维药神香草乙酸乙酯部位的抗炎、止咳、祛痰及平喘作用研究△

麦合苏木·艾克木 努尔江·肉孜 于 洋 阿不都热依木·玉苏甫

(新疆医科大学维吾尔医学院，新疆 乌鲁木齐 830011)

维吾尔医药(简称维药)神香草(Hyssopus officinalis L.)为唇形科(Labiatae)多年生草本植物，在新疆维吾尔自治区北部有野生分布。《维吾尔药志》中记载道:药用全草主要含黄酮、挥发油、生物碱等化学成分，常用于镇咳平喘、清热利湿。维吾尔医用于治疗气管炎的咳嗽、气喘、感冒发烧和风湿等病证[1－2]。近年在新疆维吾尔自治区人工种植神香草获得成功，为开发和利用神香草的食用价值和药用价值提供了充足的资源。本课题组对神香草抗哮喘药效物质及其作用机制进行了研究，发现神香草水提物、醇提物具有显著的抗炎、止咳、平喘作用，但至今尚未发现上述作用的报道。因此本研究采用系统溶剂法对神香草醇提物进行初步分离，制备神香草乙酸乙酯部位，通过小鼠抗炎、止咳、祛痰以及豚鼠平喘实验，探讨神香草乙酸乙酯部位的抗炎、止咳、祛痰及平喘作用，从而为其临床应用提供科学依据。

1 材料

1.1 药品与试剂:神香草全草由新疆维吾尔自治区维吾尔医院药房提供，经新疆维吾尔自治区维吾尔医院制剂中心质检部鉴定为唇形科植物硬尖神香草(Hyssopus officinalis L.)的干燥地上部分(批号:20110416)。神香草乙酸乙酯部位由本实验室制备，取2kg神香草药材加12倍量的70%的乙醇提取3次，1h/次，提取液以1:3比例分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取3次，其中以乙酸乙酯部位浓缩，干燥，备用。氨茶碱(0.1g/片，四川锡成药业有限公司，批号:11070223)，急支糖浆(太极集团重庆涪陵制药厂有限公司，批号:20111201);二甲苯(天津市福晨化学试剂厂，批号:100909);酚红(天津市福晨化学试剂厂，批号:110908)，浓氨水(天津市福晨化学试剂厂，批号:110905);三氯化铝(天津市福晨化学试剂厂，批号:110406);氯化乙酰胆碱(上海三思试剂有限公司生产，批号030527);磷酸组织胺(上海丽珠东风生物技术有限公司生产，批号1200915);无水乙醇、氯化钠、无水硫酸钠(分析纯)。

1.2 验动物:昆明种小鼠18～22g，豚鼠160～200g，均为雌雄兼用，由新疆医科大学实验动物中心提供[生产许可证:SCXK(新)2011－0004]。

1.3 仪器:EYELAN－1000旋转蒸发仪(日本EYELA公司)，DK－S24数显电热恒温水浴锅(江苏省金坛市医疗仪器厂)，BL1500电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，UV－240型分光光度计(日本岛津公司)，SK8210HP型超声波清洗器(上海科导公司)。

2 方法

2.1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(抗炎作用):参照文献[3－6]，取小鼠50只，随机分成 5组:空白对照组(0.9%生理盐水)，阳性对照组(急支糖浆，5.0g/kg)，神香草乙酸乙酯部位高、中、低剂量组(6.0g/kg、3.0g/kg、1.5g/kg);灌胃给药，1次/日，连续7d，灌胃体积均为0.2mL/10g，末次给药后30min，各组小鼠均在小鼠右耳前、后面均匀涂二甲苯20μL致炎，1h后颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm打孔器分别在两耳的同一部位打下耳片，精密称重，以左右耳重量差为肿胀度，以此判断神香草乙酸乙酯部位对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响。

2.2 对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响(止咳作用):参照文献[7]，取小鼠50只，随机分成5组:空白对照组(0.9%生理盐水)，阳性对照组(急支糖浆，5.0g/kg)，神香草乙酸乙酯部位高、中、低剂量组(6.0g/kg、3.0g/kg、1.5g/kg);灌胃给药，1次/日，连续 7d，灌胃体积均为 0.2mL/10g，末次给药后l h，将小鼠逐一放入4L密闭干燥容器内，恒压喷入25%浓氨水气雾，喷雾5s引咳，观察其咳嗽潜伏期及2min内咳嗽次数。

