自拟跌创膏治疗家兔急性软组织损伤的实验研究

赵智敏，王志义

(1.辽宁医学院，辽宁 锦州 121001;2.辽宁省锦州市锦州石化医院，辽宁锦州 121001)

软组织损伤是骨伤科常见疾病类型，一般是在外力作用下，直接或间接作用于人体引起组织的局部肿胀、疼痛、功能障碍和青紫瘀斑等，中医认为此病为气滞血瘀证。自拟跌创膏是结合中医学的辨证情况，选取大黄、黄柏等药物组成的具有行气消肿、舒筋活络、抗炎镇痛的方剂。本次研究在家兔急性软组织损伤模型中观察自拟跌创膏在抗炎、消肿等方面的作用，并探讨其作用机制，现总结如下。

1 仪器与试药

SP-3430气相色谱仪(安捷伦公司);HFX-II型显微镜(日本尼康公司);FE20型PH计(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);三口玻璃反应瓶、水浴锅等。

中药大黄、黄柏、红花、血竭、乳香、没药、冰片、独活、当归、姜黄、川芎、郁金、樟脑、薄荷油、白芷(国药集团)、红花油(福建太平洋制药有限公司，国药准字Z35020457)、甘油、三乙醇胺、液体石蜡、尼泊金乙酯(天津科密欧)、生理盐水(青岛日水生物技术有限公司)。家兔体质量2.14±0.67 kg，全部雄性，上海市西普尔-必凯实验动物有限公司(许可证号SCXK(沪)2008-0016)。

2 方法与结果

2.1 自拟跌创膏的制备

自拟跌创膏组成:大黄50 g，黄柏20 g，红花23 g，血竭15 g，乳香10 g，没药20 g，冰片15 g，独活30 g，当归30 g，姜黄40 g，川芎40 g，郁金25 g，樟脑20 g，薄荷油 15 g，白芷 20 g，甘油 300 g，三乙醇胺 50 g，液体石蜡200 g，尼泊金乙酯醇溶液(5%)适量，蒸馏水适量。制备方法:取樟脑处方量研末备用，乳香10 g、没药20 g、川芎40 g、郁金25 g加70%乙醇200 ml加热至50℃搅拌4 h过滤，滤渣以同样的方法再提取1次，合并提取液浓缩至原来的1/3，浓缩液备用;大黄50 g，黄柏20 g，红花23 g，血竭15 g，冰片15 g，独活30 g，当归30 g，姜黄40 g，白芷20 g，9味中药进行微粉，过200目筛混匀备用;将提取液、药粉、樟脑粉及薄荷油15 g、甘油300 g、三乙醇胺50 g、液体石蜡200 g加入到三口反应瓶中，50℃搅拌1 h制成油相，然后在顺时针搅拌下滴入纯化水中，加入尼泊金乙酯醇溶液(5%)，搅拌至凝即得自拟跌创膏。

2.2 家兔软组织损伤模型的建立

先准备好相关造成家兔软组织损伤的材料，由自制的打击棒、套筒、支架、固定架等组成，打击棒头部面积为2.0 cm2，撞击冲量为2 kg/s。所有家兔均饲养1周后，在家兔右后大腿中段剃毛，范围大约为6 cm×5 cm，在此范围内做好标记，作为打击棒的作用点。然后将家兔固定好，由同一人从约50 cm高处自由落下打击棒，造成急性软组织损伤。

2.3 给药方案

挑选符合急性软组织损伤家兔45只分成3组，每组15只，分别为生理盐水组、红花油组及自拟跌创膏组。生理盐水组采用生理盐水涂擦患处，每日2次，每次涂擦约5 ml液体;红花油组采用红花油涂擦，每次5 ml，每日2次;自拟跌创膏组每日涂抹患处1次，涂抹均匀即可。以上3组均治疗1周。

