以栀子苷的含量确定房县产栀子的最佳成熟度及药用部位*

张晓燕,邓雪华,谢勇,卢敏,毛如续

(1.湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室,十堰 442000;2.湖北医药学院药学院,十堰 442000;3.湖北神农本草中药饮片公司,十堰 442000)

以栀子苷的含量确定房县产栀子的最佳成熟度及药用部位*

张晓燕1,2,邓雪华2,谢勇2,卢敏2,毛如续3

(1.湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室,十堰 442000;2.湖北医药学院药学院,十堰 442000;3.湖北神农本草中药饮片公司,十堰 442000)

目的 测定房县产不同成熟程度栀子的不同部位中栀子苷的含量,为确定其最佳的成熟度和药用部位提供依据。方法将进入成熟期的栀子果从全青到黄红分为4种成熟度,建立高效液相色谱法分别测定每种成熟度果实不同部位栀子苷的含量。结果测得该4种成熟度栀子果实的栀子苷含量均可达到《中华人民共和国药典》标准,其中青灰色全果中含量高达13.01%。结论成熟期栀子果的成熟度与栀子苷的含量呈负相关,果实青灰色为最佳成熟度。《中华人民共和国药典》载全果入药科学合理。

栀子,房县;栀子苷;含量;成熟度

栀子来源为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoidesEllis)的干燥成熟的果实[1],又名黄栀子、山栀子、水栀子、越桃、山黄栀等[2]。栀子具有泻火除烦,清热利尿,凉血解毒等功效。用于热病心烦、黄疸尿赤、血淋涩痛、血热吐衄、目赤肿痛、火毒疮疡等症的治疗[1]。栀子中含有环烯醚萜类物质、黄酮、挥发油、有机酸和皂苷等化合物,国内外公认其有效成分为环烯醚萜类,其中含量最高的是栀子苷[3],《中华人民共和国药典》2010年版规定栀子的鉴别和定量指标也是栀子苷[4]。栀子主产于我国江西、湖南、浙江、福建和广东等地。近年来湖北各地均有广泛种植,在十堰市房县有部分药农从江西吉安引进种苗,进行了大面积人工种植。为了合理利用资源,保证药效最大化,笔者以栀子苷含量为指标,研究栀子果实药用最佳的成熟度和药用部位,现将结果报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器 LC-20AD高效液相色谱色谱仪(日本SHIMADZU);液相系列(LC-20AD泵,SIL-20A自动进样器,SPD-M20A检测器);LC solution色谱工作站;色谱柱:Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm);FA2004万分之一电子分析天平(上海天平仪器厂),KQ-500DV超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。KWY-101型电热恒温干燥箱(武汉市武昌实验仪器厂)。

1.2 材料 于2013年10月25日采湖北省十堰市房县青峰镇17组3年生栀子的果实,经本文作者与中国植物志核对鉴定为栀子(Gardenia jasminoidesEllis),按果皮颜色分为青灰、青黄、全黄和黄红4种成熟度,分别置于60℃恒温干燥箱中充分干燥,再分离果皮和种仁作为供试样品;栀子苷对照品(中国食品药品检定研究院,批号:0749-9404,供含量测定用);甲醇、乙腈为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Gemini C18(250 mm× 4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(15∶85);检测波长:238 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:30℃。对照品与样品色谱图见图1。

A.栀子苷对照品;B.栀子样品;1.栀子苷图1 栀子苷对照品及栀子样品HPLC图谱A.geniposide reference substance;B.gardenia specimen;1. geniposideFig.1 HPLC chromatograms of geniposide reference substance and gardenia specimen

2.2 对照品溶液的制备 精密称定干燥至恒质量的栀子苷对照品2.8 mg,置5 mL量瓶中,加甲醇至刻度混匀,配成浓度为0.56 mg·mL-1对照品储备液。取对照品储备液1 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度超声混匀,即得浓度为56μg·mL-1对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取不同成熟程度充分干燥的栀子样品分别分成全果、果仁、果皮3部分,捣碎过四号筛,精密称定各样品粉末0.1 g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定质量,超声提取20 min,放冷至室温,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液10 mL于25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,超声混匀,用孔径0.45μm的微孔滤膜过滤,即得。

2.4 线性范围的考察 精密吸取“2.2”项下对照品储备液3 mL于容量瓶中,倍稀法配成浓度为28,56, 201.6,336,560μg·mL-1的对照品溶液,分别进样2μL,按上述色谱条件测定,记录色谱图。以进样量(μg)为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线。回归方程:Y栀子苷=1.59×106X-9.42×103,n=5,r= 0.999,表明栀子苷在28～560μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5 精密度实验 精密吸取上述栀子苷对照品溶液5μL,按上述色谱条件,分别进样6次,记录栀子苷峰面积,计算栀子苷峰面积的RSD=0.35%(n=6),表明仪器精密度良好。

