紫外-可见分光光度法测定振源口服液（无糖型）中人参总皂苷的含量

庞 威赵宏峰弥 宏越 皓曲芯瑶郭禹彤

（1 长春中医药大学，吉林 长春 130117；2 吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012）

紫外-可见分光光度法测定振源口服液（无糖型）中人参总皂苷的含量

庞 威1赵宏峰2弥 宏2越 皓1曲芯瑶2郭禹彤1

（1 长春中医药大学，吉林 长春 130117；2 吉林省中医药科学院，吉林 长春 130012）

目的采用紫外-可见分光光度法测定振源口服液（无糖型）中人参总皂苷的含量。方法以人参皂苷Re为对照，用1%香草醛-高氯酸试液及77%硫酸显色，在540 nm波长下通过紫外分光光度法对人参总皂苷进行含量测定。结果人参皂苷Re浓度在6.65～66.55 μg/mL范围内线性关系良好，回归方程A=-0.0751+0.0195X（相关系数r=0.9995），平均回收率为96.92%（RSD=1.79%）。结论该方法简便可靠，稳定性好，可用于本品的含量测定和质量控制。

紫外-可见分光光度法；振源口服液（无糖型）；人参皂苷Re；人参总皂苷；含量测定

“振源口服液(无糖型)”具有益气养阴的功效，适用于气阴两虚的久病虚弱患者，属于现代医学冠心病心绞痛的范畴。而目前我国心脑血管疾病发病率较高，每年呈上升趋势，因此该药有着积极的治疗意义。“振源口服液(无糖型)”是以人参果总皂苷为原料的中药单方口服制剂，对原“振源口服液”进行了辅料上的优化，扩大了用药人群（糖尿病等胰岛素功能不全的患者），同时建立了新的质量标准，通过紫外可见分光光度法测定了人参总皂苷的含量，并对其含量限度进行规定，现将研究结果报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器：752型紫外光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂）；梅特勒AB265-S型天平（瑞士梅特勒公司）；XMTD-4000型水浴锅（北京市永光明医疗仪器有限公司）；具塞试管；移液枪；废液缸；试管架。

1.2 试药：人参皂苷Re对照品（供含量测定用，批号110754-200218，中国药品生物制品检定所提供）；甲醇（色谱纯，美国Fisher公司）；香草醛（中国惠世生化试剂有限公司）；高氯酸（北京化工厂，分析纯）；硫酸（北京化工厂，分析纯）。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备：取人参皂苷Re对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含人参皂苷Re 1.83 mg的溶液，摇匀，即得。

2.2 测定波长的确定：精密吸取人参皂苷Re对照品溶液（1.83 mg/mL）100 μL，置于具塞试管中，低温挥去溶剂，加入1%香草醛高氯酸试液0.5 mL，置60 ℃恒温水浴上充分混匀后加热15 min，立即用冰水冷却2 min，加入77%硫酸溶液5 mL，摇匀；以试剂作空白，消除气泡后照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在440～600 nm处进行光谱处扫描，结果对照品溶液在538 nm处有最大吸收，同法制成的供试品溶液在530 nm处有最大吸收(见图1-a,b)，故最终选择540 nm为测定波长。

2.3 线性关系的考察：精密吸取人参皂苷Re对照品溶液20 µL、40 µL、 80 µL、120 µL、160 µL、200 µL，分别置于具塞试管中，低温挥去溶剂，加入1%香草醛高氯酸试液0.5 mL，置60 ℃恒温水浴上充分混匀后加热15 min，立即用冰水冷却2 min，加入77%硫酸溶液5 mL，摇匀；以试剂作空白，消除气泡后照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在540 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程A=-0.0751+0.0195X，相关系数r=0.9995。结果表明，人参皂苷Re浓度在6.65～66.55 μg/mL范围内，吸光度与人参皂苷Re浓度呈良好的线性关系。

2.4 专属性试验：取按处方比例除去“人参果皂苷粉”并采用相同工艺制成的阴性样品，精密吸取100 μL，按线性关系考察项下方法处理显色，以试剂作空白，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在540 nm的波长处测定吸光度，结果显示，除去“人参果皂苷粉”的阴性样品在540 nm波长处的吸光度为样品吸光度的0.5%，＜5%，故认为本品空白辅料无干扰。

