气候及地理环境对不同采收期广金钱草质量的影响*

王海霞,林萍,周文婷,姬生国

(广东药学院中药学院,广州 510006)

气候及地理环境对不同采收期广金钱草质量的影响*

王海霞,林萍,周文婷,姬生国

(广东药学院中药学院,广州 510006)

目的 探讨气候、地理环境及采收期对广金钱草药材中夏佛塔苷的含量的影响,为广金钱草的规范化种植提供参考。方法采用高效液相色谱法测定广金钱草药材中夏佛塔苷的含量,色谱柱为ODS-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)。流动相为甲醇-水(32∶68),流速为0.5 mL·min-1,柱温35℃,检测波长272 nm。结果气候类型、降水量、年平均温度、年平均日照时间、地理环境等对广金钱草中夏佛塔苷含量有明显的影响。结论亚热带季风气候,温度在25～32℃,日照时间约10 h,平均降雨量约1 942 mm最适宜广金钱草生长,广西栽培种中总含量最高,海南样品中含量最低。7月份采收的样品含量较其他月份高。

广金钱草;夏佛塔苷;采收期,不同;色谱法,高效液相

广金钱草收载于《中华人民共和国药典》2010年版一部,以干燥地上部分入药,主产于广西、广东、海南等省[1]。具有清热利湿、通淋排石之功效。研究表明广金钱草含有生物碱、黄酮苷、酚类、鞣质等众多化学成分,其中夏佛塔苷为其质量控制的指标性成分[2-3]。生长环境及产地的不同对广金钱草中化学成分的变化有一定的影响,造成其质量的参差不齐[4]。为了更好地对其进行质量控制,保证临床用药的安全性及有效性[5],笔者以夏佛塔苷及浸出物的含量为指标,考察了广金钱草主产地的120批次药材中夏佛塔苷及浸出物的含量[6-7],并结合气候地理因素进行分析、评判,以探讨各种因素与其质量的关系,为广金钱草的规范化种植,提供参考依据。

1 材料与仪器

1.1 药材来源 实验所用样品于2013年采集于广东省、海南省及广西壮族自治区。经广东药学院中药学院姬生国教授鉴定为豆科山蚂蝗属植物广金钱草Desmodium styracifolium(Osb.)Merr.。药材经干燥后粉碎过50目筛,备用。

1.2 仪器与试剂 LC20AT型全自动高效液相色谱仪(日本岛津公司),ODS-C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm,日本岛津公司),BIY211b电子天平(日本岛津公司),KQ-500DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),KYC 100B恒温振荡器(上海福玛实验设备有限公司),试剂除流动相为色谱纯外其余均为分析纯。夏佛塔苷对照品(批号:MUST-12102909,成都曼思特生物科技有限公司,纯度≥98%)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 ODS-C18色谱柱;流动相为甲醇-水(32∶68),流速为0.5 mL·min-1,柱温35℃,检测波长272 nm,进样量10 μL。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取夏佛塔苷对照品,加甲醇配成每毫升含夏佛塔苷0.227 mg的对照品溶液,用孔径0.45 μm微孔滤膜过滤。

2.3 供试品溶液的制备 精密称定样品0.2 g,置具塞锥形瓶,加80%甲醇20 mL,称质量,超声提取(功率100 W,频率40 kHz)20 min,放冷,补足质量,摇匀,滤过,滤液蒸干,50%甲醇定容在10 mL的量瓶中,用孔径0.45 μm微孔滤膜滤过,即得。

2.4 含量测定方法 精密吸取上述溶液10 μL,按“2.1”项下色谱条件进样测定,记录40 min色谱图。夏佛塔苷的保留时间为27 min,理论板数为10 446.5,分离度为9.393。对照品及样品高效液相色谱见图1。

1.夏佛塔苷图1 夏佛塔苷对照品(A)、广金钱草样品(B)色谱图1.schaftosideFig.1 Chromatogram of schaftoside reference(A)and Desmodium styracifolium sample(B)

