Ⅰ型自身免疫性肝炎患者抗Ro52抗体的检测及临床意义

孙丽梅，闫惠平，冯 霞，王一鹏，赵丹彤，张海萍，王 熠，马胤雪，刘燕敏，2＊

Ⅰ型自身免疫性肝炎患者抗Ro52抗体的检测及临床意义

孙丽梅1，闫惠平1，冯 霞1，王一鹏1，赵丹彤1，张海萍1，王 熠1，马胤雪1，刘燕敏1，2＊

（1．首都医科大学附属北京佑安医院自身免疫性肝病临床研究中心，北京100069；2．首都医科大学附属北京佑安医院肝病免疫科，北京100069）

目的 探讨I型自身免疫性肝炎患者抗Ro52抗体的临床意义。方法 采用免疫印记法检测54例I型自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）患者血清中的抗Ro52抗体，根据检测结果分为抗Ro52抗体阳性组与阴性组，并对两组检测结果及临床资料进行回顾性分析。结果 54例I型AIH患者中，抗Ro52抗体阳性20例（37%）。抗Ro52抗体阳性组与阴性组Ⅰ型AIH患者的抗核抗体（ANA分布主要见于滴度1∶320～1∶1000）。20例抗Ro52抗体阳性患者中，5例（25%）抗可溶性肝原（抗SLA／LP）抗体阳性；12例（60%）同时抗Ro60阳性。抗Ro52抗体阳性组出现肝病相关并发症的比例高于阴性组，但差别无统计学意义（65%vs．38．2%；χ2＝3．613，P＞0．05）。抗Ro52抗体阳性组合并肝外自身免疫性疾病的比例显著高于阴性组（χ2＝4．290，P＝0．038）。抗Ro52抗体阳性组IgG水平显著高于阴性组（t＝3．014，P＝0．04）。结论 抗Ro52抗体阳性可提示AIH患者伴发肝内或肝外并发症几率升高；抗Ro52抗体可能与IgG共同作用，参与Ⅰ型AIH的发病。

抗Ro52抗体；Ⅰ型自身免疫性肝炎；肝病相关并发症；肝外自身免疫性疾病；IgG

（Chin J Lab Diagn，2014：18：0236）

自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）是一种免疫介导的、慢性肝脏炎症性疾病，以高γ球蛋白血症、自身抗体阳性、肝组织学界面炎和免疫抑制治疗有效为特征［1］。根据自身抗体将AIH分为Ⅰ型和Ⅱ型。Ⅰ型以抗核抗体（ANA）和／或抗平滑肌抗体（SMA）阳性为特征，占总AIH患者的80%，常合并其他肝外自身免疫性疾病（15%－34%），诊断时已进展为肝硬化者占0－25%［2］。抗Ro52抗体可在多种疾病中检出，不仅见于系统性红斑狼疮、干燥综合症和系统性硬化症等常见自身免疫性疾病中，还可见于原发性胆汁性肝硬化（Primary Biliary Cirrhosis，PBC）［3］和AIH［4］等自身免疫性肝病中。但目前尚缺乏抗Ro52抗体对我国AIH患者诊断和治疗意义的相关报道。

本研究收集了2008年1月－2011年7月54例Ⅰ型AIH患者血清，通过进行抗Ro52抗体检测，对抗Ro52抗体阳性组与阴性组Ⅰ型AIH患者的临床资料进行比较，旨在探讨抗Ro52抗体在中国I型AIH患者诊治过程中的价值。

1 材料与方法

1．1 研究对象

以2008年1月－2011年7月北京佑安医院住院的54例Ⅰ型AIH患者为研究对象。患者年龄20－74〔平均（52．81±11．14）〕岁，男9例，女45例。收集AIH患者血液样本5ml，离心并提取血清1ml。AIH的诊断参照1999年国际自身免疫性肝炎小组（IAIHG）制定的诊断标准［5］。

1．2 方法

1．2．1 采用免疫印迹法检测ANA谱（包括抗Ro52抗体、抗Ro60等）将膜条放置于温育槽中加入1．5ml缓冲液振荡孵育5min，弃缓冲液加入稀释待检患者血清1．5ml，振荡孵育30min。洗涤后加入碱性磷酸酶（ALP）标记第二抗体再振荡孵育30min。洗涤后加入底物显色10min，水洗终止后观察结果。检测膜条上出现蓝紫色条带为阳性，以试剂公司提供的阳性条带位置标准图判定结果。（试剂盒来源德国Euroimmun公司）

1．2．2 间接免疫荧光检测自身抗体 选择Hep－2细胞和5种组织（猴肝脏、心肌和髂腰肌组织、大鼠肾和胃组织）的冰冻切片作为抗原，制成超薄片固定在抗原基质。对同一份标本进行平行测定。抗核抗体（ANA）滴度＞l∶100为阳性。（试剂盒来源德国Euroimmun公司）。

