中药提取物的组方及其对致病性大肠杆菌的抑菌试验

贺泂杰　贺奋义　郭慧琳

摘 要：通过试验，筛选出毒性低，具有止泻、退热作用的中草药黄连、黄芩、白头翁、秦皮、铁苋菜、四季青、苦参和穿心莲等。根据其有效成分的性质，对各药有效成分进行提取。将提取物按照一定的比例组成不同的配方，采用琼脂平板稀释法，对仔猪致病性大肠杆菌标准毒株K99和本试验室分离鉴定的O1、O2、O8、O138、O141、O78、K89进行体外抑菌試验，结果表明，配方四所含各提取物的含量最小，抑菌效果最佳。

关键词：中药提取物；组方；致病性大肠杆菌；体外抑菌

中图分类号：S853 文献标识码：A 文章编号：1001-0769（2014）06-0050-02

大肠杆菌（Escherichia coli，Elcoli）又称为大肠埃希菌，属革兰氏阴性杆菌，由Escherich在1885年发现的。大肠杆菌主要寄居在人体的大肠内，常引起严重腹泻，甚至败血症。当它侵入人体其他一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎等。目前临床抑杀大肠杆菌仍以抗生素为主。但近年来大肠杆菌对多种抗生素表现出耐药性，特别是产生超广谱β-内酰胺酶的大肠杆菌，其耐药率逐年有升高的趋势。许多中草药天然具有对大肠杆菌的抑制杀灭作用，其抗菌作用日益受到重视。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药材

黄连、黄芩、白头翁、秦皮、四季青、铁苋菜、苦参和穿心莲，均购自兰州市医药超市。将购买的中草药用蒸馏水洗净风干，然后用电动粉碎机将其粉碎后备用。

1.1.2 试验菌种

大肠杆菌标准毒株（K99），购于中国兽药监察所。仔猪致病性大肠杆菌（O1、O2、O8、O138、O141、O78、K89）由平凉猪场采集病料分离鉴定。

1.1.3 供试菌种培养基

普通营养琼脂培养基，一般选用LB琼脂培养基。

1.1.4 主要仪器

生化培养箱，不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器，手动可调试移液器，电子天平，粉碎机，单人双面净化工作台，电热恒温水浴锅，电热恒温干燥箱。

1.2 试验方法

1.2.1 中草药有效成分的提取

采用不同的提取方法对中药有效成分进行提取。

1.2.2 菌株复苏及纯化

用接种环分别蘸取8种不同的细菌，分别加入到装有一定量LB液体培养基的带塞试管中，做好标记，放入37 ℃温箱中培养18 h。将配好的LB固体培养基放入微波炉中加热融化，倒入培养皿中，厚度为5 mm左右，静置让其固化；用接种环分别蘸取8种不同的细菌，于培养皿中划线以得到单个菌落，37 ℃于生化培养箱中培养18 h；用接种环挑取单个菌落移入装有LB液体培养基的试管内，置于温箱中37 ℃震荡培养以得到一定浓度的较纯菌液。

1.2.3 培养基的制备

普通营养琼脂培养基，一般选用LB琼脂培养基。营养琼脂按说明，溶化高压灭菌，冷却45 ℃左右倒板，厚度为4 mm，备用。

1.2.4 菌液制备

用接种环分别蘸取纯化的细菌，于培养皿中划线培养以得到单个菌落；用接种环挑取单个菌落接种于2 mL LB培养液内，经37 ℃培养6 h，1∶1 000倍稀释备用。

1.2.5 中药提取物的组方及其对致病性大肠杆菌的体外抑菌试验

将硫酸黄连素、黄芩苷、白头翁、秦皮、四季青、铁苋菜、苦参和穿心莲提取物按照不同的配伍和用量组成不同的配方进行试验研究。最后筛选出四个效果比较好的配方进行试验（表1）。

以上配方按照一定工艺加水至10 mL，调pH值7.5～8，制成10倍浓缩液，10磅高压灭菌20 min，分别吸取经灭菌的四种配方药液1 mL、0.8 mL、 0.6 mL、0.5 mL、0.4 mL、0.3 mL、0.2 mL、0.1 mL到灭菌的平皿中，加入LB琼脂培养基至10 mL，混匀，冷却凝固后成梯度浓度含药琼脂平板，画好分区，按照琼脂平板稀释法进行四个配方对八种致病性大肠杆菌的体外抑菌试验。

2 结果

2.1 中草药有效成分的提取

针对各药不同的化学有效成分，分别设计了对黄连、黄芩、白头翁、秦皮、四季青、铁苋菜和苦参中活性成分的提取工艺，提取获得硫酸黄连素纯品、 黄芩苷纯品、30∶1白头翁提取物、30∶1秦皮提取物、50∶1四季青、30∶1铁苋菜提取物、20∶1苦参提取物和20∶1穿心莲提取物。

2.2 中药提取物的组方及其对致病性大肠杆菌的抑菌试验

将硫酸黄连素纯品、黄芩苷纯品、30∶1白头翁提取物、30∶1秦皮提取物、 50∶1四季青、30∶1铁苋菜提取物、20∶1苦参提取物和20∶1穿心莲提取物按照一定的比例进行配伍，并按照琼脂平板稀释法进行体外抑菌试验，结果见表2。

由表2可见，配方二和配方四抑菌效果比较好，而以配方四所含各提取物的含量最小。

3 分析与讨论。

3.1 将8味中药提取物组方进行体外抑菌活性试验

四个配方均有明显的体外抑菌作用。综合分析，配方四所含各提取物的含量最小，抑菌效果最佳。

3.2 中草药提取物的体外抑菌试验

所得结论对临床用药只是起到一个理论指导作用。依据中兽医学理论可知，一般单味药的作用要比多味药差，因为许多中草药之间都具有协同相加的作用。药物配伍适当，能有效提高疗效，减少药品用量，降低成本，为中草药的复方制剂研制及实践应用提供可能。

3.3 甘肃省是我国中草药的主产区之一有丰富的资源优势

因此，应用中兽医理论，结合现代先进的生产设备，探索科学的工艺流程，合理开发应用这一资源，不仅在兽医临床上具有较好的治疗价值，而且对养殖、种植户脱贫致富奔小康具有现实意义。□□

参考文献：（6篇，略）