2.5 精密度试验

2.5.1 重复性试验：精密吸取振源口服液(无糖型)样品100 μL，共6份，分别测定，计算总皂苷的含量，结果平均含量为1.97 mg/mL，RSD=1.44%，表明重复性良好。

2.5.2 显色重现性试验：精密吸取振源口服液(无糖型)样品100 μL，依法处理显色，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版一部附录V A），在540 nm的波长处测定吸光度，重复测定6次，结果平均吸光度为0.612，RSD=0.13%，表明该方法精密度良好。

2.6 稳定性试验：精密吸取无糖型振源口服液样品100 μL，依法处理显色，分别于放置0，10，20，30，40，50 min时，在540 nm的波长处测定吸光度。结果平均吸光度为0.605，RSD=0.13%，表明本方法50 min内能保持良好的稳定性。

2.7 回收率试验：取重复性试验同批次样品（总皂苷含量为1.97 mg/mL），精密量取50 μL，共计6份，再分别精密加入人参皂苷Re对照品溶液（人参皂苷Re浓度为2.01 mg/mL，）50 μL，按[含量测定]项下方法操作，测定其中“人参果总皂苷”的含量，计算回收率，结果平均回收率为96.92%，RSD=1.79%，测定结果见表1。

表1 人参皂苷Re加样回收率测定结果

2.8 样品含量测定及含量限度的确定：精密吸取本品100 μL，照标准曲线的制备项下的方法，自“置于具塞试管中”起依法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的量。共测定了10批振源口服液(无糖型)中人参果总皂苷的含量，结果见表2。

表2 样品的测定结果

根据上述测定结果，10批样品中人参总皂苷的平均含量为1.70 mg/mL，且均高于1.30 mg/mL。为有效保证制剂质量，同时考虑原料药产地、加工及生产等因素的影响，限定本品每1 mL含人参总皂苷以人参皂苷Re(C48H82O18)计，不得少于1.30 mg。

3 讨 论

“振源口服液(无糖型)”将原处方中的辅料蜂蜜改成了可以为广大糖尿病等胰岛素功能障碍人群服用的木糖醇，扩大了产品的应用范围；原料药人参果总皂苷是在人参果中提取的，避免了人参果实的浪费，提高了人参的利用率，具有一定的经济意义和药学研究意义。

本文选择人参皂苷Re为对照品是因为它是人参果总皂苷的主要成分[1]，具有良好的稳定性，通过现代药理学研究具备多种药理活性，可作为含量测定的指标成分[2,3]。

1%香草醛-高氯酸需现用现配，注意避光操作，应严格控制在香草醛-高氯酸加热温度及显色反应时间，显色后迅速放入冰水冷却，以保证实验的灵敏度。

本测定方法简便快捷，稳定性及重现性好，适用于振源口服液（无糖型）中人参总皂苷的含量测定及质量控制。

[1] 赵澍.人参果成分的研究[J].中医杂志,1979,20(12):50-53.

[2] 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定[M].北京:人民卫生出版社,1997.

[3] 苗明三.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社, 2000.

Determination of Total Ginsenosides in Free-sugar Zhenyuan Oral Liquid by Ultraviolet-visible Spectrophotometry

PANG Wei1, ZHAO Hong-feng2, MI Hong2, YUE Hao1, QU Xin-yao2, GUO Yu-tong1
(1 Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China; 2 Jilin Academy of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130012, China)

ObjevtiveTo determine the content of total Ginsenosides in free-sugar Zhenyuan oral liquid by ultraviolet-visible spectrophotometry.MethodGinsenoside Re was selected as control article, coloration was used with 1% vanillin-perchloric acid and 77% sulfuric acid, the content of total Ginsenosides in freesugar Zhenyuan oral liquid was determined at 540 nm by UV.ResultThe calibration curve was linear over the range of 6.65-66.55 μg/mL with the correlation of 0.9995, and the linear regression equation was A=-0.0751+0.0195X, the average recovery of Ginsenoside Re was 96.92% with RSD of 1.79% (n=6).ConclusionThe method was simple, reliable and stable, so it is suitable for content determination and quality control of total Ginsenosides in free-sugar Zhenyuan oral liquid.

Ultraviolet-visible spectrophotometry; Free-sugar Zhenyuan oral liquid; Ginsenoside Re; Total Ginsenosides; Content assay

R282.710.3

B

1671-8194（2014）29-0059-02

吉林省科技厅技术成果转化重大项目（20115090）