HPLC和UV法测定尼群地平片含量的比较

范丽　王依健　苏国

【摘要】目的本文研究并比较了高效液相色谱法和紫外分光光度法测定尼群地平片含量的方法。方法高效液相色谱法，C18（4.6×150nm 5um）色谱柱，甲醇-水（65：35）为流动相。流速：1.0ml/min，检测波长为237nm，进样量为20ul；紫外分光光度计，测定波长为237nm。结果高效液相色谱法：尼群地平片在0.02000-0.1000mg/ml浓度范围内有良好的線性关系r=0.9999，平均回收率为100.1%（RSD=0.13%）；紫外分光光度法：尼群地平片在2.00-10.00ug/ml范围内与吸收度呈线性关系（r=0.9993），平均回收率为102.5%（RSD=1.71%）。结论高效液相色谱是一种简便、快速、精确、准确的分析方法，有一定的实用意义。

【关键词】高效液相色谱法；紫外分光光度法；尼群地平片；含量测定

文章编号：1004-7484（2014）-04-1801-04

1资料与方法

1.1选题背景与国内外研究现状尼群地平是新型钙拮抗剂，国外已进行了广泛的研究，并做了初步的临床试验。由西德Bayer AG药厂研究开发。1981年10月在美国纽约召开的国际性专题研讨会上，美国、英国、西德、瑞典、瑞士、加拿大等15个国家105位专家经过讨论，确认本品是一个有希望的、毒副作用较小的口服抗高血压新药。大量的药理与临床资料表明本品降压作用温和安全，疗效稳定持久，副作用也较少。1985年首次在西德上市，商品名Bayotensin；当年销售500万美元。在美国市场由Miles公司开发上市，1986年销售1000万美元。国内石家庄新华制药厂与江苏南京制药厂已先后报批生产[1]。

尼群地平（nitrendipine）化学名为2，6-二甲基-4（3-硝基苯基）-1，4-二氢吡啶-3，5-二羧酸甲乙酯，是一种高效，低毒和药效持久的抗心血管病和抗高血压[2]，国内外药典尚未收载，有关尼群地平的药理和临床试验国内外实验有许多研究，血清和血浆中痕量该药的放射受体分析，HPLC和GC-MS分析已有报道。[3-4]

目前，尼群地平片的含量的测定方法有：铈量法，氰离子选择电极法，单扫描波极谱法，紫外分光光度法，高效液相色谱法，GC-MS，容量法[5]等。其片剂的含量测定一般采用紫外分光光度法[6]，该法线性范围不够宽，专属性差，且溶液的吸收度随时间的放置时间有变化[7]，另外，氰离子选择电极法单扫描波极谱法和铈量法，这些方法存在精密度和专属性差，线性关系难以确定等缺点[8]。国内应用高效液相色谱法测定尼群地平体内药物浓度曾有报道。但对尼群地平片进行含量测定的方法研究还未成熟，为此我们建立了HPLC发和UV分析法，对尼群地平片的含量进行比较的方法，进而得出测定尼群地平片含量的最佳方法。

1.2尼群地平的化学结构见表1。

表1尼群地平的简介

通用名1尼群地平化学名12，6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-1，

4-二氢-3，5-吡啶二甲酸甲乙酯拼音名1NIQUNDIPING英文名1NITRENDIPINECAS No139562-70-4结构式1分子式1C18H20N2O6分子量1360.37规格110mg1.3尼群地平片的主要成分及药理作用

1.3.1尼群地平片的主要成分尼群地平片主要成分：尼群地平

1.3.2尼群地平片的药理作用①本品为二氢吡啶类钙通道阻滞剂。②本品抑制血管平滑肌和心肌的跨膜钙离子内流，但以血管作用为主，故其血管选择性较强。③本品引起冠状动脉、肾小动脉等全身血管的扩张，产生降压作用。

1.3.3尼群地平片的毒性致癌、致突变和生殖毒性：大鼠口服同类药物硝苯地平两年未见有致癌作用。体内致突变研究结果阴性。给大鼠30倍于人类最大药量可以致畸；交配后的大鼠给予30倍于人类最大药量，可引起生殖率下降；给大鼠3-10倍于人类最大药量，可引起大鼠、小鼠和兔子流产（胎儿的药物吸收率增加、胎儿死亡率增加、新生儿存活率下降）；孕猴服用2倍于人类最大药量，可导致小胎盘和绒毛发育不全。现有的文献表明，增加剂量能够导致过度的外周血管扩张，继发或延长体循环低血压状态。由药物过量导致临床上出现显著的低血压反应的患者，应及时在心肺监测的同时，给予积极的心血管支持治疗。肝功能不全的患者药物清除率下降。

