远近配穴法针刺对偏头痛模型大鼠血浆CGRP及ET-1的影响*

孟宪慧，张治国，向丽华

(1.北京市丰台中西医结合医院，北京 100072;2.中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700)

偏头痛以反复发作的一侧或双侧头角痛和自主神经功能紊乱为主要临床特征，是社区中医全科门诊的常见疾病，属于中医学“头风”范畴。从经络循行看，病位在手足少阳经、手少阳三焦经头部走形为“上项，系耳后，直上出耳上角”，其病机多由于外邪侵袭少阳经脉、肝火夹痰夹瘀阻塞少阳经脉、脉络不通，不通则痛，临床多选用少阳经穴治疗偏头痛。笔者在另一临床实验中证实，选用少阳经穴遵循“腧穴所在，主治所在”的局部取穴原理和“经脉所通，主治所及”的远道取穴原理，采用远近配穴针刺治疗偏头痛取得较好的临床疗效。本实验旨在通过复制实验性偏头痛大鼠模型，通过检测血清中CGRT、ET-1含量，探索远近配穴法针刺治疗偏头痛的治疗效果及作用机制。

1 材料

1.1 动物

SD大白鼠40只，雌雄各半，体质量180～290 g，购自中国食品药品检定研究院(许可证编号SCXK(京)2009-0017)。动物清洁级实验室喂养，自由摄食、饮水。饲养温度20～25℃，湿度40% ～70%，噪音＜60分贝，换气次数10～20次/min。

1.2 主要药物和试剂

硝酸甘油注射液由广东白云山明兴制药有限公司生产(批号100704)，1ml硝酸甘油含量为5 mg;降钙素基因相关肽(CGRP)ELISA试剂盒和内皮素-1(ET-1)ELISA试剂盒，均来自于上海越研生物科技有限公司。

2 方法

2.1 分组及干预方法

将健康SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、非穴组、远近配穴组4组。干预方法:正常组SD大鼠不做任何处理，作为正常对照组;模型组造模成功后不做针刺处理;非穴组选取双侧肋下2个固定非穴点作为对照刺激点;远近配穴组采用“远近配穴”法，局部选穴风池、配伍远端选穴中渚、外关。非穴组和远近配穴组均根据华兴邦等制作的大鼠穴位图谱[1]选穴。2组均于造模术后30 min行针刺手法，留针20 min。

2.2 模型制备

参考倪丽伟等[2]方法，在大鼠头部(额颞部)皮下注射硝酸甘油(10 mg/kg)，复制实验性偏头痛大鼠模型。

2.3 取材、处理

将动物断头处死、打开腹腔，用负压采血器收集腹主动脉血约10 mL，注入含0.3 mg肝素钠的冰冷试管中轻轻摇匀。然后，4℃3000 r/min离心10 min，分离血浆，按编号放入低温冰箱中，－20℃储存备用。

2.4 血浆CGRP及ET-1含量测定方法

2.4.1 血浆CGRP含量测定方法(放免法)[3]

将备用的血浆置于室温中复融后混匀，再次4℃3000 r/min离心10 min。取上层清液0.5 mL，加1 mL酸性无水乙醇(100 mL无水乙醇加1.2 mL冰醋酸)振荡1 min，4℃ 3500 r/min离心15 min。将上层清液倒入青霉素小瓶内，45℃水浴蒸干，样品完全干燥后(约24 h)加盖、封口，－20℃放存。测定时，每瓶加pH7.4 PBS 0.5 mL溶解、混匀，倒入塑料试管中，－20℃放存4 h以上，样品完全冻结后取出放置。4℃情况下完全溶解后，取上清液200 mL检测。取聚苯乙烯试管编号，按说明书中CGRP RIA加液程序进行操作后充分混匀，室温放置20 min，4℃ 3500 r/min离心25 min，吸弃上清液，在r计数器上测定各管中沉淀的放射性计数cpm，FJ-2003r自动计数器可以直接得到样品CGRP的血浓度。

