ND油乳剂灭活苗免疫抗体消长水平对比试验

贺泂杰 贺奋义 郭慧琳

摘 要：采用鸽新城疫ND-GS株毒为种毒。分别研制出了尿囊液病毒油乳剂灭活苗和鸡胚尿囊液、羊水、尿囊膜混合病毒油乳剂灭活苗。对研制的两种灭活疫苗经安全性检验、急性毒性试验， 免疫抗体消长水平对比试验。结果表明，两种疫苗性能基本一致。

关键词：ND；油乳剂灭活疫苗；免疫抗体；消长水平

中图分类号：S852 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2014）05-0054-02

鸽新城疫（New Castle Disease）是由鸽禽Ⅰ型副粘病毒引起的一种急性、热性、高度性传染病。鸽群常突然发病，迅速蔓延，其临床症状与鸡新城疫相似，主要临床特点是肠炎，下痢和神经症状，尤以嗜神经速发型为多见，发病率和死亡率都很高。对于信鸽和观赏鸽，一旦感染鸽新城疫后，其神经症状将使信鸽失去飞翔能力，赛鸽失去比赛的资格，观赏鸽失去观赏价值。对养鸽业造成巨大的损失和威胁，成为危害养鸽业的一种最主要的疾病。为了更好地预防本病的发生，我们对防制本病的灭活苗进行了比较系统的研究。通过 ND鸡胚尿囊液、羊水、尿囊膜的含毒量测定，对研制的两种油乳剂灭活苗，进行了免疫抗体消长水平对比试验。

1 材料和方法

1.1 病毒

用从甘肃发病鸽场分离，经哈尔滨兽医研究所鉴定纯化的GS病毒作为种毒。

1.2 供试疫苗

ND油乳剂灭活疫苗由本课题组研制。ND（V）含量基本一致。免疫剂量为0.5 mL/羽。

1.3 供试鸽.

兰州种鸽场购买的健康非免疫鸽，经HI血清抗体检测，均为阴性。

1.4 试验方法

将种毒以1：100倍稀释，离心，取上清液，加双抗100 mg/mL，置4 ℃过夜，第二天经尿囊腔接种于9～10日龄鸡胚，每胚0.1 mL，置37℃继续孵育。每日照蛋两次，弃去48 h内死亡胚。分别收获48～96 h死亡鸡胚的尿囊液、羊水、尿囊膜。当血凝价达7log2～8log2以上时，即为鸽新城疫制苗用生产种毒。

1.5 病毒灭活

将收获的鸡胚尿囊膜反复冻融后研磨，按1：5的比例加入灭菌的生理盐水，洗涤3次，离心3次取上清液加入双抗过液。将收获的尿囊液，羊水分别离心，加双抗过液。将上述病毒液混合后，加入终未浓度为0.1 %的甲醛37 ℃灭活24 h，为制苗的抗原基础液Ⅰ备用。

将收获的尿囊液离心，加双抗过液后，加入0.1 %的甲醛，37 ℃灭活24 h，为制苗抗原基础液Ⅱ备用。

1.6 安全性检查

将灭活病毒原液接种非免疫9日龄鸡胚，每羽0.2 mL，观察10 d以上，鸡胚全部存活，为灭活病毒液通过安全性检查。

1.7 乳化苗的配制

将抗原基础液Ⅰ、Ⅱ分别调整至配苗所需抗原量，在抗原液中加入4 %的灭菌Tween-80，摇匀，成为Ⅰ、Ⅱ号制苗水相，待用。将轻质药用白油，司本80和硬脂酸铝按照94 mL；6 mL：1.75 g的比例配制油相（混合物），高压灭菌15 min备用。油相在8 000～10 000 r/min搅拌的同时，按1：1的比例分别缓慢加入Ⅰ、Ⅱ号水相，乳化3min，在终止搅拌前加入浓度为0.01 %的硫柳汞溶液，即成为乳白色的Ⅰ、Ⅱ号油乳剂灭活苗。

1.8 疫苗的检验

1.8.1 无菌检验

取样分别接种于普通肉汤，厌氧肉肝汤及营养琼脂培养基各两管，37 ℃培养96 h，检查细菌生长情况。

1.8.2 安全性检查

选用35日龄非免疫鸽60羽，分成2组，每组30羽，分别注射1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL。观察注射部位有无炎性反应，疫苗吸收情况和临床反应，观察期2周。

1.8.3 急性毒性试验

将每种疫苗以1个使用剂量皮下注射1日龄乳鸽10羽。另设空白对照乳鸽组，同条件下隔离饲养，观察疫苗对乳鸽生长的影响。

1.9 免疫抗体消长水平对比试验

选用30羽非免疫健康鸽，随机分成3组，第1组注射Ⅰ号（尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒）苗，第2组注射Ⅱ号（尿囊液毒）苗，另设一组对照，注射剂量分别为0.5 mL/羽。免疫后每隔一段时间检测一次鸽血清中的ND抗体效价，进行同剂量下免疫抗体消长水平对比试验。

2 结果

2.1 疫苗的检验

2.1.1 无菌检验

取样分别接种于普通肉汤，厌氧肉肝汤及营养琼脂培养基各两管，37 ℃培养96 h，無杂菌生长。

2.1.2 安全性检验

由表1可见疫苗是安全的。

2.2 急性毒性试验

通过油乳剂灭活疫苗对1日龄乳鸽的急性毒性试验表明，均无急性毒性作用，对乳鸽生长无影响。

2.3 对比试验

表2结果表明，两种疫苗在同剂量下免疫抗体消长水平基本一致。免疫后180 d后， Hl抗体效价均在6.7log2以上，同时证明这两种油乳剂苗的免疫持续期基本一致。

3 小结与讨论

3.1 通过试验表明，两种疫苗注射后，实验鸽均无不良反应。精神食欲良好，注射局部无异常变化， 安全性良好。对1日龄乳鸽接种1个使用剂量进行急性毒性试验观察， 不影响鸽的生长。

3.2 通过尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒苗、尿囊液毒苗免疫抗体消长水平对比试验，结果表明差异不显著。两种油乳剂灭活苗在免疫后9 d抗体效价开始上升（平均为3.2log2、3.0log2），21 d达到峰值 （9.5log2、9.1log2），6个月仍能维持较高的水平（6.9log2、6.7log2）。从而证实了尿囊液、羊水、尿囊膜、混合病毒苗与目前广泛使用的尿囊液毒苗在性能上是一致的。

3.3 通过研究表明，将羊水和尿囊膜亦作为抗原材料收集，应用在疫苗的制备中，可减少浪费，提高经济效益。□□