2.4 疗效评定标准

参考相关的报道[1]予以评定。观察治疗后的第1、2、3、4、7天家兔在肢体肿胀程度和痛阈值方面的差异性，肿胀程度以游离标卡尺测量;由受伤后大腿周径和受伤前大腿周径之差构成。参考报道[2]的标准将治疗不同天数的3组家兔在右前肢背屈侧面安装含有饱和氯化钾溶液的电极，无电极级则浸生理盐水固定在左前肢背屈侧，两极均与测痛仪相连，用电流强度线型递增的直流电将K+导入皮肤作为痛刺激，以家兔出现撤退反应作为痛阈反应，共测定3次，每次间隔5 min，取平均值为痛阈值。另外，在试验的第1、4、7天抽取静脉血进行 bFGF、TGF-β1、细胞转化率、总补体活性水平、炎症细胞、成纤维细胞、巨噬细胞等指标观察。免疫组织化学法为取带有软组织损伤的家兔组织块，大小为1.5 cm×1.5 cm，用10%甲醛溶液固定、常规脱水、石蜡包埋后连续切片，厚度为4 μm，并分别进行HE染色和HO-I免疫组织化学染色。HE染色利用美国SGYEGHDG公司提供的试剂进行染色，HO-I免疫组织化学染色则采用链霉素-生物素免疫染色法，抗4℃孵育过夜，其他参考试剂说明书进行，最后用显微镜观察、拍照并分析。

2.5 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析，将相关因素调查统计的内容作为变量，计数资料采用χ2检验进行分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2.6 3组试验方案对软组织损伤恢复分析

2.6.1 3组家兔肢体肿胀程度比较分析 表1显示，在观察期内生理盐水组的肢体肿胀程度越来越重，第4天肿胀开始下降;红花油组肿胀第3天开始下降;自拟跌创膏组肿胀持续性消退，起效快，与前2组在肢体肿胀程度比较差异有统计学意义(P＜0.05)，具有可比性。

表1 3组家兔肢体肿胀程度比较分析(s，cm)

表1 3组家兔肢体肿胀程度比较分析(s，cm)

比较点 生理盐水组 红花油组 自拟跌创膏组第1天1.56±0.36 1.34±0.32 1.25±0.34第2天 1.84±0.45 1.43±0.41 1.14±0.43第3天 2.23±0.54 1.29±0.43 0.97±0.34第4天 2.14±0.59 1.04±0.56 0.78±0.26第7天 1.87±1.12 0.86±0.45 0.63±0.24 P值 ＜0.05

2.6.2 3组家兔肢体痛阈值比较分析 表2显示，生理盐水组和红花油组在痛阈值上均呈升高趋势，但较为平稳;自拟跌创膏组在痛阈值上随时间推移改善显著，与前2组在痛阈值上比较差异有统计学意义(P＜0.05)，具有可比性。

表2 3组家兔肢体痛阈值比较分析(s)

表2 3组家兔肢体痛阈值比较分析(s)

比较点 生理盐水组 红花油组 自拟跌创膏组第1天1.43±0.36 1.42±0.30 1.46±0.32第2天 1.44±0.34 1.45±0.34 1.58±0.36第3天 1.44±0.46 1.52±0.14 1.68±0.42第4天 1.49±0.43 1.54±0.46 1.79±0.51第7天 1.51±0.49 1.56±0.37 1.98±0.48 P值 ＜0.05

2.6.3 3组家兔肢体相关指标比较分析 表3显示，生理盐水组的 bFGF、TGF-β1、细胞转化率、总补体活性水平、炎症细胞、成纤维细胞、巨噬细胞指标变化幅度最低，红花油组次之，自拟跌创膏组最高。自拟跌创膏组以上指标和其他2组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，具有可比性。

2.6.4 免疫组织化学法镜下观察分析 图1为正常的家兔组织;图2为软组织损伤的家兔组织，可见细胞周围间隙增宽;图3可见HE染色后细胞增色，泡沫细胞增加明显;图4为治疗7 d后细胞组织中出现新生的毛细血管。

3 讨论

急性软组织损伤属于中医学“筋伤”范畴，多是由于外来暴力引起筋肉、脉络损伤、血脉外溢等引起，其病理机制为气滞血瘀、脉络不通[3]。从现代医学角度分析为局部皮肤、软组织损伤，严重者为肌纤维断裂、小血管破裂、血管壁通透性增加、血管内液体外渗致组织肿胀，生物活性物质如组织胺、5-羟色胺、缓激肽等激活，产生了大量的炎性细胞浸润致组织坏死，同时刺激神经的疼痛[4]。