2.5 线性关系考察 分别各精密吸取两种对照品溶液2.0,2.0,1.0,1.0,1.0,1.0,1.0 mL,分别置2,5,5, 10,25,50,100 mL量瓶中,加50%甲醇定容至刻度,摇匀,经孔径0.45 μm微孔滤膜滤过。按“2.4”项下进样测定(n=6),以对照品峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X),绘制标准曲线,得回归方程:夏佛塔苷:Y=4×107X-47 680,r=0.999 7。结果表明,在上述色谱条件下,对照品在质量浓度为0.002 27～0.227 00 mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度实验 取夏佛塔苷对照品溶液,按“2.4”项下测定连续进样测定6次,得夏佛塔苷含量,RSD为2.3%。结果表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性实验 精密称定样品约0.2 g,按“2.4”项下制成供试品溶液,按“2.4”项下测定,于0,2,4,8, 12,24 h分别进样测定,计算得夏佛塔苷含量,RSD为1.0%。结果表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性实验 取同一批样品6份,每份0.2 g,精密称定,分别按“2.3”项下方法制备成供试品溶液,按“2.4”项下方法进样测定,计算得夏佛塔苷含量,RSD为2.3%。结果表明该方法的重复性良好。

2.9 加样回收率实验 精密称取6份已知含量的样品(夏佛塔苷含量为0.043 mg·mL-1)各0.2 g。分别精密加入0.043 mg夏佛塔苷对照品,按“2.3”项方法制备供试品溶液,按“2.4”项方法进样测定,计算回收率。结果夏佛塔苷平均回收率为98.26%,RSD为1.51%。

表1 夏佛塔苷加样回收率实验结果Tab.1 Recovery results of schaftoside

2.10 样品含量测定 将样品按“2.3”项下制备成供试品溶液,按“2.4”项下含量测定方法进行测定,记录色谱图,计算各样品中夏佛塔苷含量,结果见表2。广东省广州市和广东省湛江市3～7月份采收期夏佛塔苷平均含量分别为2.33,2.34,2.81,2.92,3.11和2.00,2.05,2.06,2.71,3.24 mg·g-1。

2.11 浸出物测定 将样品按《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅩA水溶性浸出物测定法项下冷浸法测定,记录质量,计算各样品中浸出物含量。结果显示,广东、海南、广西产夏佛塔苷浸出物平均含量依次为9.16%,7.96%,11.01%。

3 讨论

广金钱草多生于低海拔的荒坡、草地或林下。喜温暖湿润气候,较耐干旱,不耐严寒,最适宜生长温度为25～32℃,温度低于-4℃则不能生长[8]。日照时间以约10 h为最佳,全光照条件下生长好,荫蔽度＞30%时侧蔓少,生长不旺盛。对土壤要求不严,黄壤土、红壤土、砂质壤土均能生长,但以透水性良好的砂质壤土为好[9]。栽培品种在生长期要求土壤水分含量较多时,才能促进芽萌发和侧枝及蔓枝的生长。研究结果表明采收于广西的广金钱草平均夏佛塔苷含量(1.71 mg·g-1)及浸出物(11.01%)均高于采收于广东省(1.49 mg·g-1)(9.16%)和海南省(1.27 mg·g-1)(7. 96%)的样品。分析原因可能是由于广西属低纬地区,四周多山,境内以丘陵山地为主,南濒热带海洋。这种特殊的地理环境,与大气环流的共同作用,形成热量丰富、四季宜耕,降水丰沛(年平均年降水量1 942 mm, 70%～80%集中于夏季)、干湿分明,日照适中、冬少夏多,土壤主要由砂岩和泥质岩发育形成的,适合广金钱草生长。而海南地处于热带的北缘,具有热带和亚热带自然条件的过渡特征,属于海洋性热带季风气候,年均降水量＞1 600 mm,时见暴雨出现,也常有台风侵袭,全年雨量分配很不均匀,呈显著的干湿两季,温度较高,相比于广西、广东降水量较少,环境相对于不利于广金钱草的生长,由此导致采收于广西、广东的夏佛塔苷含量高于采收于海南。

表2 不同产地广金钱草夏佛塔苷含量测定结果Tab.2 Results of content determination of schaftoside in Desmodium styracifolium from different collecting area