1．2．3 肝脏功能检测 应用全自动生物化学分析仪检测（Olympus AU5400系统）丙氨酸氨基转移酶（ALT），天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TbiL）、直接胆红素（DbiL）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、γ－谷氨酰转肽酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）等肝功指标。

1．2．4 免疫球蛋白检测 应用罗氏（Roche）E170采用电化学发光法检测免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）和血清补体（C3、C4）等。

1．3 统计学处理

用SPSS16．0软件进行统计学处理，计量资料中正态分布资料以均数±标准差表示，采用t检验，偏态分布的ALT、AST和GGT检测数据用M（范围）表示，采用秩和检验；计数资料以例数和百分比描述，采用χ2检验。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 54例Ⅰ型AIH患者中抗Ro52抗体的检出情况及其他自身抗体检出情况

54例AIH患者采用免疫印记检测ANA抗体谱中，抗Ro52抗体阳性20例（37．0%），抗Ro52抗体阴性34例（63．0%）；15例抗Ro60抗体阳性（27．8%），39例抗Ro60抗体阴性（72．2%）；抗Ro52抗体、抗Ro60抗体同时阳性的样本12例（22．2%）；抗Ro52抗体阳性而抗Ro60抗体阴性的样本8例（14．8%），抗Ro52抗体阴性而抗Ro60抗体阳性的样本3例（5．6%）。为了进一步确认抗Ro52抗体与除ANA外的其他自身抗体的并存情况，我们还进一步检测了其他自身免疫性肝病中常见的自身抗体。其中，在20例抗Ro52抗体阳性患者中，5例（25%）同时抗可溶性肝原（抗SLA／LP）阳性，其中抗SLA／LP（＋＋＋）3例，SLA／LP（＋＋＋＋）2例。采用间接免疫荧光法检测54例AIH患者抗核抗体（ANA）均阳性，ANA滴度分布主要见于（1∶320～1∶1000），其中抗Ro52抗体阳性组抗平滑肌抗体阳性3例，抗线粒体抗体（AMA）阳性5例，抗细胞骨架抗体阳性1例，抗着丝点抗体阳性2例；抗Ro52抗体阴性组抗平滑肌抗体阳性3例，抗线粒体抗体（AMA）阳性5例，抗细胞骨架抗体阳性2例，抗着丝点抗体阳性3例，结果见表1。

表1 54例AIH患者中抗Ro52抗体及其他自身抗体检出情况

2．2 抗Ro52抗体阳性组与阴性组Ⅰ型AIH患者一般资料的比较

将抗Ro52抗体阳性组与阴性组患者一般资料进行分析比较。结果表明两组发病年龄及性别构成均无统计学差异。肝病相关并发症更容易出现在抗Ro52抗体阳性患者组中，为65%（13／20）；而抗Ro52抗体阴性组出现肝病相关并发症的比率则要低一些，为38．23%（13／34），抗Ro52抗体阳性组出现肝病相关并发症的比率高于阴性组，但差异无统计学意义（χ2＝3．613，P＞0．05）；两组患者进展为肝硬化的比例无统计学差异。（见表2）

抗Ro52抗体阳性组患者合并肝外自身免疫性疾病的比例为40%（8／20）其中5例干燥综合征、1例银屑病、1例甲状腺功能减退、1例类风湿关节炎；而阴性组为11．76%（4／34），其中1例干燥综合征、1例银屑病、1例甲状腺功能减退、1例桥本甲状腺炎，差异有统计学意义（χ2＝4．290，P＝0．038）。

表2 两组患者一般资料的比较

2．3 抗Ro52抗体阳性与阴性Ⅰ型AIH患者两组生化指标、凝血功能和免疫学指标的比较

两组生化指标、凝血功能和免疫学指标的比较：ALT、AST、ALP、GGT、ALB、PLT、PTA、IgA、C3和C4无统计学差异。抗Ro52抗体阳性组IgG、IgM水平显著高于阴性组（分别为t＝3．014，P＝0．004；t＝2．925，P＝0．005），见表3、表4。

表3 两组生化指标对比

表4 两组患者凝血功能、免疫指标的比较

3 讨论

抗Ro52抗体为自身抗体ANA的一种，其靶抗原为TRIM21，后者属于TRIM蛋白家族的一员，因此，抗Ro52抗体又称为抗TRIM21。抗Ro52抗体是一种致病免疫复合物，常用于疾病的诊断和预后评价［6，7］。有文献报道，抗Ro52抗体平均比系统性红斑狼疮（SLE）相关的其他自身抗体（如ds－DNA、抗Sm等）早3－4年出现，因此抗Ro52抗体可能对SLE的早期诊断有重要意义［8］。

