非小细胞肺癌组织中VEGF、E-cad的表达变化及意义

郝 琴，陈美霓

(延安大学医学院，陕西延安716000)

国际癌症研究中心数据表明，2008年肺癌占全世界恶性肿瘤病死率第一位，占总病死率12.7%［1］。肺癌有发现晚、转移早、病死率高等特点，即使接受标准化的治疗，目前进展性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者中位生存时间约10个月［2］。癌细胞的生长、转移依赖新生血管的形成，血管内皮生长因子(VEGF)是最有效的促血管生长因子。而目前认为，E-钙黏附素(E-cad)与肿瘤侵润性生长和肿瘤细胞的转移关系最为密切。2014年3～5月，我们采用免疫组化法检测52例份NSCLC组织及11例份良性病变肺组织中VEGF、E-cad，观察其表达变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2010年1月～2013年9月延安大学附属医院病理科存档的NSCLC病理组织标本52例份(观察组)，患者男36例，女16例;所有患者均经病理证实，且未行放化疗。肺癌诊断标准参照1999年WHO/IASLC肺和胸膜组织学分类标准［3］。其中鳞癌31例，腺癌18例，其他类型癌3例;有淋巴结转移者37例，无淋巴结转移者15例;TNM分期Ⅰ+Ⅱ期17例，Ⅲ+Ⅳ期35例;分化程度为高6例，中25例，低21例。另选良性病变肺组织标本11例份作为对照组，其中炎性病变5例，肺结核6例。两组一般资料无统计学差异，具有可比性。

1.2 主要试剂 兔抗人多克隆抗体VEGF、鼠抗人多克隆抗体E-cad及S-P试剂盒购自北京中衫金桥生物技术有限公司，DAB底物显色剂购自武汉博士德生物技术有限公司。

1.3 VEGF和E-cad的检测 采用免疫组化SP法，抗原修复采用枸橼酸钠缓冲液高压热修复，其他步骤严格按照试剂盒说明进行。兔抗人VEGF抗体、鼠抗人E-cad抗体工作浓度均为1∶100，以PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定标准:参照文献［4］。VEGF:胞质内呈棕黄色颗粒为阳性细胞;E-cad:包膜中见到棕黄色颗粒分布为阳性，以病理科VEGF和E-cad阳性的胃癌切片作为阳性对照。在400倍镜下随机取5个视野，每个视野随机计数100个肿瘤细胞，将其染色阳性的细胞相加再除以5，即得该例肿瘤细胞的阳性率(%)，阳性细胞数≥10%定为阳性，阳性细胞数＜10%定为阴性。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。两组间比较应用χ2检验，采用Spearman等级相关分析法分析VEGF与E-cad间及与NSCLC临床病理参数的相关性。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组VEGF、E-cad表达比较 观察组、对照组VEGF 阳性率分别为 71.15%(37/52)、18.18%(2/11)，两组比较，P ＜0.01;E-cad 阳性率分别为57.69%(30/52)、90.91%(10/11)，两组比较，P ＜0.05。

2.2 VEGF、E-cad阳性表达与NSCLC临床病理参数的关系 结果见表1。由表1可知，VEGF、E-cad表达与NSCLC淋巴结转移、TNM分期、分化程度有关(P均＜0.05)，与其余病理参数无关(P均＞0.05)。

表1 VEGF、E-cad阳性表达与NSCLC临床病理参数的关系

2.3 观察组VEGF和E-cad表达的关系 观察组VEGF表达与E-cad表达呈负相关(r=－0.373，P＜0.01)。

3 讨论

世界范围内，肺癌已成为发病率和病死率增长速度最快的恶性肿瘤，对人类的健康和生命造成巨大威胁。据中国肿瘤登记中心数据统计，我国2008年肺癌发病率为52.1万，死亡人数约45.2万，病死率居恶性肿瘤第一位，近年来有明显快速增长趋势［5］。