2.3 对小鼠气管段酚红排泌量的影响(祛痰作用):参照文献[8]，取小鼠50只，随机分成5组:空白对照组(0.9%生理盐水)，阳性对照组(急支糖浆，5.0g/kg)，神香草乙酸乙酯部位高、中、低剂量组(6.0g/kg、3.0g/kg、1.5g/kg);灌胃给药，1次/日，连续 7d，灌胃体积均为 0.2mL/10g，最后一次给药后30min，每只小鼠腹腔注射5%酚红生理盐水溶液0.2mL/20g体重，30min后处死小鼠，仰位固定，颈部拉直，解剖分离出气管，将各气管段放入预先盛有1.5mL 5%NaHCO3溶液的试管中，超声波清洗，使气管段中的酚红完全释放，清洗液离心，取上清液，于分光光度计546nm处比色，测定OD值，与酚红标准曲线比较，折算成酚红含量，根据酚红含量和动物体重计算出校正酚红含量。

2.4 对豚鼠乙酰胆碱组胺引喘的影响(平喘作用):参照文献[9]，取60只豚鼠，先将豚鼠逐一放在密闭的玻璃钟罩内，待安静后，启动超生雾化器，以恒压喷雾2%氯化乙酰胆碱与0.1%组胺1:1混合液15sec引喘，喷雾停止后，立即观察6min内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期(从喷雾开始到哮喘发作，呼吸极度困难，直至抽搐跌倒的时间)，选择潜伏期小于150sec的豚鼠用于正式实验，并以此潜伏期作为给药前潜伏期;挑选合格动物，按体重、性别随机分为5组:空白对照组(0.9%生理盐水)，阳性对照组(氨茶碱，0.15g/kg)、神香草乙酸乙酯部位高剂量组(3.7g/kg)、神香草乙酸乙酯部位中剂量组(1.85g/kg)、神香草乙酸乙酯部位低剂量组(0.93g/kg);灌胃给药，1次/日，连续7d，灌胃体积均为0.2mL/10g，末次给药1h后，以同样条件引喘，观察引喘潜伏期，大于360s不跌倒者按360s计算，对各实验组豚鼠的引喘潜伏期进行比较。

2.5 统计学方法:采用 SPSS 17.0软件进行统计学处理，数据以(±s)形式表示，采用单因素方差分析，以P＜0.05为显著性差异;

3 结果

3.1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(抗炎作用):由表1可见，阳性对照组和3个不同剂量的神香草乙酸乙酯部位给药组对二甲苯所致的小鼠耳肿胀均有明显抑制作用(P＜0.05)，3个不同剂量的神香草乙酸乙酯部位给药组肿胀抑制率呈明显的剂量依赖关系，抑制作用随剂量的增加而增加(P ＜0.05)。

表1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(mg，±s)

表1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(mg，±s)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05;神香草乙酸乙酯部位各剂量组之间比较，△P ＜0.05。

组别 n 剂量(g/kg)耳肿胀 抑制率(%)10 － 6.69±0.28 －阳性对照组 10 5.0 3.07±0.41*54.11神香草乙酸乙酯部位 10 6.0 2.92±0.48＊△ 56.35神香草乙酸乙酯部位 10 3.0 3.50±0.25＊△ 47.68神香草乙酸乙酯部位 10 1.5 4.86±0.39＊△空白对照组27.35

3.2 对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响(止咳作用):由表2可见，阳性对照组和3个不同剂量的神香草乙酸乙酯部位给药组对浓氨水致小鼠咳嗽反应有明显的抑制作用，能延长小鼠咳嗽反应的潜伏(P＜0.05)，并减少咳嗽次数(P＜0.05)，3个不同剂量的神香草乙酸乙酯部位给药组止咳作用呈明显的剂量依赖关系(P＜0.05)。

表2 对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响(±s)

表2 对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响(±s)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05;神香草乙酸乙酯部位各剂量组之间比较，△ P ＜0.05。

组别 n 剂量(g/kg)咳嗽潜伏期(s)咳嗽次数(次/2min)10 － 30.2±2.45 57.1±2.28阳性对照组 10 5.0 61.5±6.75*22.8±0.81*神香草乙酸乙酯部位 10 6.0 60.3±8.34＊△22.9±1.57＊△神香草乙酸乙酯部位 10 3.0 37.4±6.38＊△25.7±1.45＊△神香草乙酸乙酯部位 10 1.5 32.7±4.46＊△31.2±0.92＊△空白对照组