自拟跌创膏结合中医学对此病的辨证依据，“不通则痛，不容则痛”等，方中以大黄、黄柏为君药。现代药理学表明，大黄能减轻毛细血管通透性，改善脆性，可增加血小板和血液流变学情况，改善炎症细胞代谢;黄柏清热燥湿，具有祛湿消肿的作用，可促进局部血肿的吸收和激化[5]，促进血清补体水平的升高;红花、血竭、乳香、没药为臣药，有活血化瘀作用;血竭有敛疮生肌功效。这些药物均能促进巨噬细胞、成纤维细胞的生成，抑制炎症细胞的繁殖，促进生子因子bFGF、TGF-β1等水平的提高。独活、当归、姜黄、川芎为佐药，均有理气活血作用和加强通络效果;冰片则有消肿止痛作用。所以，自拟跌创膏有活血化瘀、通络舒筋、消肿止痛、祛风除湿、强壮筋骨之功效。研究[6]病理学指出，采用活血类中药治疗软组织损伤后，在组织形态学上第1天的表现为表皮脓痂形成，皮下有弥漫性出血和多中性粒细胞浸润，肌纤维断裂、扭曲，玻璃样变明显，周围血管扩张明显。第7天则表现为表皮大致正常，皮下组织增生不明显，无明显的中性粒细胞浸润，肌纤维明显愈合，肌间质无明显肿胀，小血管无明显充血。

表3 3组家兔肢体相关指标比较分析(s)

表3 3组家兔肢体相关指标比较分析(s)

比较点生理盐水组 红花油组 自拟跌创膏组bFGF 第1天94.21±10.74 98.45±10.58 100.46±10.36第4天 95.10± 9.98 104.25±10.35 109.43± 9.36第7天 96.22± 9.94 108.46±11.24 116.36± 7.95 TGF-β1 第1天 113.68±18.46 114.46±17.35 116.96±18.24第4天 114.75±17.35 116.35±17.58 125.47±19.35第7天 116.12±17.89 119.06±18.04 130.35±20.54细胞转化率(%)第1天 30.87±6.66 31.12±6.25 35.36±3.89第4天 31.04±6.46 33.35±5.95 40.84± 3.68第7天 32.12±5.62 36.24±5.37 52.37± 4.63总补体活性水平(u/ml)第1天 33.79±0.59 36.37±0.62 38.36±0.72第4天 33.98±0.55 39.38±0.72 40.78± 0.68第7天 34.13±0.56 41.13±0.73 49.34± 0.79炎症细胞 第1天 63.21±10.35 59.47±10.13 57.36± 8.89第4天 60.24±9.97 55.49±8.36 50.17±6.82第7天 57.86±9.87 51.93±7.92 36.36±4.36成纤维细胞 第1天 33.23±5.30 34.84±5.85 35.85±5.93第4天 34.83±5.80 36.72±6.02 38.94±6.14第7天 35.85± 6.30 37.83± 5.94 45.83±6.78巨噬细胞 第1天 42.13±6.70 43.26±5.18 46.37±3.95第4天 43.17± 5.30 45.89± 3.68 53.37±4.84第7天 44.10± 5.50 50.76± 4.87 63.36±5.50 P值 ＜0.05

图1 正常家兔组织

图2 软组织损伤家兔组织，可见细胞周围间隙增宽

图3 HE染色后细胞增色，泡沫细胞增加明显

图4 治疗7 d后细胞组织中出现新生毛细血管

从本次研究结果看，自拟跌创膏在肢体肿胀程度、痛阈值、bFGF、TGF-β1、细胞转化率、总补体活性水平、炎症细胞、成纤维细胞、巨噬细胞等指标变化较生理盐水组、红花油组差异有统计学意义，说明该药物效果确切，且本次研究结合现代药物制剂手段，制成膏剂携带方便、操作简单，且不存在散剂等皮肤过敏等不良反应，机体吸收快速，符合软组织损伤后机体代谢迅速的特点，可起到“药到病除”的功效。报道[8]通过散瘀止痛巴布膏治疗小鼠后发现，在改善大鼠全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原含量、bFGF、TGF-β1、细胞转化率和吞噬细胞等细胞上效果明显。

结合相关的报道[9，10]我们认为，中药外用在软组织损伤上的作用机制可能有以下几点:①抑制炎性细胞渗出、浸润，调节炎性介质的合成和释放，达到抗炎的作用;②改善机体代谢，促进增生病变的转化和稀释，使萎缩的结缔组织恢复，促使机体处于正常平衡状态;③通过机体特异性免疫力，增强巨噬细胞吞噬能力，调节机体的炎性细胞反应，加速机体清除体内积血后经络瘀血;④通过痛阈而达到镇痛作用;⑤改善损伤部位的微循环和血液流变学性质，纠正PH值，降低毛细血管通透性;⑥促进生长因子的生成，修复机体的组织代谢水平。但是，如何从中药影响生长因子的信息传递而参与调节局部炎症反应、局部组织的修复等过程的课题是今后的发展方向。

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