HPLC法测定肠虫清胶囊中阿苯达唑的含量

游国叶，樊轻亚，熊大伟

(信阳职业技术学院药学院，河南信阳464000)

肠虫清胶囊的主药成分为阿苯达唑(Albendazole，ABZ)，又名丙硫咪唑，化学名为5-丙硫基-1H-苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯，为一广谱高效低毒的驱虫药，该药现已被列入医保产品，成为临床上用于治疗各种蠕虫感染性疾病的首选药物［1］。在阿苯哒唑原料的现行标准中，其含量测定在美国药典29 版［2］、欧洲药典 5.0 版［3］和中国药典 2010 年版中均为滴定法，其胶囊剂含量测定在中国药典2010年版规定的方法为分光光度法，利用295 nm处的吸收系数计算含量［4］。HPLC法测定阿苯达唑的含量的报道较为少见［5］，笔者通过建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)测定肠虫清胶囊中阿苯达唑的含量，方法快速、准确，重现性好。

1 仪器与试剂药品

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪;Waters 2996紫外检测器 (美国Waters公司);BP 211D型半微量电子天平;PHS—2CA数字式酸度计(上海理达仪器厂)。

1.2 试剂与药品 肠虫清胶囊(新乡市同心药业，批号20080110，20080113，20080117，规格0.2 g);阿苯达唑对照品 (中国药品生物制品检验所，批号100373—200301);纯化水(新乡市平安药业有限公司);甲醇为色谱纯(江苏国达，200704)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 阿苯达唑为碱性化合物，与硅胶柱的硅醇基有较强的相互作用，会造成强保留，因此应选择硅醇相互作用弱的色谱柱，Luna C18的硅醇相互作用约为 0.2［5］，能够获得理想的分析结果。

流动相之一应该选择缓冲液，以获得稳定的保留时间，同时为了解决阿苯达唑的溶解性问题，选取0.1 mol·L-1醋酸铵缓冲液(用醋酸调节 PH至3.1)。当缓冲液和甲醇的比例调整到40∶60时，阿苯达唑的保留时间稳定在9.8 min左右。流量为1 mL/min，柱温20℃。

取阿苯哒唑对照品用醋酸溶解，流动相稀释成1 mg·mL-1，在200～400 nm的波长范围内扫描，阿苯哒唑在288 nm处有最大吸收，故紫外检测器的波长为288 nm。

所以色谱条件为:色谱柱:Luna C18(5 μm，250×4.6 mm);流动相:甲醇 -0.1 mol·L-1醋酸铵缓冲液(用醋酸调节PH至3.1)(60∶40);检测波长:288 nm;流量:1 mL/min;进样量:20 μl;柱温:20 ℃。

在上述色谱条件下，阿苯达唑的色谱图见图1，和杂质峰的分离度大于1.5，拖尾因子1.03，理论塔板数按阿苯达唑计算大于3 500。

图1 阿苯达唑的色谱图

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取阿苯达唑对照品50 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，准确量取5.0 mL置10 mL量瓶中，加流动相定容，摇匀，稀释成0.5 mg·mL-1对照品液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，精密称取适量(约相当于阿苯达唑50 mg)，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液5.0 mL置10 mL量瓶中，加流动相定容，摇匀，即得。

2.3 线性关系考察 精密称取干燥至恒重的阿苯达唑对照品50 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振摇使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得阿苯达唑对照品储备液。分别准确量取 1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，8.0 和 10.0 mL 阿苯达唑对照品储备液置10 mL 量瓶中，加流动相定容，摇匀，即成 0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0 mg·mL-1系列溶液，按 2.1项下色谱条件测定峰面积，以峰面积对浓度作线性回归，结果见图2。结果表明，阿苯达唑在0.1～1.0 mg·mL-1浓度范围内 A=2.85 ×106C+6.5 ×104，r=0.999 5，线性关系良好。

图2 阿苯达唑的线性关系

2.4 精密度试验 取0.5 mg·mL-1阿苯达唑对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样6次，测定峰面积，结果见表2，可见精密度试验RSD为0.40%，精密度良好。

表2 精密度实验结果

2.5 重复性试验 取同一批号20080113样品，按2.3项下方法制备6份供试液，按2.1项下色谱条件进样，测定峰面积，计算含量，结果见表3，重复性试验RSD为0.66%，重复性良好。

表3 重复性试验结果

2.6 加样回收率试验 称取已知含量的样品(20080113)细粉 50 mg，分别加入高、中、低(20 mg、40 mg、60 mg)不同量干燥至恒重的阿苯达唑对照品，各3份，按含量测定方法进行测定，计算回收率，结果见表4。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液在放置时间为0、2、4、6、10 h 时进样，测定峰面积，结果见表 5，稳定性试验RSD为0.52%，稳定性良好。

表4 加样回收率试验结果

2.8 定量限 按信噪比为3(S/N=3)对最低检测限进行测定，结果表明，当进样浓度为 0.25 μg·mL-1时，阿苯哒唑峰信号约为基线噪音的3倍，即最低检测浓度为 0.25 μg·mL-1。

表5 稳定性试验结果

2.9 样品含量测定 取3批样品各20粒胶囊，倾出内容物，囊壳用小刷拭净，精密称定，精密称取适量(约相当于阿苯达唑50 mg)，按2.2.2项下方法制备供品溶液。分别取供试液和2.2.1项下对照品液，在2.1项下色谱条件进样，用峰面积外标法计算含量;并与中国药典［6］规定的紫外分光光度法(UV法)测定的结果比较，结果见表6。

表6 样品含量测定结果

3 讨论

阿苯达唑微溶于丙酮、乙酸，不溶于乙醇、水［3］，制约了流动相的选择，采用甲醇-醋酸铵缓冲液为流动相，通过调整流动相比例和PH值，既解决了溶解性问题，也获得了较好的系统适用性。

虽然药典规定的分光光度法在295 nm波长处测定吸收值，但在本实验的色谱条件下，阿苯达唑的最大吸收在288 nm处，这是因为在pH 3.1时，阿苯达唑以离子状态存在，共轭结构减少，最大吸收向短波方向移动。

与中国药典规定的分光光度法相比(当时没做其他比较，单从分光光度法和HPLC两种方法的测定同批产品的含量，根据RSD来判断后精密度、准确度高于前者，故得出结论。)本法能够排除杂质干扰，准确度高，HPLC法重复性、稳定性好。

［1］万启惠.广谱驱蠕虫新药—— 丙硫咪唑［J］，遵义医学院学报，1988，l1(1):73-74.

［2］美国药典委员会.美国药典/国家处方集［M］.29版.美国:美国药典委员会，2006:2505.

［3］欧洲药品质量委员会.欧洲药典5.0.(EDQM)［M］.编辑出版.法国:中外药品质量管理局:2004，1 122-1 123.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［M］.北京:化学工业出版社，2010:290.

［5］邵 超.HPLC法测定阿苯达唑颗粒的含量［J］.黑龙江医药，2011，03(5):341-342.

［6］国家药典委员会.中国药典［M］.二部.北京:中国医药科技出版社，2010:395.