1.3.4尼群地平片的代谢尼群地平片口服吸收良好，但存在明显的首过效应。蛋白结合率98%。早期研究报道T1/2为2小时，近期研究由于使用了更敏感的测定设备，报道T1/2在10-22小时。本品口服后约1.5小时血药浓度达峰值。口服后30分钟收缩压开始下降，60分钟后舒张压开始下降，降压作用在1-2小时最大，持续6-8小时。本品在肝内广泛代谢，其代谢产物70%经肾排泄，8%随粪便排出。肝病患者血药浓度和消除半衰期增加。

1.3.5尼群地平片与其他药物的相互作用①β-受体阻滞剂：绝大多数患者合用此药可加强降压作用，并可减轻本品降压后发生的心动过速；然而，个别患者有可能诱发和加重体循环低血压、心力衰竭和心绞痛。②血管紧张素转换酶抑制剂：合用耐受性较好，降压作用加强。③长效硝酸盐类：合用有较好的耐受性，但尚缺乏评价这种合用控制心绞痛的有效性文献。④洋地黄：部分研究提示服用此药，能够增加合用的地高辛血浆浓度，平均增加45%。部分研究认为不增加地高辛血浆浓度和毒性。提示我们在初次使用、调整剂量或停用尼群地平时应监测地高辛的血药浓度，以防地高辛过量或不足。⑤双香豆类抗凝药：尚无报告表明合用尼群地平能够增加香豆类抗凝药物的凝血酶元时间。目前，还不能肯定他们之间的相互作用。⑥西咪替丁：由于西咪替丁可介导抑制肝脏细胞色素P450酶，使尼群地平的首过效应发生改变，建议对正在服用西咪替丁治疗的患者合用尼群地平时，注意药物剂量的调整。

钙通道阻滞剂药物，钙通道阻滞剂是在通道水平上选择性阻滞钙离子经细胞膜上的钙离子通道进入细胞内，减少细胞内钙离子浓度的药物。

1.4尼群地平的片作用机制

1.4.1钙离子通道阻滞剂的作用机制钙通道阻滞剂药物，钙通道阻滞剂是在通道水平上选择性阻滞钙离子经细胞膜上的钙离子通道进入细胞内，减少细胞内钙离子浓度的药物[17]。尼群地平片是一种二氢吡啶类钙拮抗剂，可增加脑供血，是脑血管病治疗药物。对防治冠心病、高血压及慢性充血性心律衰竭等具有显著疗效。从化学结构上尼群地平属于二氢吡啶类钙通道阻滞剂药物，钙通道阻滞剂是在通道水平上选择性阻滞钙离子经细胞膜上的钙离子通道进入细胞内，减少细胞内钙离子浓度的药物。

尼群地平片与其它钙拮抗剂比较，它能促使心肌细胞内质网摄取并潴留钙离子。尼群地平片对血压和心率的影响开始较慢，而作用持续时间较长。

1.4.2尼群地平片的药理和生理作用机制尼群地平片抑制血管平滑肌的跨膜钙离子内流，也抑制心肌的跨膜钙离子内流，但以血管作用为主，故其血管选择性较强。本品引起周身血管，包括冠状动脉、肾小动脉扩张，产生降压作用。

药理和临床试验证明尼群地平片能干扰体内钙离子的生理功能，包括心肌和平滑肌的兴奋收缩偶联作用，这是它扩张血管作用的基础。药理实验还证明尼群地平片作为抗高血压药有许多优点，对心肌、血管有强的选择性，而对血管的亲和力又比心肌浆网大10倍。它对不同部位的血管有不同的选择性，对静脉的扩张作用较弱，对肠系膜、皮肤和脑的血流影响很小。因而其毒副作用轻微，一般出现的与血管扩张有关的头痛、面红等，不需停药。未发现耐受性，而且对正常血压影响较小，比治疗量大10倍时才影响正常血压。

