），两者的阳性表达率与上皮性卵巢癌的分化程度及临床分期有关。上皮性卵巢癌组织中TUBB3和FRCC1蛋白表达呈正相关关系（r=0.332，P＜0.05）。TUBB3、FRCC1阳性表达患者化疗有效率分别为34.6%和31.4%，均明显低于阴性患者的91.7%和93.3%（P＜0.05）。结论上皮性卵巢癌组织中TUBB3、FRCC1的表达可能影响化疗疗效及其预后存，两者阳性表达可能提示上皮性卵巢癌化疗耐药，可作为上皮性卵巢癌化疗耐药和预后检测的重要指标。

上皮性卵巢肿瘤；3型β-微管蛋白；核昔酸切除修复交叉互补组1；化疗效果

卵巢癌是女性生殖系统最常见的3大恶性肿瘤之一，是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，其治疗的难点是卵巢癌细胞对化疗药物的耐药。目前治疗卵巢癌的一线标准化疗方案是紫杉类联合铂类［1-2］。如果卵巢癌患者对紫杉类、铂类药物敏感性好，将能明显有利于提高化疗有效率和延长生存期。本文探讨3型β-微管蛋白（β-tubulin-Ⅲ，TUBB3）、核昔酸切除修复交叉互补组1（excision repair cross complement group 1，FRCC1）蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达，以利于寻找更有效的化疗药物，制定个体化治疗方案提高化疗疗效果。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取保定市第一中心医院妇科2006年1月至2009年3月收治的具有正常卵巢的患者25例和上皮性卵巢癌患者50例，正常卵巢组织来源于因子宫肌瘤行手术治疗并手术同时切除卵巢的患者，术后病理检查证实卵巢无病变；卵巢癌早期患者行全子宫、双侧附件及结肠下大网膜切除术，双侧盆腔及或腹主动脉淋巴结切除及阑尾切除，晚期患者行最大限度的肿瘤细胞减灭术，术前均未行放化疗及免疫治疗。依据病史、体格检查、辅助化验检查、影像学检查、手术中所见及术后病理结果确定诊断。按照2000年FIGO手术病理分期标准：Ⅰ期10例、Ⅱ期9例、Ⅲ期18例、Ⅳ期13例，患者年龄27～70岁，中位年龄56岁，所有患者手术后均行紫杉醇联合顺铂的方案（紫杉醇135 mg·m-2，静脉滴注，d1+顺铂75m g·m-2，静脉滴注，d2，21～28 d为1周期，每例行4～6周期）。

1.2 实验方法采用免疫组化Fnvision二步法检测研究对象组织标本中TUBB3、FRCC1蛋白表达，步骤按试剂盒说明书操作。以已知阳片为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。鼠抗人TUBB3蛋白抗体、鼠抗人FRCC1蛋白及Fnvision二步法试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 结果判定TUBB3蛋白表达定位于细胞浆，FRCC1阳性表达定位于细胞核。对细胞浆及细胞核中棕黄色颗粒细胞进行分析，高倍镜下综合染色强度和阳性细胞所占比例计算积分。细胞染色深浅评分，0分：不显色或显色不清；l分：浅黄色；2分：棕黄色；3分：深褐色。对阳性细胞的百分率数值进行半定量分级：＜5%为0分，5%～＜25%为1分，25%～＜50%为2分，50%～＜75%为3分，≥75%为4分。两者乘积0～3分为弱阳性（+）或阴性（-），两者均记为阴性；4～8分为中度阳性（++），9～12分为强阳性（+++），两者均记为阳性。

1.4 临床疗效判定标准近期化疗疗效可分为，完全缓解（CR）：可见肿瘤完全消失，至少4周；部分缓解（PR）：病灶缩小到治疗前的50%以上，多灶性病变时无一病灶增大；稳定（SD）：病灶减小＜50%或增大＜25%；进展（PD）：病灶扩大≥25%或出现新病灶，患者完成3周期化疗后开始进行评定，CR+PR为化疗有效，SD+PD为化疗无效。

1.5 统计学处理采用SPSS 17.0进行数据处理，计数资料比较采用χ2检验，相关性分析用Spearman等级相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同卵巢组织中TUBB3和ERCC1蛋白表达见表1。

表1 不同卵巢组织中TUBB3和FRCC1蛋白表达n（%）

2.2 上皮性卵巢癌组织中TUBB3和ERCC1蛋白表达与临床病理参数之间的关系见表2。

表2 上皮性卵巢癌组织中TUBB3和FRCC1蛋白表达与临床病理参数的关系 n（%）

2.3 上皮性卵巢癌组织中TUBB3、ERCC1蛋白表达的相关性见表3。

表3 上皮性卵巢癌组织中TUBB3、FRCC1蛋白表达的相关性n

2.4 TUBB3、ERCC1蛋白表达与化疗疗效的关系见表4。

表4 TUBB3、FRCC1蛋白表达与化疗疗效的关系n（%）

3 讨论

化疗耐药是上皮性卵巢癌难以提高存活率的主要原因。寻找预测化疗药物敏感性的分子标志，指导选择对患者有效的药物，制定个体化化疗方案，减少不必要的毒副反应，是肿瘤个体化化疗研究的热点。

