丙肝患者血清HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA检测的比较及肝功能的相关性研究*

王中东 黄麦华

( 1.山东省泰山疗养院，山东 泰安 271000； 2.泰山医学院附属泰山医院，山东 泰安 271000)

丙型肝炎是一种主要经血液传播的疾病，丙型肝炎病毒(hepatitisC virus, HCV)慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，感染者中绝大部分发展成慢性感染进而发生肝硬化和肝细胞性肝癌[1]。世界卫生组织估计世界大约2.35%的人感染HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例,是严重威胁人类健康的传染病之一，呈世界性分布。丙型肝炎病毒是丙型肝炎的病原体，其致病机制主要是通过病理性免疫应答导致肝细胞损伤，它还有诱发原发性肝癌的可能。而高度慢性化是该病的最大特征[2]。由于尚无有效的预防和治疗方法，因此，控制HCV感染的形势十分严峻，而早发现、早诊断和早治疗是防控HCV传染源、阻断传播途径最为有效的手段。目前临床对丙型肝炎的诊断仍是以临床症状结合HCV-Ab、HCV-CAg、HCV-RNA等实验室指标为临床诊断依据。ALT、AST、γ-GT是体现肝细胞损害和坏死的特异性强、灵敏度高的指标。本实验旨在探讨丙肝患者血清HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA检测及肝功能的相关性研究。

1 材料与方法

1.1标本来源 收集2012.10-2013.10山东省泰山疗养院门诊和住院的186例丙型肝炎患者资料，诊断符合2000年全国传染病寄生病学术会议修订的病毒性肝炎的防治方案，男128例，女58例，年龄21～77岁，平均44.3岁。全部标本按检验标本采集手册要求进行采集，排除甲、乙、戊型肝炎感染。

1.2试剂方法与仪器

1.2.1HCV-Ab检测 采用珠海丽珠试剂股份有限公司生产的HCV-Ab ELISA试剂盒，按说明书上的方法操作，阳性结果经二种方法复检。酶标仪为DR-200Be。

1.2.2HCV-cAg检测 采用山东莱博生物科技有限公司生产的HCV-cAg ELISA试剂盒，按说明书上的方法操作，阳性结果经二次复检。酶标仪为DR-200Be。

1.2.3HCV-RNA检测 采用中山大学达安基因股份有限公司生产的丙肝病毒核酸(PCR-荧光探针法)检测试剂盒，按说明书上的方法操作。仪器为7500 Real Time PCR System,仪器操作按说明书，检测线性范围为1.0×103～1.0×108IU/ml,结果超过1.0×103即报告为阳性。

1.2.4ALT、AST、γ-GT检测 采用全自动生化分析仪，仪器为罗氏DPP，为封闭式试剂, 按说明书上的方法操作。ALT、AST<40 U/L为正常，γ-GT<50 U/L为正常。

1.3统计学方法 数据采用EXCEL软件进行统计学分析，计量资料的比较采用t检验，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA检测结果阳性率 186例丙型肝炎患者HCV-Ab阳性率为95.7%，HCV-cAg阳性率为25.3%，HCV-RNA阳性率为82.7%。结果显示，丙肝抗体检测特异性和灵敏度高，是目前医院输血前/术前血检中检测丙肝的主要方法。HCV-RNA的检测有助于丙肝的早期及明确诊断。当机体出现抗HCV抗体之后，体内HCV核心抗原和抗体相结合，抗原检出率降低或不能检出，因此HCV-cAg检出率相对来说比较低(表1)。

表1 丙肝患者HCV-Ab、HCV-Ag及HCV-RNA的检测结果

2.2丙肝患者HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA感染阳性模式及其简要意义 186例中112例HCV-Ab、HCV-RNA同时阳性的说明丙肝病毒感染至少70天以后，慢性丙肝病毒感染，有传染性，临床要加以干预治疗。34例HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA全部阳性说明此时丙肝抗原没有被抗体完全中和，抗原抗体同时存在，有传染性，要结合ALT、AST 、γ-GT进行抗病毒积极治疗(表2)。

表2 丙肝患者HCV-Ab、HCV-Ag、HCV-RNA感染阳性模式及简要意义

2.3HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA均为阳性的ALT、AST、γ-GT检测结果与单纯HCV-Ab阳性的比较 186例中34例均为阳性的丙肝病毒，肝功能异常的与单纯HCV-Ab阳性的比较(P<0.01)且肝功能异常水平随着HCV-RNA水平的升高而增加，经相关性分析，HCV-RNA载量与ALT、AST、γ-GT水平之间有统计学意义(P<0.01)(表3)。

