振源胶囊的生物限度测定方法分析

郑洪梅

振源胶囊的生物限度测定方法分析

郑洪梅

目的探讨振源胶囊的生物限度测定方法。方法本次医学观察以2005版《中国药典》中对于微生物限度测定方法的相关规定为基础，通过离心稀释法对振源胶囊的酵母菌、真菌等细菌类型进行常规的检查和验证。结果两组稀释剂的试验菌回收率均在70%以上。通过常规方法对控制菌进行试验，未检出阴性对照菌，但检出阳性对照菌。结论由本次医学研究结果可知，振源胶囊中的生物限度测定结果符合2005版《中国药典》中对于微生物限度测定方法的相关规定。

振源胶囊；生物限度；测定方法

针对含抑菌成分的中成药微生物限度检查，须消除供试液抑菌活性后，再依据《中国药典》规定的相应方法检查，并对使用的检测方法进行验证试验，进而确定试品的抑菌活性及确保测定方法的可靠性。本文以振源胶囊为例，证实了生物限度测定法是符合相关规定的，具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 设备 所用设备包括江苏常熟双杰侧试仪器厂生产的 T500型电子天平，台洲市淑江无星机械仪器有限公司生产的YJA电动匀浆仪，铁岭市医疗器械总厂生产的628型高压蒸汽灭菌器，上海跃进医疗器械厂生产的GZX-DH-40×45型25℃恒沮培养箱以及35℃恒沮培养箱。

1.1.2 培养基 所用培养基包括中国药品生物制品检定所生产的 040525玫瑰红钠琼脂培养基、0508252PH7.0氯化钠-蛋白胨溶液、050104营养琼脂培养基、040409改良马丁琼脂培养基、050915改良马丁培养基以及050613胆盐乳糖培养基。

1.1.3 菌种 所用菌种包括中国药品生物制品检定所生产的CMCC（F）黑曲霉菌、CMCC（F）98001白色念珠菌、CMCC（B）44102大肠埃希菌、CMCC（B）26003金黄色葡萄球菌以及CMCC（B）63501枯草芽孢杆菌。

1.1.4 药物 振源胶囊（国药准字 Z22026091，吉林省集安益盛药业股份有限公司生产）。

1.2 方法

1.2.1 酵母菌、霉菌和细菌的计数方法

1.2.1.1 供试品的制备 取 10g供试品，与100ml的PH7.0氯化钠-蛋白胨溶液相互混合，电动搅拌摇匀后，溶解在 45℃的水中，制备成 1:10浓度的供试品，取供试品10ml，以500r•min-1的速度进行连续5min的离心处理，取2ml上层清液，分别置于两个等量平皿中。

1.2.1.2 菌液制备 分别对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜斜面培养物铂金耳在37℃的环境中留置18～24h，并加入适量0.9%氯化钠溶液，其浓度相当于标准比浊液，作为原液，将经过灭菌处理的0.9%氯化钠溶液9ml加入1ml原液中，10倍稀释至10-6～10-7，细菌数约50～100cfu•ml-1，对控制菌和活菌进行计数。取 1ml连续18～24h在25℃中培养的白色念珠菌液体培养物，加入灭菌处理的0.9%氯化钠溶液9ml，10倍稀释为 10-7，细菌数约 50～100cfu•ml-1，对活菌进行计数。取5ml连续7d在25℃中培养的黑曲霉菌新鲜斜面培养物，将经过灭菌处理的0.9%氯化钠溶液9ml逐管10倍稀释至10-5，细菌数为50至100cfu•ml-1，逐管对活菌数进行计算。

1.2.1.3 回收率检查 ①稀释液对照组：取1ml稀释液，对稀释液对照试剂中的菌落数进行测定。②供试品对照组：对供试品本底菌落数进行测定。③菌液组：对各个菌株的试验菌落数分别进行测定。④试验组：取1ml浓度为1:10的供试品，将其置于平皿中，分别加入1ml细菌数约50至100cfu•ml-1的菌株实验菌液，立即加入玫瑰红钠琼脂培养基和营养琼脂培养基，在其完全凝固后，连续 24～72h内将其置于恒定温度内进行观察[1]。

1.2.1.4 菌落计数方法 连续48h内使用营养琼脂培养基对细菌进行培养，对细菌数进行逐日点计算，每48小时报告一次菌落数检测结果。连续72h使用玫瑰红钠琼脂培养基对酵母菌和真菌进行培养，对细菌数进行逐日点计算，每72小时报告一次菌落数检测结果[2]。

1.2.2 控制菌测定方法 ①阴性菌对照组：将100ml胆盐乳糖增菌培养基加入1ml和10ml的1:10供试品中，后加入 1ml细菌数约 10～100cfu•ml-1的金黄色葡萄球菌，根据相关规定对控制菌测定方法进行检查[3]。②试验组：将100ml胆盐乳糖增菌培养基加入1ml和10ml的1:10供试品中，后加入1ml细菌数约10～100cfu•ml-1的大肠埃希菌，根据相关规定对控制菌测定方法进行检查[4]。

2 结果

本次医学研究利用常规法对振源胶囊微生物限度进行检查，结果如表1所示。

表1 酵母菌、真菌和细菌的技术方法及结果

3 讨论

本研究根据2005年版《中国药典》中对于微生物限度检查法的相关规定，对振源胶囊中的醉母菌、真菌和细菌数进行了测定，每一测定均进行3次独立的试验。研究结果证实，振源胶囊对于枯草芽抱杆菌具有明显的抑制作用，因而可通过培养基稀释法和离心处理对振源胶囊中的细菌数进行检查，振源胶囊对于酵母菌和真菌则无明显的抑制作用，因此可通过常规法对本品的酵母菌和真菌数进行检查。

[1] 罗书香.对企业药品微生物限度检查方法验证资料的审核分析[J].中国医院药学杂志,2007,27(5):686-687.

[2] 刘佳宁.影响微生物限度检查方法验证结果的若干因素分析[J].中国药业,2007,9(2):35-36.

[3] 许华玉,杜鹃,汤杨.药品微生物污染检测方法验证的必要性[J].中国药品标准,2005,6(4):46-47.

[4] 杜鹃,冯为民,杨福河.三类不同药品的微生物限度检验方法验证比较[J].药物分析杂志,2006,1(6):840-842.

R284.1

A

1673-5846(2014)01-0051-02

吉林省集安益盛药业，吉林通化 134200