朝鲜淫羊藿叶的黄酮苷类成分研究*

李金玉， 李洪梅， 李蓉涛

(昆明理工大学 生命科学与技术学院， 云南 昆明 650500)

淫羊藿(Epimediumkoreanum)为小檗科(Berbfidaceae)淫羊藿属(Epimedium)植物，又名三枝九叶草等，亦称“仙灵脾”。淫羊藿属全世界大约有52个种[1]，我国约有40个种，是传统补肾壮阳药，据明代李时珍《本草纲目》记载，淫羊藿具有“补肾阳、强筋骨、祛风湿”的作用。淫羊藿是我国传统中药，作为滋阴壮阳、预防类风湿的植物药使用已有2000余年的历史[1]。现代药理研究表明，淫羊藿具有抗骨质疏松[2]、抗炎[3]、抗衰老[4]、抗氧化[5]和抗肿瘤[6]等功效，此外，还具有雌、雄性激素作用[7]。近年来，由于具有很好的开发利用前景，淫羊藿已成为国内外医药界的研究热点。本文对朝鲜淫羊藿70%丙酮水提取物的正丁醇部分进行研究，得到了6个黄酮苷，分别被鉴定为：金圣草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯(1)，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯(2)，3′，5，7-三羟基-4′-甲氧基黄酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷(3)，山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷(4)，芦丁(5)和槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)。化合物1和2为首次从淫羊藿属植物中分离得到，化合物3，4和6为首次从该植物中分离得到。

1 实验仪器和材料

1D和2D NMR谱在Brucker AM-400、DRX-500及Avance III 600型超导核磁共振仪上测定；ESI-MS用API QSTAR Pulsar质谱仪测定。HPLC使用安捷伦1200高效液相色谱仪，分析柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6 × 250 mm，5 μm)，半制备柱为Agilent ZORBAX SB-C18柱(9.6 × 250 mm，5 μm)；MPLC C-605/C-601型中压液相色谱仪由瑞士BÜCHI公司生产；Dianion HP-20为日本三菱公司生产；Toyopeal HW-40C由日本TOSOH公司生产；Sephadex LH-20(20-100 μm)由瑞典Pharmacia公司生产；YMC*-GEL ODS-A 由日本YMC生产；TLC正相硅胶板(G和GF254)，拌样用硅胶(80-100目)和柱层析用硅胶(200-300目)，均为青岛海洋化工厂生产；显色剂为碘粉和5% H2SO4-EtOH溶液；展开剂：(1)氯仿：甲醇：水(8：2：0.2)；(2)甲苯：甲酸甲酯：甲酸(1：5：2)。

朝鲜淫羊藿叶于2010年11月购买自吉林省通化市，经昆明理工大学李海舟博士鉴定为朝鲜淫羊藿(E.koreanum)，凭证标本(KMUST-B-20101109)存放于昆明理工大学资源药物化学重点实验室。

2 提取与分离

干燥朝鲜淫羊藿叶(10 kg)经70%丙酮/水提取，减压浓缩至无丙酮味，然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取。正丁醇相(164 g)经Toyopeal HW-40柱层析，甲醇/水(0%、30%、60%、90%、100%)梯度洗脱，合并得到6段，A-F。C段(40 g)经ODS中压柱，25%-65%甲醇水梯度洗脱(流速：10 mL/min)分为4段，C1-C4。C3(10 g)经Sephadex LH-20(甲醇洗脱)被分为4段，C3-1～C3-4。C3-4(1.1 g)经ODS中压柱(50%甲醇，流速：10 mL/min)洗脱分为3段C3-4-1～C3-4-3。C3-4-3(200 mg)用80-100目硅胶样，200-300目硅胶柱层析，氯仿/甲醇10：1洗脱，得到5段，C3-4-3-1～ C3-4-3-5。C3-4-3-2(60 mg)经半制备型HPLC进行分离(流动相：20%乙腈/水，流速：3 mL/min)，得到化合物1(7.6 mg)和2(8.0 mg)。C3-4-2(180 mg)经Sephadex LH-20(氯仿/甲醇1：1)柱层析，后经半制备型HPLC进行分离(流动相：18%乙腈/水，流速：3 mL/min)得到化合物3(10 mg)和4(7.6 mg)。C3-4-1(500 mg)，用80-100目硅胶拌样，200-300目硅胶柱层析，氯仿/甲醇(15：1，10：1，8：1，4：1)梯度洗脱得到化合物5(13 mg)。D段(28 g)经Dianion柱梯度洗脱(30%、60%、90%甲醇/水)分为5段，D1-D5。D3(8.0 g)先经Sephadex LH-20(氯仿/甲醇1：1)纯化，然后经硅胶(200-300目)柱层析(氯仿/甲醇 10：1，6：1，4：1，0：1洗脱)，分为三段，D3-1～D3-3。D3-2(75 mg)通过半制备型HPLC进行分离(流动相：18%乙腈/水，流速：3 mL/min)得到化合物6(13 mg)。