Ⅰ型自身免疫性肝炎高血清自身抗体以ANA、SMA等为主，Ⅰ型自身免疫性肝炎中常检测到抗Ro52抗体。Montano－Loza等［9］报道，北美Ⅰ型AIH患者中抗Ro52抗体的阳性率38%，而本研究中抗Ro52抗体阳性率为37%，可见Ⅰ型AIH患者外周血中抗Ro52抗体并不鲜见。除抗Ro52抗体以外，AIH患者外周血中还可出现多种自身抗体，包括ANA、SMA、actin抗体和抗SLA／LP等。在欧洲的一项研究表明［4］，77%的AIH患者抗Ro52抗体和抗SLA同时阳性，国内赵丹彤等［9］报道抗Ro52抗体与抗SLA具有一致性。Montano－Loza等［10］还认为单抗Ro52抗体阳性和抗Ro52抗体及抗SLA均阳性的Ⅰ型AIH患者的预后均不好。遗憾的是，本研究中抗SLA的阳性患者较少，不足以评估抗Ro52抗体与抗SLA的关系及监测Ⅰ型AIH患者的预后。

Song等［11］的研究表明，原发性干燥综合征患者中，抗Ro52抗体阳性患者更容易出现肝脏受累，若抗Ro52抗体阳性伴有抗Ro60阳性的患者出现肝脏受累较单抗Ro52抗体阳性的比例更大。然而，抗Ro52抗体究竟是肝损害的原因还是结果仍然存在争议。本研究通过对抗Ro52抗体阳性组与阴性组临床表现比较发现，肝病相关并发症更容易出现在抗Ro52抗体阳性组，但差异无统计学意义，是否提示抗Ro52抗体阳性患者病情较重，需进一步扩大样本观察研究。另外，本研究还发现，抗Ro52抗体阳性组患者伴发肝外自身免疫性疾病较阴性组更常见，因而对于抗Ro52抗体阳性的Ⅰ型AIH患者，还应该注意鉴别是否合并肝外自身免疫性疾病。然而，抗Ro52抗体阳性组和阴性组肝功能比较无明显差异，提示在肝脏损伤的机制中抗Ro52抗体并非主导因素。

比较抗Ro52抗体阳性组和阴性组免疫学指标发现，抗Ro52抗体阳性组IgG水平明显高于阴性组。Rhodes等［12］的研究发现TRIM21（Ro52）可与IgG重链发生蛋白质与蛋白质间的相互作用，发生作用的部位位于C端的B30．2区域。最近Anthony等［13］发现，Ro52不仅仅只是自身免疫性抗体的靶抗原物质，而且可以通过其C端的PRYSPRY区域结合血清中普通IgG分子的Fcγ段。以上研究均提示Ro52参与了IgG功能的调节，两者的结合可能参与Ro52自身免疫抗原的暴露，诱导自身抗体产生并引起自身免疫性疾病。

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Antibody to Ro52 in patients with type I autoimmune hepatitis

SUN Li－mei1，YAN Hui－ping1，FENG Xia1，et al．
（1．Clinical Research Center for Autoimmune Liver Disease，Beijing You’an Hospital，Capital Medical University，Beijing100069，China；2．Department of Liver Disease Immunology，Beijing You’an Hospital，Capital Medical University，Beijing100069，China）

Objective To investigate the significance of antibody to Ro52in patients with type I autoimmune hepatitis．Methods Fifty－five patients with type I autoimmune hepatitis were detected anti－Ro52by immunological blotting．According to anti－Ro52results，the clinical features were compared between patients with and without anti－Ro52，respectively．Results Twenty patients had anti－Ro52，the rate was 37%．The titers of antinuclear antibody were 1∶320－1∶1000．Of the twenty patients who had anti－Ro52，5patients（25%）had anti－soluble liver antigen／liver－pancreas antibody（anti－SLA／LP）；12patients（60%）had anti－Ro60．AIH Patients with anti－Ro52had higher rate of liver disease related complications compared with the control group（65%vs．38．2%；χ2＝3．613，P＝0．057），but with little significance．AIH Patients with anti－Ro52had higher rate of extrahepatic autoimmune diseases and IgG compared with the control group（χ2＝4．290，P＝0．038；t＝3．014，P＝0．04）．Conclusion AIH patients with anti－Ro52may have higher rate of liver disease related complications．Anti－Ro52and IgG may play a role in the development of AIH．

Anti－Ro52antibody；type I autoimmune hepatitis；liver disease related complications；extrahepatic autoimmune diseases

孙丽梅（1969－），女，主管技师，研究方向：肝病相关自身抗体检测；刘燕敏（1966－），女，主任医师，研究方向：肝病免疫。

2013－09－10）

1007－4287（2014）02－0236－04

首都卫生行业发展科研专项项目（2011－2018－05），佑安肝病艾滋病科研基金（BJYAH－2011－011）

＊通讯作者

R575．2

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