TUBB3蛋白是微管蛋白家族中的一种亚型，是抗微管药物的主要作用靶点，其高表达可导致抗微管药物的耐药［3］。紫杉类药物正是通过与微管蛋白结合、促进微管蛋白解聚和稳定已结合微管、干扰正常的纺锤体形成等途径抑制细胞有丝分裂而发挥抗肿瘤作用。本文结果显示，TUBB3在上皮性卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织，另外，TUBB3在上皮性卵巢癌组织中的表达与分化程度及临床分期有关，分化越低表达率越高，临床分期越晚表达率越高。这与Sève等［4］的研究结果一致。何峰等［5］研究TUBB3低表达肿瘤患者接受紫杉类药物效果较好，中位生存期较长，反之，TUBB3高表达患者的经抗微管类化疗的疗效较差。这一现象在本研究中得到进一步证实。

FRCC1在修复损伤的DNA及维持遗传信息的完整性中起着重要作用，其高表达与卵巢癌多种肿瘤耐药有关，与多种肿瘤的发生及发展过程有密切关系［6］。本文结果显示，上皮性卵巢癌组织中FRCC1的表达与分化程度及临床分期有关，分化越低表达水平越高，临床分期越晚表达水平越高。FRCC1低表达者，DNA修复能力弱，易导致损伤累积，对顺铂敏感性高，通过术后的辅助化疗，可以更大程度杀伤残余肿瘤细胞，复发及转移晚，因而具有较长的生存期。蒋胜等［7］发现，FRCC1低表达组的生存时间明显高于高表达水平组，表明FRCC1的表达是影响上皮性卵巢癌患者预后的因素，FRCC1可能是影响上皮性卵巢癌术后辅助化疗患者预后的主要因素，化疗前检测FRCC1的表达有助于患者化疗方案及化疗药物的选择。

另外，本研究还发现TUBB3和FRCC1在上皮性卵巢癌组织中的表达呈正相关关系，联合检测上皮性卵巢癌中TUBB3、FRCC1蛋白表达，有利于更好选择化疗用药及预后的检测指标，从而为指导临床化疗提供理论依据。

［1］ 畅金萍.紫杉醇脂质体联合顺铂治疗中晚期卵巢癌临床观察［J］.肿瘤基础与临床，2012，25（2）：158-159.

［2］ 夏俊贤，陈敬华，田忠凯，等.3种不同化疗方案二线治疗复发性卵巢癌的对比研究［J］.肿瘤基础与临床，2013，26（3）：210 -212.

［3］ 冷雪峰，冼磊，陈铭伍，等.非小细胞肺癌组织中FRCC1及TUBB3基因mRNA的表达及其临床意义［J］.肿瘤预防与治疗，2012，25（1）：1-5.

［4］ Sève P，Mackey J，Isaac S，et al.ClassⅢbeta-tubulin expression in tumor cells predicts response and outcome in patients with nonsmall cell lung cancer receiving paclitaxel［J］.Mol Cancer Ther，2005，4（12）：2001-2007.

［5］ 何峰，李远航，林钟轩.非小细胞肺癌患者 FRCC1、TYMS、TUBB3、RRM1表达及FGFR（F19/F21）突变率的检测［J］.中华临床医师杂志：电子版，2011，5（5）：161-164.

［6］ He J，XuY，QiuL X，et al.Polymorphisms inF RCC1 andX PF genes and risk of gastric cancer in an eastern Chinese population［J］.PLoS One，2012，7（11）：e49308.

［7］ 蒋胜，李力，张玮，等.FRCC1基因mRNA表达水平在卵巢上皮性癌组织中的意义［J］.实用妇产科杂志，2009，25（11）：661 -663.

TUBB3 and ERCC1 Protein Expressions in the Epithelial Ovarian Cancer

Zhang Jing，Jia Xihua
（Department of Medical Oncology，Baoding First Central Hospital，Baoding，071000）

ObjectiveBy detecting β-tubulin-Ⅲ（TUBB3）and excision repair cross complement group 1（FRCC1）protein expressions in the epithelial ovarian cancer，to explore the relationship with the chemotherapy curative effect and prognosis of epithelial ovarian cancer.MethodsImmunohistochemistry technique was used to detect the TUBB3 and FRCC1 protein expressions in the 25 cases of normal ovarian tissues and the 50 cases of epithelial ovarian cancer.ResultsTUBB3 and FRCC1 protein expressions in the epithelial ovarian cancer was significantly higher than those in the normal ovarian tissues（P＜0.05）.Their positive expression rates were related to the differentiation degree and the clinical stage of epithelial ovarian cancer（P＜0.05）.TUBB3 protein expression was positively related with FRCC1 protein expression in the epithelial ovarian cancer（r=0.332，P＜0.05）.The chemotherapy efficacy rate of patients with TUBB3 or FRCC1 positive（34.6%and 31.4%）were lower than those of patients with TUBB3 or FRCC1 negative（91.7%and 93.3%）（P＜0.05）.ConclusionTUBB3 and FRCC1 protein expressions in epithelial ovarian cancer can be related to the chemotherapy efficacy and the prognosis，the two positive expressions may indicate chemotherapy drug resistance of epithelial ovarian cancer，can be used as an important index for chemotherapy drug resistance and prognosis of epithelial ovarian cancer.

epithelial ovarian cancer；β-tubulin-Ⅲ；excision repair cross complement group 1；chemotherapy efficacy

10.3969/j.issn.1673-5412.2014.03.007

R737.31

A

1673-5412（2014）03-0205-03

2013-07-12）

张静（1987-），女，硕士在读，主要从事妇科肿瘤学研究。

F-mail：zjzhoukou@163.com

贾喜花（1968-），女，博士，主任医师，主要从事中西医结合防治肿瘤研究。F-mail：jiaxh@163.com