3 结构鉴定

图1 化合物1-6的结构

化合物1：黄色无定形粉末，1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH：3.10-3.47(3H，m，H-2″，H-3″，H-4″)，3.65(3H，s，COOCH3)，3.88(3H，s，OCH3)，4.18(1H，d，J=9.5 Hz，H-5″)，5.30(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，6.46(1H，s，H-8)，6.86(1H，s，H-6)，6.93(1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，6.97(1H，s，H-3)，7.57(1H，s，H-2′)，7.58(1H，d，J=8.1 Hz，H-6′)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC：164.2(s，C-2)，103.5(d，C-3)，182.0(s，C-4)，161.2(s，C-5)，99.3(d，C-6)，162.4(s，C-7)，94.8(d，C-8)，156.9(s，C-9)，105.5(s，C-10)，121.3(s，C-1′)，110.4(d，C-2′)，148.1(s，C-3′)，151.0(s，C-4′)，115.8(d，C-5′)，120.5(d，C-6′)，99.1(d，C-1″)，72.1(d，C-2″)，75.4(d，C-3″)，71.3(d，C-4″)，75.1(d，C-5″)，169.2(s，C-6″)，56.0(q，OCH3)，52.0(q，COOCH3)。波谱数据与文献[8]报道一致，故结构鉴定为金圣草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯。

化合物2：黄色无定形粉末，1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH：3.13-3.40(3H，m，H-2″，H-3″，H-4″)，3.65(3H，s，COOCH3)，4.21(1H，d，J=9.5 Hz，H-5″)，5.31(1H，d，J=7.1 Hz，H-1″)，6.47(1H，s，H-8)，6.87(1H，s，H-6)，6.89(1H，s，H-3)，6.94(2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′)，7.95(2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′)，12.98(1H，s，5-OH)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC：164.1(s，C-2)，103.5(d，C-3)，182.3(s，C-4)，161.6(s，C-5)，99.6(d，C-6)，162.8(s，C-7)，95.0(d，C-8)，157.4(s，C-9)，105.9(s，C-10)，121.3(s，C-1′)，129.0(d，C-2′，6′)，116.4(d，C-3′，5′)，162.8(s，C-4′)，99.5(d，C-1″)，73.1(d，C-2″)，75.8(d，C-3″)，71.7(d，C-4″)，75.6(d，C-5″)，169.5(s，C-6″)，52.3(q，COOCH3)。波谱数据与文献[9]报道一致，故结构鉴定为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯。

化合物3：黄色无定形粉末，1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δH：1.10(3H，d，J=6.0 Hz，H-6‴)，3.81(1H，d，J=10.5 Hz，H-5″)，3.95(3H，s，OCH3)，4.53(1H，s，H-1‴)，5.31(1H，d，J=7.1 Hz，H-1″)，6.20(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.40(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.90(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，7.62(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，7.95(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz，H-6′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δC：159.0(s，C-2)，135.4(s，C-3)，179.4(s，C-4)，163.2(s，C-5)，100.2(d，C-6)，166.4(s，C-7)，95.1(d，C-8)，158.7(s，C-9)，105.8(s，C-10)，123.1(s，C-1′)，114.6(d，C-2′)，148.4(s，C-3′)，150.9(s，C-4′)，116.2(d，C-5′)，124.1(d，C-6′)，104.5(d，C-1″)，76.0(d，C-2″)，78.3(d，C-3″)，69.2(d，C-4″)，77.5(d，C-5″)，68.6(t，C-6″)，102.3(d，C-1‴)，72.2(d，C-2‴)，72.4(d，C-3‴)，73.9(d，C-4‴)，68.7(d，C-5‴)，18.0(q，C-6‴)。波谱数据与文献[10]报道一致，故结构鉴定为3′，5，7-三羟基-4′-甲氧基黄酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷。