2.3 对小鼠气管段酚红排泌量的影响(祛痰作用):由表3可见，阳性对照组和3个不同剂量的神香草乙酸乙酯部位给药组能明显提高小鼠呼吸道酚红排泌量(P＜0.05)，3个不同剂量的神香草乙酸乙酯部位给药组祛痰作用呈明显的剂量依赖关系(P ＜0.05)。

表3 对小鼠气管段酚红排泄量的影响(μg/ml，±s)

表3 对小鼠气管段酚红排泄量的影响(μg/ml，±s)

注:与空白对照组比较，*P＜0.05;神香草乙酸乙酯部位各剂量组之间比较，△ P ＜0.05。

酚红含量空白对照组 10 － 0.62±0.72*组别 n 剂量(g/kg)阳性对照组 10 5.0 1.33±0.32*神香草乙酸乙酯部位高剂量组 10 6.0 1.29±0.53＊△神香草乙酸乙酯部位中剂量组 10 3.0 1.18±0.46＊△神香草乙酸乙酯部位低剂量组 10 1.5 1.01±0.39＊△

3.4 对豚鼠乙酰胆碱组胺引喘的影响(平喘作用):由表4可见，阳性对照组和3个不同剂量的神香草乙酸乙酯部位给药组能明显延长豚鼠引喘潜伏期(P＜0.05);3个不同剂量的神香草乙酸乙酯部位给药组引喘潜伏期呈明显的剂量依赖关系(P ＜0.05)，结果见表4。

表4 对组胺引起哮喘反应的影响(sec，±s)

表4 对组胺引起哮喘反应的影响(sec，±s)

注:与空白对照组比较，*P ＜0.05;与给药前比较，△P ＜0.05;神香草乙酸乙酯部位各剂量组之间比较，▲P＜0.05。

组别 n 剂量(g/kg)引喘前伏期10 － － 87.6±5.89 86.8±10.24阳性对照组 10 0.15 84.1±5.73 118.9±15.09＊△神香草乙酸乙酯部位 10 3.7 85.6±6.15109.4±18.40＊△▲神香草乙酸乙酯部位 10 1.85 86.1±7.68101.5±25.69＊△▲神香草乙酸乙酯部位 10 0.93 86.8±6.1292.4±18.78给药前 给药后空白对照组＊△▲

4 讨论

神香草的维吾尔名祖帕奇尼(祖帕)，维吾尔医常用药材，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准，维吾尔药分册》。药用全草，含挥发油、黄酮、生物碱、多糖等化学成分。维医用于治疗气管炎的咳嗽、气喘、感冒发烧和风湿等病症。前期研究，发现神香草水、醇提物具有抗炎、止咳、平喘作用。因此，采用系统溶剂法对神香草醇提物进行萃取分离，制备其乙酸乙酯部位。对乙酸乙酯部位通过抗炎、止咳、祛痰、平喘实验考察有关作用，旨为神香草临床应用及治疗提供科学依据。实验结果表明，在以血管通透性增加为主的急性炎症模型中，神香草乙酸乙酯部位能显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀炎症反应(P＜0.05)，作用呈明显的剂量依赖关系(P＜0.05)，说明神香草乙酸乙酯部位具有抗炎作用。同样剂量的神香草乙酸乙酯部位能显著抑制浓氨水喷雾引起的小鼠咳嗽反应及延长咳嗽潜伏期(P＜0.05)，提示神香草乙酸乙酯部位可能作用于有关咳嗽刺激的化学感受器，抑制支气管黏膜对刺激的反应。神香草乙酸乙酯部位能显著促进小鼠气管段酚红分泌量(P＜0.05);能显著延长乙酰胆碱组胺引起的哮喘潜伏期(P＜0.05)，作用均呈明显的剂量依赖关系(P ＜0.05)，提示神香草乙酸乙酯部位具有明显的祛痰、平喘作用。

哮喘、慢性支气管炎主要表现在咳、痰、喘症状，对其采用镇咳、祛痰、解痉、平喘治疗。神香草乙酸乙酯部位的抗炎、止咳、祛痰、平喘作用不仅为维药神香草的临床应用提供了实验依据。对于所含成分及作用机理有待进一步研究。

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