《中华人民共和国药典》2010年版一部中广金钱草项下的采收时间是夏、秋二季采割。据此,笔者对3月至7月间采集于广东省广州市及湛江市乌塘镇的广金钱草GAP种植基地的样品进行了含量测定。结果7月份采集的样品中夏佛塔苷的含量最高。由于每年的5月至7月份为广金钱草的生长旺盛期,8月进入生殖生长期,开花结果,10月初果实逐渐成熟,11月下旬植株开始落叶枯萎,以宿根越冬。据此,笔者认为7月份采收的头茬药材质量为优。

亚热带季风气候夏季较热,年降水量都相对较大,冬季较少且温度较高,季节变化基本相似。6月,7月降水量占总降水量约70%,降水量丰富,日照充足,有利于广金钱草的生长,有效成分的积累相对较高,可以保证广金钱草药材的质量。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:190.

[2] 陈丰连,张文进,徐鸿华.不同采收期及不同产地广金钱草地上部分HPLC指纹图谱研究[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(14):96-98.

[3] 李晓亮,汪豪,刘戈,等.广金钱草的化学成分研究[J].中药材,2007,30(7):802-805.

[4] 陈丰连,马鑫斌,徐鸿华.不同产地广金钱草药材质量研究[J].广东药学院学报,2010,26(3):248-251.

[5] 姬生国,郭念欣,李颖春,等.广金钱草及其制剂的HPLC指纹图谱研究[J].中国药房,2010,21(27):2543-2545.

[6] 何枭宇,杨若婧,朱志凯,等.大叶蛇葡萄不同提取物总黄酮含量测定[J].医药导报,2012,31(2):211-212.

[7] 汪秋兰,王文清,马永贵.高效液相色谱法在中药有效成分含量测定中的应用[J].医药导报,2011,30(11):1474-1476.

[8] 蒙爱东,覃柳燕,董青松.中药材广金钱草种植基地选择标准的探讨[J].中国标准化,2009,52(11):27-28.

[9] 蒙爱东,闫志刚,董青松,等.广金钱草绿色药材生产基地环境质量评价[J].安徽农业科学,2009,37(9):4242-4243.

DOI 10.3870/yydb.2014.08.027

Influence of Climate and Geographical Environment on Quality of Desmodium Styracifolium Herba Harvested at Different Time

WANG Hai-xia,LIN ping,ZHOU Weng-ting,JI Sheng-guo
(School of Traditional Chinese Medicine,Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China)

Objective To study the influence of climate,geographical environment and harvesting time on contents of schaftoside inDesmodium styracifoliumHerba.MethodsContent of schaftoside inDesmodium styracifoliumHerba was determined by using HPLC.ODS-C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm)was used,the mobile phase was methanol-water(32∶68),the detection wavelength was 272 nm,the flow rate was 0.5 mL·min-1,and the column temperature was 35℃.ResultsThe climate type,amount of precipitation,average temperature,duration of sunshine,geographical environment of different province had significant impacts on the content of schaftoside inDesmodium styracifoliumHerba.ConclusionSubtropical monsoon climate,temperature from 25℃to 32℃,sunshine time of 10 h per day and the average annual rainfall of 1 942 mm are suitable for growth ofDesmodium styracifolium.The content of schaftoside in samples cultivated fromGuangxiProvince is higher than that cultivated fromGuangdongProvince andHainanProvince.The schaftoside content of sample cultivated in July is higher than that cultivated in other months.

Desmodium styracifolium;Schaftoside;Collecting time,different;Chromatograph,high performance liquid

R282.71;R927.2

A

1004-0781(2014)08-1077-03

2013-10-29

2014-01-02

*广东省科技计划项目(2009B030801044)

王海霞(1989-),女,海南憺州人,在读硕士,研究方向:中药资源开发与道地性研究。电话:020-39352327,E-mail:wanghx200820@163.com。

姬生国(1967-),男,海南延津人,教授,博士,从事中药资源、中药质量标准及中药新药研究。电话:020-39352327,E-mail:shengguo_ji@163.com。