VEGF是内皮细胞特异性有丝分裂原，通过与其内皮细胞膜上的受体结合而发挥作用，产生多种功能:①促进生成新的血管。通过与血管内皮细胞的特异性受体结合，促进动、静脉以及淋巴管来源的内皮细胞生长［6］。②增加血管通透性。小囊液泡器(VVO)是位于微静脉和小静脉内皮细胞质里的一种类似与葡糖串样的细胞器，它与内皮细胞的腔面和腔外面相连，可占细胞质的20%。VVO之间、VVO与细胞之间相互作用形成一些有利于大分子物质通过的小窗，VEGF通过对VVO“窗口”的调节增加血管通透性，促使大分子物质通过VVO渗出血管外［7］。Brock等［8］报道，VEGF是已知的最强的血管渗透剂，高于组胺50 000倍。③通过干扰树突细胞的成熟而影响肿瘤免疫，从而使肿瘤细胞逃避免疫监视［9］。④在肺癌中，VEGF还可以诱发恶性胸水［10］。VEGF与受体结合后，通过一系列信号传导机制导致血管内皮细胞分裂增殖，同时增加血管通透性，使血浆蛋白外渗，为胸腔积液形成提供了合适的微环境［11］。除此以外，VEGF与受体结合后，可引起内皮细胞的一系列变化，包括Ca2+的内流、IP3的增加、Von Willebrand因子的释放以及胎儿血管内皮金属蛋白酶、凝血酶的产生。而Ca2+和IP3又可以作为细胞内信号传导的第二信使，传导细胞内信号，刺激内皮细胞增殖，最终完成 VEGF 的生物学效应［12］。研究［13～18］表明，人类很多肿瘤中均有VEGF的高表达，如脑肿瘤、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、骨肉瘤等，而且表达程度与肿瘤的恶性程度呈正相关。本研究发现，观察组VEGF阳性率高于对照组，且VEGF阳性表达与NSCLC淋巴结转移、TNM分期、分化程度有相关性，提示VEGF参与了NSCLC的发生、发展与转移，可作为NSCLC的一项生物学行为的评估指标。

目前认为，E-cad与肿瘤侵润性生长和肿瘤细胞的转移关系最为密切，其主要有以下作用:①通过Wnt途径、receptor tyrosine kinases及 Rho GTPase信号转导途径调节细胞增殖。②影响细胞的分化，参与器官形成过程。③维持正常上皮细胞形态和结构的完整性。④参与了胰腺的β细胞生存能力的维持，减弱人胰腺β细胞的凋亡。⑤与血管新生密切相关［19］。本研究发现，观察组E-cad阳性率低于对照组，且 E-cad阳性表达与 NSCLC淋巴结转移、TNM分期、分化程度有相关性，提示E-cad参与了NSCLC的发生、发展及转移，E-cad的缺失或下降，可能导致肿瘤细胞的侵润与转移，其可作为癌症的一项重要检测指标。

VEGF就是通过直接或间接途径来影响血管的形成。实验证明，E-cad是VEGF信路径一个组成部分，其定位于内皮细胞间连接处，参与调节血管屏障功能，重组新生血管中的血管内皮细胞，参与VEGF诱导的血管新生过程［20］。其可能的途径是E-cad蛋白可形成钙黏素—连环蛋白复合物体使其磷酸化或去磷酸化，通过非胞外信号(p42和p44 ERKs)促进VEGF与其受体VEGF-2的结合，刺激血管形成。本研究显示，观察组VEGF与E-cad表达呈负相关，提示VEGF的高表达及E-cad的表达下降或缺失可能共同促使了NSCLC的发生、发展与浸润转移。

总之，VEGF、E-cad与NSCLC的增殖、侵袭的调控密切相关。对VEGF与E-cad的联合检测，可能成为判断NSCLC恶性程度和预后的重要指标，同时为抗VEGF及其受体的药物应用于肺癌的治疗提供新的思路。

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