表3 丙肝抗原抗体HCV-RNA均为阳性的患者与单纯丙肝抗体阳性患者

注：两组比较，﹡P<0.05，﹟P<0.01。

3 讨 论

目前我国最常使用的检测丙肝抗体的方法就是ELISA法。它具有简单、快速、方便的特点。从表1看出HCV-Ab阳性率为95.7%，丙肝抗体检测特异性和灵敏度高，是目前医院输血前/术前血检中检测丙肝的主要方法，在日常输血前/术前常规检测中，ELISA法检测丙肝抗体具有重要的临床价值。但是ELISA试剂为筛检试剂，存在一定数量的假阴性和假阳性结果。ELISA在检测过程中影响因素诸多如类风湿因子、高免疫球蛋白血症、标本中超氧化物歧化酶(SOD)的干扰、用于固相包被的HCV基因工程抗原不纯等均可造成假阳性结果[3]。在检测过程中影响因素也很多如加样时间过长、检验速度过快、洗板等均可造成假阳性结果[4]。HCV-RNA阳性率为82.7%，HCR-RNA法检测阳性率却低于ELISA法，可能原因有ELISA试剂盒包被有C、NS3、NS4和NS5等4种抗原，能检出机体针对不同区域抗原产生的多种抗体；而PCR法检测HCV-RNA影响因素多，特别是HCV病毒为RNA，易被自然界大量存在的RNA酶降解，从而出现假阴性；另外机体内HCV病毒己被清除，HCV-RNA为阴性时，抗体会持续存在一段时间；以上分析可知，HCV-RNA阴性，并不能排除HCV的存在。

HCV-cAg阳性率为25.3%，HCV-cAg检出率低的原因，可能是由于有抗体的存在，干扰了抗原的检测或样本中的HCV抗体可能与用于核心抗原检测的单克隆抗体竞争结合抗原而造成HCV-cA g的假阴性。但是在HCV感染后至抗HCV抗体产生之前还有一段较长时期约40～70天，称为感染后血清阳转前的窗口期。HCV核心抗原作为HCV感染者体内出现的早期感染的标志，几乎与HCV-RNA同时出现。一般情况下，丙型肝炎病毒感染者在感染后数周内血清HCV抗原出现，在HCV感染后至抗HCV抗体产生之前还有一段感染后血清阳转前的窗口期(PWP)HCV，核心抗原的平均检出时间只比HCV-RNA晚约1天。HCV抗原检测耗时短，方法与常规酶免疫实验相似，不用添加仪器设备，大大缩短了窗口期。但是，当机体出现抗HCV抗体之后，体内HCV核心抗原和抗体相结合，抗原检出率降低或不能检出。因此，HCV核心抗原可应用于HCV感染早期诊断[5]。此法可以作为补充检测，但受检测方法、仪器等条件限制，灵敏度较差，从我们的数据来看，方法学有待于改进提高。

HCV各种检测方法各有利弊，从表2可以看出，HCV-RNA、HCV-Ab、HCV-Ag联合检测有利于提高HCV的检出率，对临床疑似HCV感染的患者可先初筛HCV-Ab、HCV-Ag，初筛阳性则用HCV-RNA进行确认，并对确认HCV阳性的患者进行抗病毒疗效监测，协助临床对HVC感染者早发现，早治疗[6]。提高丙肝病毒检出率、减少丙肝抗体窗口期漏诊率(丙肝游离核心抗原检测时间段：感染后14天至70天可检出，70天后丙肝游离抗原消失、丙肝抗体产生，抗体可检测时间段为70天后产生，自身免疫病或免疫功能缺陷的病人，丙肝抗体的检测时间可长达2年)。

从表3看出，本研究通过对34例HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA均为阳性的ALT、AST、γ-GT检测结果与27例单纯HCV-Ab阳性的结果比较，全阳组ALT、AST、γ-GT高于单阳组，差异有统计学意义。ALT、AST、γ-GT是体现肝细胞损害和坏死的特异性强、灵敏度高的指标，丙型肝炎患者血清中ALT、AST、γ-GT浓度可间接反映HCV在体内的状态，这就需要临床充分掌握丙肝患者病毒感染情况，定期进行疗效评价。同时从结果中我们还发现ALT、AST 、γ-GT水平随着HCV-RNA含量的升高而增加，全阳组明显高于单阳组(P<0.01)，差异有显著统计学意义。HCV-RNA水平则可间接反映肝细胞炎性损伤程度。检测HCV-RNA和ALT 、AST 、γ-GT可指导临床，为HCV的治疗效果提供实验室理论依据。

通过对186例丙肝患者的资料分析，联合检测HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA有利于提高HCV的检出率，对临床疑似HCV感染的患者可先初筛HCV-Ab、HCV-cAg，初筛阳性则用HCV-RNA进行确认，协助临床对HVC感染者早发现，早治疗。同时还发现HCV-RNA水平与ALT、 AST、 γ-GT浓度呈正相关，提示丙型肝炎患者血清中ALT、 AST、 γ-GT浓度可间接反映HCV在体内的状态，这就要求临床定期对丙肝患者进行肝功能检测，及时进行有效的抗病毒干预治疗，更好的服务于丙肝患者。

[1] Chen SL, Morgan TR.The natural history of hepatitis C virus (HCV) infection[J].Int J Med Sci,2006,3(2):4752.

[2] Kimwlt．The burden of hepatitis Cn the united state8〔J〕．1-Iepatology，2002，36(5S)：330-341．

[3] 杨晓芳，张英．ELISA法因孵育时间不同使丙肝抗体假阳性误判[J]．中外健康文摘，2011，8(44)：204．

[4] 葛鲁伟．丙肝抗体假阳性检测中EUSA法应用分析[J]．亚太传统医药，2011，7(8)：131-132．

[5] 黄锦江，杨静，刘小琦，等．HCV核心抗原检测技术筛查丙型肝炎的应用评价[J]．医学信息，2011，24(1)：256．

[6] 吴佳玲，王雷．丙型肝炎病毒检测的方法学评价及临床价值[J]．湖南师范大学学报，2010，7(2)：65-66．