直接显微镜菌落观察法诊断念珠菌*

张婷婷 刘 晶 张 莉

(泰山医学院附属医院，山东 泰安 271000)

作为真菌中最常见的条件致病菌，念珠菌又名假丝酵母菌，它广泛的存在于自然界，尤其是水、蔬菜、水果、奶制品中[1]。正常情况下念珠菌可存在于健康人的口腔、肠道、阴道等处，无致病性,但当人体抵抗力下降时，其作为条件致病菌,感染呈上升趋势[2]。其中以白色念珠菌最为常见，致病力也最强。(近年来，由于糖尿病，肺结核，肿瘤，严重烧伤，脏器移植等基础疾病的发生，而导致的患者机体免疫力下降以及由此引发的念珠菌感染呈现高发的趋势。因此，准确，快速的念珠菌鉴定，及时的向临床医师提供可靠的确诊报告就成为检验科微生物室亟待解决的课题。)因不同的真菌菌落所表现特征差别显著，如念珠菌在普通琼脂、血琼脂与沙保弱培养基上，具有生长良好，菌落为灰白色或奶油色，表面光滑等特点，可为真菌分类工作提供重要的诊断依据。笔者自2009 年8月至2013年6月对我院微生物室收集的105例念珠菌阳性标本,分别采用直接显微镜菌落观察法、显微镜不染色直接镜检及革兰氏染色法进行了鉴定实验，试图对比分析出何种鉴定方法更加准确快速及时，以更好的服务于临床诊断治疗。

1 材料与方法

1.1标本来源：我院自2009年8月至2013年6月临床科室送检细菌培养念珠菌阳性标本105例，其中痰62例、尿32例，血培养2例，其它标本9例。

1.2方法：①直接显微镜菌落观察法：将培养后的念珠菌的沙保弱(或中国蓝)折光性较好的平板，直接放置于显微镜(奥林帕斯)上，调动细螺旋，用低倍镜仔细观察菌落。②显微镜不染色直接镜检法：用取菌环取菌落置于滴有无菌生理盐水的涂片上，在显微镜下观察。③革兰染色法：常规涂片革兰染色镜检(注明染色液试剂品牌，公司)。

2 结 果

2.1三种方法的镜下观察情况 ①直接显微镜菌落观察：可以看到背景下多个的圆形的菌落，普通的细菌菌落区别于黄色的普通细菌菌落而念珠菌的菌落为黑色、均匀的细砂粒状(见图1、图2)，在营养丰富的生长条件下还能很明显看到芽生孢子，这是区别于其它细菌的显著特点。镜下观察普通细菌菌落无论如何调整焦距及变换视野，菌落镜下菌落形态不会有任何明显变化，而只能观察到菌落呈现均一的黄色，没有细沙粒状的形态。②显微镜不染色直接镜检法：阳性标本可见有菌丝、孢子或单细胞真菌[3]。③革兰染色法：念珠菌为革兰染色阳性，菌体圆形或卵圆形。

2.2三种方法的操作步骤和耗时情况 见表1。

表1 三种方法的操作步骤和耗时情况

*方法1和方法2比较，**方法1和方法3比较，***方法2和方法3比较。

这三种方法所消耗的时间为同一个熟练的技术操作人员在相同的实验条件下分别对105个样本进行观察和操作所分别消耗的时间的平均值。P<0.05,时间差异有统计学意义。

图1 ：念珠菌的菌落为黑色、均匀的细砂粒状(×10)；

图2 ：念珠菌的菌落为黑色、均匀的细砂粒状，图中可以清楚的看到芽生孢子(×10)；

图3 普通的细菌菌落，菌落呈现均一的黄色

图4 普通的细菌菌落，菌落呈现均一的黄色(×10)。

3 讨 论

真菌为真核细胞性微生物，在自然界分布广泛，种类繁多，数量极大，其中绝大多数对人类有益，但少数也可引起感染性、中毒性以及反应性疾病。尤其近年来，伴随着肿瘤，慢性消耗性疾病和器官移植后免疫抑制剂的使用而发生的真菌并发感染呈现逐年上升趋势，成为医院难治性感染疾病的重要组成部分，因此，寻找一种准确快速高效的念珠菌鉴定方法就成为检验科微生物室当前的重要工作目标。但是念珠菌菌落在不同成分的培养基上所呈现的形态结构并不完全相同，因此我们对目前常用的三种念珠菌镜下检验方法进行了对比实验，以确定何种方法更加准确快速，以期更好的服务于临床工作。通过本研究的三种念珠菌鉴定方法对比实验数据证实，不染色镜检法是较为直接快速的检验方法，特别是对于细胞和酵母菌，能通过显微镜最直观的做出鉴别，但是消耗的时间多于直接菌落观察法(P<0.05)。

革兰染色法作为最为经典的染色法，仍是我们常规工作中的首选。经革兰染色后孢子在显微镜下很易识别，标本阳性率较高,但是相对于其它两种方法，耗时较长，步骤繁多。

直接显微镜菌落观察法较为简单，不需要涂片、染色，操作更为容易。而且对于培养后的培养皿上，在念珠菌和细菌较难鉴别时，此法更能直接作出判断。在三种方法中耗时最短，步骤简单，准确高效。因此，从2009年8月至今，我院微生物室工作人员通过运用直接显微镜菌落观察法后，不仅提高了工作效率、节省了时间，而且还节约了成本，通过与染色法对照实验证实，对念珠菌检验无一例漏检。优于其它方法，值得推广应用，由此证明念珠菌的直接菌落镜检法具有准确快速高效的特点，在今后的临床检验工作中可以发挥其优势，更经济更有效的丰富日常检验技术方法。

[1] 叶应妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程[M].第3版．南京：东南大学出版社．2006：235-237.

[2] 沈雪敏，薛婷君，施琳俊,等. 小檗碱对白色念珠菌细胞周期的影响[J].中国口腔医学杂志,2012,47(1):123-126.

[3] 陈佩宣.念珠菌快速测定试剂盒的选择[J].2011,8(2):226-227.