胰腺癌患者化疗前后外周血NKT、IFN-γ、IL-6水平变化及意义

吴安任

(徐闻县中医院，广东徐闻524100)

胰腺癌属于较棘手的普外科恶性肿瘤，一旦确诊一般为晚期，且多无手术治疗机会，因此该类患者多采取姑息性化疗措施进行治疗［1］。目前，胰腺癌发病机制尚未完全明确，但有越来越多的证据表明胰腺癌与自然杀伤细胞(NKC)的活力下降有关［2］;且有研究［3，4］表明，胰腺癌与 CD+4及 CD+26T细胞的功能异常密切相关。本文观察了化疗前后胰腺癌患者外周血自然杀伤 T细胞(NKT)、γ干扰素(IFN-γ)、IL-6水平变化，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2010年1月～2013年8月我院收治的胰腺癌患者35例(胰腺癌组)，男22例，女13例;年龄(57.4±12.6)岁;以上患者均为Ⅲ期，且未接受化疗;瘤体位于胰头21例，胰体8例，胰尾部6例;经病理学或ERCP送检细胞学确诊为腺癌者27例，经临床表现、实验室检查结合腹部增强CT扫描确诊8例。排除其他系统治疗以及风湿免疫性疾病，且近期内无服用激素或免疫抑制剂等情况［3］。另选取同期就诊的慢性胰腺炎［5］患者35例，男24例，女11 例;年龄(56.9±13.1)岁。健康体检志愿者35例(对照组)，男21例，女14例;年龄(53.4±11.9)岁。各组一般资料比较无统计学差异，具有可比性。化疗方法:吉西他滨单药方案(21例):剂量为1 000 mg/m2，静脉滴注30 min，每周1次，连用7周，休息2周，之后每周1次，连用3周，4周重复［6］。联合方案(14例):氟尿嘧啶 425～600 mg/m2;或顺铂60～75 mg/m2;或奥沙利铂85～130 mg/m2;或卡培他滨1 000 mg/m2。在化疗开始前，采集静脉血1次;7周时第2次采集静脉血。

1.2 外周血NKT、IFN-γ、IL-6检测方法 清晨空腹抽取所有受试对象静脉血约5 mL，以上标本均抗凝保存于4℃冰箱内待测。CD3-FITC、CD16-PE、CD56-PE、IFN-γ-PE及IL-6-PE细胞因子抗体均购自南京建成生物工程研究所。多色流式细胞仪为美国BD公司生产。采用Ficoll分离获得外周血单个核细胞，随后应用尼龙毛柱获得T淋巴细胞，再免疫磁珠孵育30 min后进行磁珠而分离出NKT细胞。使用固定穿透剂对NKT胞内IFN-γ及IL-6进行染色，使用双激光光源，其中FL1和FL2荧光通道以相应同种型鼠IgG染色细胞作阴阳分界线，仔细设置各荧光通道之间的荧光补偿，每管获取细胞数1 000个;运用FACSDiva软件对NKT细胞百分含量及其胞内细胞因子水平进行分析;采用放射免疫试剂盒检测 CA199 水平［7］。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计量资料以±s表示，三组间两两比较采用单因素方差分析(ANOVA)SNK法，应用配对t检验比较化疗前后的指标变化。相关性分析采用Pearson相关分析法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胰腺癌组化前后及胰腺炎组、对照组NKT、IFN-γ、IL-6、CA199水平比较 见表1。

表1 胰腺癌组化前后及胰腺炎组、对照组NKT、IFN-γ、IL-6、CA199 水平比较(±s)

表1 胰腺癌组化前后及胰腺炎组、对照组NKT、IFN-γ、IL-6、CA199 水平比较(±s)

注:与对照组比较，aP ＜0.05;与胰腺炎组比较，bP ＜0.05;与同组化疗前比较，cP ＜0.05

组别 n NKT(%) IFN-γ(%) IL-6(%) CA199(μg/L)35化疗前 5.22±1.63ab 1.93±0.84ab 18.39±4.87ab 34.16±9.48ab化疗后 13.76±3.35c 5.71±2.42c 6.81±2.61c 13.87±4.91胰腺炎组 35 18.26±5.47 7.34±2.61 4.64±1.55a 2.38±1.47a对照组胰腺癌组35 20.75±6.81 8.41±3.27 1.80±0.37 0.83±0.21

2.2 胰腺癌组 NKT、IFN-γ、IL-6的相关性 NKT与 IFN-γ 呈正相关(r=0.785，P ＜0.05)，IL-6 与CA199呈正相关(r=0.674，P ＜ 0.05)，NKT 与CA199 呈负相关(r= －0.894，P ＜0.05)。

3 讨论

Nagaraj等［8］报道，胰腺癌年发病率约 511/10万，估计每年新增近6万例，吸烟、大量饮酒、糖尿病史、胆石症史及多次生育史为发病的主要危险因素。胰腺癌发病机制仍不甚清楚，除上述危险因素外，年龄、性别、种族、地域也与此癌有一定的相关性［9］。近年来，对胰腺癌免疫机制的研究有很大进展，例如对肿瘤抗原、免疫监视、免疫逃避、免疫耐受、T淋巴细胞信号转导、细胞因子以及调节性树突状细胞的调节、共刺激分子的下调及肿瘤微环境有了一定的认识［10，11］。

由于胰腺癌患者胰导管易发生梗阻，导致常伴发慢性胰腺炎而增加诊断难度，因此临床上经常遇到胰腺癌误诊为慢性胰腺炎采用非手术治疗，后因病情恶化甚至发现癌转移才发现误诊，但此时已失去手术切除机会，这对胰腺癌的早期诊断是明显不利的［12］。NKT是一种既表达T细胞标志性的CD3分子，又表达 NK细胞的 CD16及 CD56分子的 T细胞［13］;其同时具备NK和T细胞双重免疫活性，在抗肿瘤的免疫机制当中扮演重要角色［14］。研究表明，NKT细胞可在抗原刺激下体外大量扩增，呈TH0样细胞因子分泌，激活后可以产生IFN-γ等细胞因子，从而介导细胞免疫并发挥细胞毒性作用，是NKT抗肿瘤的重要机制［15］。IL-6是一种重要的炎症因子，在多种炎症及肿瘤可表达升高［16］。

本研究发现，胰腺癌组NKT、IFN-γ水平较对照组低，这与Yamasaki等［13］的结果类似，说明NKT及IFN-γ在胰腺癌及慢性胰腺炎外周血中存在差异性表达。本研究显示，胰腺癌组及胰腺炎组IL-6水平均高于对照组，且胰腺癌组高于胰腺炎组，其原因是恶性肿瘤可产生大量坏死物从而诱发局部及全身炎症，从而使IL-6水平升高［17］;而慢性胰腺炎其胰腺内程度较轻，胰管压迫、堵塞相对较轻，胰腺自身消化并不严重，因此IL-6升高不如急性胰腺炎及胰腺癌明显［18］。本研究还发现，胰腺癌组化疗后NKT、IFN-γ水平均较治疗前升高，说明NKT的抗肿瘤活力有所恢复，化疗有效。而胰腺癌组化疗后IL-6水平较化疗前下降，说明胰腺细胞坏死程度减轻，炎性渗出减少。胰腺癌组CA199水平较胰腺炎及对照组高，仍然支持CA199诊断胰腺癌的特异性。相关性分析显示，NKT与IFN-γ呈正相关，IL-6与CA199呈正相关，NKT与 CA199呈负相关，说明 NKT与IFN-γ是胰腺癌患者病情转归的有利因素，而IL-6是一个反映炎症和坏死的不利因素。

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