山西黑猪肌细胞生成素基因部分序列的扩增

刘勇

摘 要：肌细胞生成素在肌细胞的分化过程中起着关键的正向调节作用。根据猪的肌细胞生成素的基因序列设计特异性的扩增引物，以山西黑猪为研究对象，通过PCR扩增，获得长度为1 493 bp的序列，经测序和基因的同源性比对得出山西黑猪的基因序列与家猪等动物有较高的同源性。结果表明：肌细胞生成素基因可能在山西黑猪肌肉组织发育过程中发挥重要的调控作用。为今后改良黑猪的肌肉品质奠定理论基础。

关键词：山西黑猪；肌细胞生成素；扩增；应用

中图分类号：S828.9 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2014）06-0055-02

1 材料与方法

1.1 组织材料及试剂

1.1.1 材料

山西黑猪一头，来自山西省原平市，取其腿部肌肉一块，迅速投入液氮。用于RNA的提取。

1.1.2 主要试剂

Trizol 提取试剂盒、反转录试剂盒、PCR扩增试剂盒、DNA MarkerDL2000和Rnase抑制剂均购自大连TaKaRa公司。

1.2 RNA提取

将冻存于液氮的山西黑猪退腿部肌肉在液氮中研磨成粉后，按照Trizol试剂盒提供的实验步骤提取山西黑猪肌肉中的总RNA，用2 %琼脂糖凝胶电泳检查提取的RNA的完整性，使用微量核酸蛋白测定仪测定其浓度。并将其归为500 ng/μL，用于后续实验中的PCR扩增。

1.3 引物设计

对GeneBank中登录猪的肌细胞生成素（myogenin）序列（X89007.1、AY912514.1和AY912513.1）进行同源性比较，借助Primer5.0 plus软件设计用于扩增山西黑猪肌细胞生成素1对特异性引物，预计的扩增产物长度为1 493 bp，引物序列为： F： gtgcctgcctttgttagagc；R： catcctggcagacagtctca。由大连宝生物工程有限公司合成。

1.4 反转录及PCR扩增

将提取的山西黑猪肌肉的总RNA，按照TaKaRa公司反转录试剂盒提供的实验方法进行cDNA第一链的合成。反转录条件为：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。

以反转录产物cDNA为模板，以特异引物进行PCR扩增。PCR反应体系为25 μL：cDNA 2 μL、特异上下游引物各0.5 μL、TaqE 0.25 μL、dNTP 2 μL、10×buffer 2.5 μL、无菌水17.25 μL，扩增条件为：95 ℃ 10 min，95 ℃ 10 s，59 ℃ 10 s，72 ℃ 20 s， 72 ℃ 10 min。PCR产物用2 %的琼脂糖凝胶检测。扩增产物经割胶、回收、纯化后送交大連宝生物工程有限公司双引物测序。

2 结果

2.1 PCR产物电泳结果

PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，可见与预期大小相符的特异性条带（图1）。

2.2 PCR产物测序结果

3 讨论

山西黑猪是由巴克夏猪、 内江猪、山西本地猪杂交培育而成。现主要分布在大同、原平、河曲、五台和太谷等市县。其全身为黑色，繁殖力较高，抗逆性较强，耐粗饲生长速度快[1]。作为地方品种，挖掘其肉用方面的优势，提高其饲养量和生产量势在必行。因此，运用分子生物学手段，克隆产肉量和肉质相关基因的序列，现实山西黑猪的肉质改良是可行有效的方法。

肌肉的发育过程是一个复杂的生理过程，受众多的正向和负向调控因子的共同调控，其中生肌调节因子家族在肌肉发育过程中起着重要的正调控作用，并且控制着肌肉发育的整个过程。肌细胞生成素是生肌调节因子MYOD家族成员之一，在肌细胞的分化过程中起着关键的调节作用，目前它是研究畜禽肉质性状的一个重要候选基因[2-4]。本实验设计1对特异性引物，经PCR扩增获得1 493 bp的基因序列，与家猪、野猪、牛、马、羊的同源性比较，同源性分别为：100 %、99 %、99 %、97 %。□□

参考文献：（4篇，略）