HPLC法测定小儿增食片中柚皮苷的含量*

杨慈海，范常龙

(湖北省荆门市食品药品监督检验所，荆门448124)

HPLC法测定小儿增食片中柚皮苷的含量*

杨慈海，范常龙

(湖北省荆门市食品药品监督检验所，荆门448124)

目的:建立小儿增食片中柚皮苷含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法，Agela Venusil MP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，甲醇－6%醋酸(30∶70)为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为283 nm，柱温25℃。结果:柚皮苷在0.045 0～1.440 0 μg/ml围内呈良好的线性关系(r=0.999 9)，平均加样回收率为98.07%，RSD为0.76%(n= 6)。结论:该法简便、灵敏、准确可靠，可作为制剂的含量控制方法。

小儿增食片，HPLC，柚皮苷，含量测定

小儿增食片为卫生部药品标准(WS3－B－3760－98)收载的品种，处方由茯苓、三棱、陈皮、山楂、麦芽、六神曲、肉豆蔻、香附、枳壳、槟榔、大黄、甘草等12味中药材组成，具有消食导滞和增进食欲的功效，用于小儿厌食、偏食、面黄肌瘦、积食等症状。现行标准过于简单，处方12味药，仅有大黄的薄层鉴别，没有含量测定。笔者经过试验摸索，并参考《中国药典》［1］和相关资料［2］，采用HPLC法测定制剂中的柚皮苷的含量，结果平行性好，回收率高，可提高标准和控制制剂的内在质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器DIONEX Ultimate 3000高效液相色谱仪及Ultimate 3000 Diode Array Detector紫外检测器，Chromeleon色谱工作站，德国Sartorius BP211D电子天平(d=0.1 mg)，GZX－9140MBE数显鼓风干燥箱，DZKW电子恒温水浴锅。

1.2 试剂与药品柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110722－200006，含量100%)。小儿增食片(吉林白山正茂药业股份有限公司，批号20110303、20130501、20130502)，甲醇为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件色谱柱:Agela Venusil MP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);预柱C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－6%醋酸(30∶70);流速: 1.0 ml/min;检测波长:283 nm;柱温:25℃;进样量:10 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的柚皮苷对照品11.25 mg，分别置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品贮备液。精密量取上述柚皮苷对照品贮备液5 ml置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混匀，即得每1 ml柚皮苷约45.00 μg对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备精密称取本品装量差异下细粉1.0 g，精密称定，加甲醇50 ml，回流3 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性溶液的制备按处方制备工艺制得不含陈皮和枳壳的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 专属性试验分别精密吸取“2.2”项下3种溶液各10 μl，按上述色谱条件进样，记录色谱图，样品中柚皮苷及相邻峰的分离度均大于1.5，见图1。在对照品溶液色谱主峰处，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液则无此峰，说明样品中其他成分对柚皮苷的测定无干扰。

图1 对照品(A)供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图

2.4 线性范围的考查分别精密量取对照品溶液1、2、4、8、16和32 μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积积分值，以进样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归曲线方程:Y=7.35× 105X+4.22×104(r=0.999 9)，结果表明，柚皮苷在0.045 0～1.440 0 μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样6次，记录色谱图，测得柚皮苷峰面积RSD为0.85%(n=6)，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验精密吸取对照品溶液10 μl，分别在0、1、2、4和8 h时进样，记录色谱图，测得柚皮苷的峰面积RSD为0.49%，表明样品在8 h内稳定。

2.7 重复性试验取批号为20110303的供试品，按“2.2”项下方法处理，分别制备6份供试品溶液，按上述色谱条件平行操作测定，计算含量，结果6份供试品溶液中柚皮苷平均含量0.136 mg/g，RSD为0.92%，表明重复性良好。

2.8 加样回收率试验取已知含量的同一批样品(0.283 mg/g，批号20110303)约0.5 g，精密称取6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入“2.2”项下柚皮苷对照品溶液2.0、3.0和4.0 ml，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定含量，计算回收率，结果平均回收率为98.07%，RSD为0.76%，见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 样品的测定按“2.2”项下方法测定3个批号(20110303、20130501、20130502)的供试品，用外标法计算，含量分别为0.283、0.136和0.252 mg/g。

3 讨论

3.1 指标成分的选择小儿增食片是临床常用制剂，方中陈皮和枳壳都具有理气健脾，行滞消胀的作用，为主药之一。二者都含有柚皮苷［3］，含量高且性质稳定，常常作为质量控制指标，故选择制剂中柚皮苷进行含量测定，结果方法简单，效果较好。

3.2 流动相的考查实验考查了以乙腈－6%醋酸为流动相，结果柚皮苷保留时间短，分离效果不好;以甲醇－6%醋酸为流动相，将比例调整到(30∶70)后，供试品中柚皮苷峰和其他成分峰能完全分离，故选择甲醇－醋酸－水系统作流动相。

1中国药典［S］.一部.2010:176－177，229－230

2李玉琴，陈磊.高效液相色谱法同时测定通宣理肺丸中橙皮苷和柚皮苷的含量［J］.中国医院药学杂志，2011，31(23):1978－1980

3肖培根.新编中药志(二卷)［M］.北京:化学工业出版社，2002: 342－351，443－452

Determination of naringin in Xiao’er Zengshi Tablet by HPLC

Yang Cihai，Fan Changlong
(Jingmen Institute for Food and Drug Control，Jingmen，448124)

Objective:To establish an HPLC method for determining the content of naringin in Xiao’er Zengshi Tablet.Method: An Agela Venusil MP C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm)was used with methanol－6%acetic acid(30∶70)as the mobilephase.The flow rate was 1.0 ml/min，the detection wavelength was 283 nm，and the column temperature was 25℃.Results: There was a good linear relationship within the range of 0.045 0～1.440 0 μg/ml(r=0.999 9).The recovery was 98.07%(n= 6)with RSD=0.76%.Conclusion:The method is simple，fast and reliable，and can be used for the quantitative control of naringin in the preparation.

Xiao’er Zengshi Tablet，HPLC，naringin，quantitative control

R927.2

A

1006-5687(2014)01-0020-03

2013-10-30