化合物4：黄色无定形粉末，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δH：1.13(3H，d，J=6.2 Hz，H-6‴)，3.65(1H，d，J=10.2 Hz，H-5″)，4.51(1H，s，H-1‴)，5.22(1H，d，J=6.8 Hz，H-1″)，6.18(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.38(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.88(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′)，8.03(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δC：159.3(s，C-2)，135.5(s，C-3)，179.3(s，C-4)，163.0(s，C-5)，100.2(d，C-6)，166.8(s，C-7)，95.1(d，C-8)，158.6(s，C-9)，105.5(s，C-10)，122.7(s，C-1′)，132.6(d，C-2′，C-6′)，116.1(d，C-3′，C-5′)，161.5(s，C-4′)，104.7(d，C-1″)，75.7(d，C-2″)，78.1(d，C-3″)，71.4(d，C-4″)，77.2(d，C-5″)，68.5(t，C-6″)，102.4(d，C-1‴)，72.3(d，C-2‴)，72.1(d，C-3‴)，73.9(d，C-4‴)，69.7(d，C-5‴)，18.0(q，C-6‴)。波谱数据与文献[11]报道一致，故结构鉴定为山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：黄色无定形粉末，1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH：1.00(3H，d，J=6.2 Hz，H-6‴)，3.70(1H，d，J=10.5 Hz，H-5″)，4.38(1H，s，H-1‴)，5.31(1H，d，J=7.5 Hz，H-1″)，6.14(1H，s，H-8)，6.33(1H，s，H-6)，6.82(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，7.52(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，7.54(1H，dd，J=8.5，2.1 Hz，H-6′)，12.51(1H，s，5-OH)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δC：157.4(s，C-2)，134.1(s，C-3)，177.9(s，C-4)，162.0(s，C-5)，100.0(d，C-6)，166.4(s，C-7)，94.7(d，C-8)，157.3(s，C-9)，104.3(s，C-10)，121.8(s，C-1′)，116.1(d，C-2′)，145.7(s，C-3′)，149.6(s，C-4′)，116.9(d，C-5′)，122.5(d，C-6′)，102.3(d，C-1″)，74.9(d，C-2″)，77.4(d，C-3″)，70.9(d，C-4″)，76.8(d，C-5″)，67.9(t，C-6″)，101.6(d，C-1‴)，71.4(d，C-2‴)，71.2(d，C-3‴)，72.7(d，C-4‴)，69.1(d，C-5‴)，18.6(q，C-6‴)。波谱数据与文献[12]报道一致，故结构鉴定为芦丁。

化合物6：黄色无定形粉末，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δH：5.33(1H，dJ=7.6 Hz，H-1‴)，5.43(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，6.14(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.34(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.80(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.53 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.62(1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H-6′)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δC：156.4(s，C-2)，133.3(s，C-3)，177.3(s，C-4)，161.2(s，C-5)，99.1(d，C-6)，165.6(s，C-7)，93.8(d，C-8)，156.0(s，C-9)，103.5(s，C-10)，121.1(s，C-1′)，116.1(d，C-2′)，148.6(s，C-3′)，144.9(s，C-4′)，115.2(d，C-5′)，121.6(d，C-6′)，101.9(d，C-1″)，71.2(d，C-2″)，73.2(d，C-3″)，67.9(d，C-4″)，75.8(d，C-5″)，60.1(t，C-6″)，100.9(d，C-1‴)，74.1(d，C-2‴)，76.5(d，C-3‴)，70.0(d，C-4‴)，77.5(d，C-5‴)，60.9(t，C-6‴)。波谱数据与文献[13]报道一致，故结构鉴定为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷。

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