祛风止痉散治疗支气管哮喘的细胞免疫机制及相关因素分析

罗建江，王 欣，王 玲

(新疆医科大学附属中医医院，新疆乌鲁木齐830000)

哮喘具有发病急、引起患者呼吸困难、治疗不及时可能危及生命等特点[1]，目前对于哮喘的西医治疗主要采用鼻喷糖皮质激素，如布地奈德鼻喷剂等，可以达到治标而不能治本的效果，并且患者的长期医疗费用负担相对较重[2]。祖国医学认为哮喘以肺脾肾亏虚为本，以风寒湿痰瘀为标，而中医药治疗哮喘日益显示出其巨大的优势。李风森等[3]研究显示，使用祛风止痉散联合激素治疗哮喘具有较好的临床效果，但其作用机制并不明确。本研究探讨了祛风止痉散治疗中度支气管哮喘患者的治疗效果、肺功能相关指标及 CD3+、CD4+、CD8+表达情况及相关性，对中医治疗哮喘的免疫学机制进行初步探讨，现将研究结果报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选择2013年1—8月在新疆医科大学附属中医医院门诊及住院中度支气管哮喘患者112例，均符合我国第四届哮喘学术会议通过的《支气管哮喘防治指南》中明确规定的诊断标准[4]。排除有其他严重并发症者;对治疗药物过敏者;近期有重大精神创伤及重症哮喘者;中途退出研究及需要剔除者;危重支气管哮喘者。在患者及其家属知情同意的前提下，按照随机数字表将患者分为 2组:治疗组50例，男31例，女19例;年龄16～54(35.7±8.6)岁;首发39例，再发11例。对照组62例，男40例，女22例;年龄14～62(34.19±8.23)岁;首发49例，再发13例。 2组患者年龄、性别、民族、婚姻状况、文化程度、收入等指标比较均无显著性差异(P均＞0.05)，具有可比性。

1.2 治疗方法

1.2.1 对照组 规范化使用激素治疗，布地奈德粉吸入剂1喷/次，1次/d，急性发作时可1～2喷;按需使用支气管舒张剂茶碱缓释片，1～2片/次，2次/d;不使用其他中药及中成药治疗。

1.2.2 治疗组 在对照组治疗基础上加服自制祛风止痉散(主要由蝉蜕、僵蚕、防风等组成，煎服，1剂/(次·d))，3个月为1个疗程，服用1个疗程。

1.3 检测指标及方法

1.3.1 外周血淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+含量检测 应用美国beckman coulter公司流式细胞仪，以淋巴细胞群设门，以相应的同型对照igg染色的细胞为阴性对照，每份样品检测1×105个细胞，使用cell quest软件进行结果分析。在哮喘稳定期，静脉采血5 mL，乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝，取 100 μL 全血于 A、B、C、D 4 管，A 管加入FITC－CD3和 PE－CD4各10 μL，B管分别加入 FITCCD3和PE－CD8各10 μL，C管及D管分别加入同型对照各20 μL双色标记单抗试剂，使用VORTX混匀，避光15 min，加红细胞(RBC)溶解液1 mL，避光10 min，1000 g离心5 min，弃上清。磷酸盐缓冲液(PBS，购自美国HYCLONE公司)，洗1次后，用0.5 mL PBS将细胞制成细胞悬液，100目筛网过滤，上机检测。

1.3.2 肺功能指标检测 使用日本福田公司的肺功能检测仪，由专门的医生对患者治疗12个月后的肺功能指标包括呼气峰流速(PEF)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1占用力肺活量(FVC)百分比(FEV1/FVC)进行检测，评价 2组治疗效果。

1.4 疗效评价标准 由我院呼吸科3位副主任职称以上医师，按照中华医学会呼吸病学分会哮喘学组制定的哮喘治疗效果评价标准[5]对所有患者进行疗效判定。显效:患者咳嗽、反复喘息、胸闷、呼吸困难等症状消失;有效:患者咳嗽、反复喘息、胸闷、呼吸困难等症状减轻;无效:患者咳嗽、反复喘息、胸闷、呼吸困难等症状无改善或加重。显效和有效计为总有效。

1.5 统计学处理 使用SPSS 20.0软件包进行统计分析，计数资料以率表示，差异比较使用卡方检验;计量资料以±s表示，2组之间差异比较使用t检验;相关性分析使用pearson相关分析。检验水准α=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组1 a内哮喘治疗效果比较 治疗组总有效率明显高于对照组(P＜0.05)，见表1。

表1 2组1a内哮喘治疗效果比较 例(%)

2.2 2组1 a内肺功能相关指标比较 治疗后治疗组FVC、FEV1、FEV1/FVC 均高于对照组(P均 ＜0.05)，见表2。

表2 2组1a内肺功能相关指标比较±s)

表2 2组1a内肺功能相关指标比较±s)

组别 n FVC/L FEV1/L FEV1/FVC PEF/(L/s)治疗组 503.45 ±0.812.06 ±0.810.596 ±0.0815.01 ±1.11对照组 623.07 ±1.061.76 ±0.810.553 ±0.0894.03 ±0.93 t 6.0983.9982.6642.567 P 0.0040.0210.0090.058

2.3 2组外周血淋巴细胞亚群含量比较 治疗后治疗组CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+均高于对照组(P均 ＜0.05)，对照组CD8+高于治疗组(P＜0.05)。见表3。