尼群地平片能干扰体内钙离子的生理作用，使心肌和平滑肌兴奋收缩，导致外周血管阻力下降而降低血压。还能显著地扩张冠脉，并降低心肌耗氧量，对缺血心肌有保护作用。适用于轻、中度原发性高血压的治疗，并以降低舒张压为主，对冠心病的高血压患者更为适宜。由于本品还具有较强的利钠作用，降低时较少引起钠水潴留，所以长期服药患者无需合并使用利尿剂

研究结果表明尼群地平片是一个很有希望、具有冠状扩张作用的抗高血压药物。尤其适用于原发性高血压。因原发性高血压一般起因都是由于周围血管阻力增大，目前还没有理想的药物，而尼群地平有较强的血管扩张作用，且对周围血管选择性最强，故可能成为治疗原发性高血压的理想药物。

1.5尼群地平片含量的测定方法

1.5.1铈量法中国药典（2005版）[9]铈量法测定尼群地平含量取本品30片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于尼群地平0.13g），照尼群地平项下的方法，自“加冰醋酸20ml”起，依法测定，即得。

1.5.2氰离子选择电极法尼群地平结构中含有二氢吡啶环，易氧化成吡啶环，即可设想氧化法测定。Christova等[10]研究了用碘离子选择电极法测定一系列还原剂，在加热条件下尼群地平与碘可发生定量氧化还原法应，生成的碘离子可用氰离子选择电极法测定。朱世民等[7]用氰离子选择电极法测定了尼群地平片的含量。

1.5.3单扫描波极谱法尼群地平为一芳香族硝基化合物，通常硝基化合物可以在滴汞电极上还原，电极反应为。在一定的浓度范围内，峰高与浓度呈线性关系，半波电位随溶液中乙醇浓度中乙醇浓度的改变而改变。朱世民等[7]利用单扫描波极谱法测定尼群平片的含量。

1.5.4紫外分光光度法尼群地平含有硝基、苯基，在光谱的紫外区域应有吸收峰。在紫外分光光度计上扫描，结果在237nm和356nm波长处有吸收值，但在237nm波长处的吸收值大于356处的吸收值，且在360nm左右吸收值不稳定。故以237nm波长作为测定波长[11]，以10%乙醇作为溶剂。

1.5.5高效液相色谱法尼群地平化学结构中含有二氢吡啶环，易氧化成无活性的吡啶环。高效液相色谱法可以克服紫外分光光度法的不足，能将样品峰与杂质峰分开，样品峰经峰纯度检出，说明高效液相色谱法专属性良好，方法操作简便，精密度好，测得值准确可靠，尤其用于尼群地平新药研究中稳定性的含量测定[13-15]。

高效液相色谱法（HPLC）是现代分离分析的重要手段，它具有分离效果好，分辨率高，灵敏度高，分析速度快，重现性好，适用面广，操作方便等优点。2实验部分

2.1儀器与试剂

2.1.1仪器Agilent1200高效液相色谱仪Eclipse XDB色谱工作站 C18（4.6×150nm，5um）色谱柱 Agilent1200紫外检测仪 TU-1800型紫外分光光度法

2.1.2试剂尼群地平对照品（批号100585-200602中国药品生物制品检定所）尼群地平片（市售品，山东莒县制药厂，规格为10mg）甲醇为色谱醇10%乙醇乙醇为色谱纯 水为蒸馏水

2.2HPLC法

2.2.1色谱条件与系统实用性试验C18色谱柱 流动相：甲醇：水（65：35）；流速1.0ml/min；检测波长：237nm；进样量20ul；柱温：30℃。在该色谱条件下，尼群地平的保留时间为7.14min；理论塔板数为2318。

2.2.2样品溶液的制备取本品20片，精密称定为1.5465g，研细，精密称取细粉0.3865g，（约相当于尼群地平50mg），置100ml量瓶中，加甲醇使尼群地平溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。2.2.3标准溶液的制备精密称取尼群地平对照品0.05010g，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液①。

2.2.4标准曲线的绘制在储备液①中精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度。按“2.2.1”项下色谱条件进样，测定峰面积积分值，以尼群地平浓度对峰面积进行回归，得回归方程（n=5）A=-10.7C+7.9×107，尼群地平在范围内呈良好线性关系r=0.99991，色谱图见图1。