2.4.2 血浆ET-1含量测定方法(放免法)[3]

将备用的血浆置于室温中复融混匀，4℃ 3000 r/min离心5 min，取上层清液100 μL检测。取聚苯乙烯试管编号，按说明书中ET RIA加液程序操作后充分混匀，室温放置15 min，4℃ 3500 r/min离心15 min，吸弃上清液，测各管中沉淀的放射性计数cmp，在FJ-2003r自动计数器上可以直接读出ET-1的血浓度。

2.5 统计学方法

应用SPSS统计软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差(s)表示，模型对照组和空白对照组组间比较，各针刺治疗组与模型对照组进行两两比较，非经非穴组与远近配穴组间进行比较。

3 结果

3.1 大鼠一般状态观察

除空白对照组外，其余动物造模后30 min左右均出现耳红、前肢频繁搔头、爬笼次数增多、烦躁不安现象。远近配穴针刺治疗组大鼠在针刺治疗5 min开始，上述现象逐渐消失趋于正常。模型组及非经非穴针刺治疗组大鼠上述现象持续不能缓解约150 min，继而出现蜷卧、活动减少状态。

3.2 针刺对实验性大鼠模型血浆中CGRP、ET-1含量的影响

表1显示，模型对照组CGRP含量明显升高，与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);非经非穴针刺治疗后，CGRP含量有所下降，与模型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);经远近配穴针刺治疗后大鼠血中CGRP含量显著下降，与模型对照组和非经非穴组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。提示远近配穴针刺治疗实验性偏头痛大鼠模型，有显著降低动物血中CGRP含量的作用，其治疗效果明显优于非经非穴针刺治疗组。

表1 远近配穴法针刺对偏头痛大鼠模型血浆中CGRP、ET-1含量的影响

本实验中，模型对照组动物血中ET-1含量明显降低，与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);非经非穴针刺治疗后ET-1含量有所升高，与模型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);经远近配穴针刺法治疗后大鼠血中ET-1含量显著升高，与模型对照组和非经非穴组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)。提示远近配穴针刺法治疗实验性偏头痛大鼠模型可以显著升高动物血中ET-1含量，其效果明显优于非经非穴组。

4 讨论

近年来，对偏头痛发生机制的研究多集中于各种血管神经肽类物质。姚干[3]等研究表明，在硝酸甘油诱发的实验性偏头痛大鼠模型血浆中，具有强烈舒张血管作用的神经肽降钙素基因相关肽(CGRP)的含量升高，具有强烈收缩血管作用的内皮素(ET)含量降低。血浆中CGRP、ET含量的不平衡，是偏头痛发作时的重要机理。我们在另一临床研究中证实，采用远近配穴法针刺治疗偏头痛，可以有效改善偏头痛发作时的疼痛程度，控制发作频率。本实验研究证实，远近配穴针刺法治疗前后大鼠的行为特征发生明显变化，说明远近配穴针刺法可以明显减轻硝酸甘油诱发的偏头痛。实验性偏头痛模型大鼠血浆中CGRP含量升高、ET-1含量降低。经远近配穴法针刺治疗后，CGRP含量降低、ET-1含量升高。表明远近配穴法针刺治疗使实验性偏头痛大鼠模型血浆中CGRP和ET-1的含量达到一个相对平衡状态，从而起到治疗偏头痛的作用。

[1]华兴邦，李辞荣，周浩良，等.大鼠穴位图谱的研制[J].实验动物与动物实验，1991(1):1.

[2]倪丽伟，马莎，陈祥芳，等.针刺对实验性偏头痛模型大鼠行为学症状的影响[J].福建中医学，2008，6(39):49-50.

[3]姚干，陈明岭，任永欣.头风胶囊对偏头痛大鼠血中CGRP、ET和His含量的影响[J].成都中医药大学学报，2001，12(24):38-41.