表3 2组外周血淋巴细胞亚群含量比较±s，%)

表3 2组外周血淋巴细胞亚群含量比较±s，%)

组别 n CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+对照组 6251.23 ±16.8637.13 ±11.7746.43 ±14.190.94±0.56治疗组 5069.57 ±4.5263.81 ±9.4938.02±4.671.70 ±0.33 t 7.47412.9864.0138.599 P 0.0100.0010.0210.004

2.4 外周血淋巴细胞亚群比例与治疗效果及肺功能之间的相关分析 治疗效果(显效=3，有效=2，无效=1)与CD3+、CD4+以及 CD4+/CD8+呈正相关(P＜0.05)，而与 CD8+呈负相关(P＜0.05)。FVC 与 CD3+、CD4+以及 CD4+/CD8+呈正相关(P＜0.05);FEV1与 CD3+、CD4+呈正相关(P＜0.05);PEF与 CD3+、CD4+以及 CD4+/CD8+呈正相关(P＜0.05)。见表4。

3 讨论

随着环境污染的增加，哮喘的发病率逐年增高，对于哮喘的治疗目前西医上以治标为准，长期使用糖皮质激素治疗哮喘可导致患者对糖皮质激素的依赖性。研究证实，中西医结合治疗哮喘可以起到较好的治疗效果，但对于其产生治疗效果的机制不明确[6－8]。既往研究发现，CD3+、CD4+、CD8+在哮喘的发生及发展中起着重要的作用[9－11]。

表4 治疗效果及肺功能相关指标与外周血淋巴细胞亚群比例相关分析

中医认为支气管哮喘的发病原因是宿痰内伏，当患者因为压力过大，外感六淫、过度疲倦劳累等时，就会容易发生支气管哮喘。中医中的主要症状为痰阻气道、肺气不降等，从而导致肺气虚弱。并认为风邪为哮喘发病的最主要原因，因此支气管哮喘的中医治疗以祛风为主[3]。本研究所用祛风止痉散方剂中含僵蚕、蝉衣等疏散风热、息风止痉功效的中草药成分，辅药为地龙，可以散风邪、祛痰滞，达到气通畅、喘自平，恢复肺的宣发肃降功能，从而改善哮喘的临床症状及预后。本研究结果显示，祛风止痉散联合激素治疗支气管哮喘的显效率明显高于对照组，而且FVC、FEV1、FEV1/FVC等肺功能指标改善情况均优于单纯西医治疗，提示祛风止痉散联合激素治疗支气管哮喘可以很好地缓解患者的症状及肺功能。

在哮喘患者中，CD3+细胞的过低表达意味着免疫耐受能力下降，从而变态反应的可能性就升高。本研究结果显示，使用中医祛风止痉散可以提高哮喘患者稳定期CD3+细胞的含量，其可能的机制:祛风止痉散方中含地龙，地龙可以抑制部分免疫因子的分泌，从而达到抑制哮喘的作用[12]。王宏娟[13]报道，不同中医分型的患者CD3+细胞的含量不同，肺肾气虚型患者的CD3+细胞的比例低于肺气两虚型以及肺脾气虚型，从而证实CD3+在中医辨证治疗中具有重要作用。

本研究还显示，治疗组的CD4+细胞表达高于对照组，CD8+细胞表达低于对照组。薛克营等[14]通过转移免疫耐受的CD4+CD25+调节性T细胞起到了降低变态反应严重程度的作用，提示免疫耐受的CD4+T细胞可以起到控制哮喘严重程度的作用。韩淑华等[15]报道，哮喘患者CD8+T细胞对中性粒细胞递呈抗原产生免疫球蛋白有调节作用，而且参与哮喘发病，其高表达可能与抗原快递呈递有关。CD8+细胞的低表达可能与祛风止痉散的治疗效果有关。

以上结果证实祛风止痉散治疗哮喘可能是通过提高外周血中CD3+、CD4+的含量，以及降低CD8+细胞的含量而达到治疗效果的。

治疗效果及肺功能相关指标与CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+的相关分析显示，治疗效果与 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量呈正比，提示稳定期内外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量相对于治疗效果差的哮喘患者而言较高，从而也提示CD3+、CD4+在哮喘发生及治疗中具有重要作用。本研究结果还显示，CD8+细胞含量与治疗效果呈反比，同样提示CD8+细胞在哮喘治疗中具有重要意义。结合本次研究结果，有望将哮喘稳定期内外周血中的CD3+、CD4+、CD8+细胞的检测结果作为哮喘治疗及控制效果的检测指标。本次研究还显示，FVC与CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+指标呈正相关(P＜0.05);FEV1与 CD3+、CD4+呈正相关(P＜0.05);PEF 与CD3+、CD4+以及 CD4+/CD8+呈正相关(P＜0.05)。提示，CD3+、CD4+阳性淋巴细胞在中度哮喘患者肺功能恢复中具有重要作用。杨琳红等[16]的研究证实，外周血CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+含量降低与肺功能的降低有明显的相关性。

本研究显示，祛风止痉散治疗哮喘可能是通过提高外周血中CD3+、CD4+的含量，以及降低CD8+的含量而起到治疗作用以及改善肺功能的效果。有望将哮喘稳定期内外周血中的CD3+、CD4+、CD8+的检测结果作为哮喘治疗及控制效果的检测指标。

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