2.6 重复性实验 取同一种成熟度的栀子全果样品6份,精密称定,按上述供试品溶液制备方法制备供试品,再按上述色谱条件进样分析,记录栀子苷峰面积,计算6份样品中栀子苷的RSD=1.67%(n=6),表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性实验 取同一供试品溶液,按上述色谱条件,每2 h进样5μL进行分析,共测6次,记录栀子苷峰面积,计算得该样品中栀子苷的RSD=1.85%(n= 6),结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.8 加样回收率实验 精密称取已知含量的全黄栀子果实的果壳粉末0.106 4 g,准确加入56μg·mL-1的对照品溶液8 mL,按上述“2.3”项供试品溶液制备方法制备供试品,再按上述色谱条件进样分析,计算栀子苷得加样平均回收率为96.37%,RSD=1.2%,结果见表1。

2.9 栀子果实不同部位栀子苷含量测定结果 取上述充分干燥的不同成熟度的栀子果实,分成全果、果皮与果仁3部分,按“2.3”项供试品溶液制备方法制备各供试样溶液,再按上述色谱条件分别进样测试,记录峰面积,以栀子苷含量计算各样品溶液中环烯醚萜类的质量分数,结果表明,青灰色果实栀子苷含量最高。见表2。

3 讨论

3.1 栀子采收的最佳成熟度 栀子果实膨大后果皮颜色要经历青灰到黄红渐变的成熟过程,果实的大小变化不大。合理采收的依据应以栀子苷含量最大化来确定最佳的成熟度[5]。本实验用的4种不同成熟度的栀子平均质量无显著差异,栀子全果与果仁不同成熟度的栀子苷含量均呈下降趋势,与朱文佩等[6]报道的栀子果实栀子苷含量随果实成熟度的提高含量逐渐降低一致。因此,药用栀子果实采收的最佳成熟度为栀子果实充分膨大后果皮颜色由青转黄前采收,作为色素原料的栀子除外。

表1 栀子苷的加样回收率实验结果Tab.1 Result of recovery test on geniposide

表2 不同成熟度栀子果实不同部位栀子苷质量分数Tab.2 Geniposide content in different parts of gardenia with different degree of maturity %

3.2 栀子的药用部位 栀子很早就有果皮与果仁分别使用的记载[7],现代还有许多地方沿袭去皮用仁的习惯。从表2可见,不同成熟度栀子全果栀子苷的含量均可达到《中华人民共和国药典》2010年版标准[1],其中果仁的含量最高,果皮含量较低,但同样含有环烯醚萜类,果皮平均重量只占全果的28%。从有效成分的含量最大化并且结合合理的利用资源考虑,《中华人民共和国药典》2010年版规定全果入药比较科学合理。

3.3 房县栀子的价值 房县素有“华中药库”之称,有规模种植药材的经验[8],笔者对房县产栀子适宜采收最佳的成熟度进行的研究,有利于提高当地产栀子的质量。从实验结果可知,合理的采收可以使房县栀子的栀子苷含量高出《中华人民共和国药典》2010年版规定的几倍,这与房县的土壤、气候、水分、矿物质的分情况适合栀子的种植有关。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:231-232.

[2] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].第71卷1册.北京:科学技术出版社,2004:332.

[3] 游伟良,平其能,孙敏捷,等.栀子苷的药理学研究新进展[J].药学进展,2012,36(4):158-162.

[4] 黄辛武,柳俊.反相高效液相色谱法测定安脑牛黄片中栀子苷的含量[J].医药导报,2009,28(1):108-109.

[5] 何国振,周妹,汤丽云,等.不同成熟期栀子果实有效成分累积的研究[J].天然产物研究与开发,2010,22(4): 678-682.

[6] 朱文佩,刘丽华,李克和,等.栀子果实成熟度对栀子苷含量积累的影响[J].中国野生植物资源,2012,31(4):23-24.

[7] 刘怡,陈磊,张留记.不同产地栀子皮和栀子仁中有效成分的含量比较[J].中药新药与临床药理,2012,23(1): 81-83.

[8] 闵怀臻,贺琴,李金科,等.绞股蓝皂苷对2型糖尿病并NAFLD大鼠肝组织TNF-αmRNA表达和血硫化氢的影响[J].湖北医药学院学报,2013,32(4):317-324.

DOI 10.3870/yydb.2014.12.024

Determ ination of the Suitable Maturity Degree and Medicinal Parts by the Contents of Geniposide in Gardenia Fruit Produced in Fangxian

ZHANG Xiao-yan1,2,DENG Xue-hua2,XIE Yong2,LU Min2,MAO Ru-xu3
(1.Laboratory of Chinese Herbal Pharmacology,Renmin Hospital,Hubei University ofMedicine,Shiyan 442000,China;2.School of Pharmacy, Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China;3.Hubei Shennong Bencao Prepared Slices,Shiyan 442000,China)

Objective To determine the contents of geniposide in different parts of the fruit ofGardenia jasminoidesEllis with differentmaturity degree produced infangxian,in order to find the optimum harvest periods and themedicinal parts.MethodsThematurity of gardenia fruit are divided into four levels according to the color from totally green to yellow and red, and then the contents of geniposide were determined by HPLC.ResultsThe contents of geniposide in all four levels of maturity reached the standard by theChinese Pharmacopoeia.The content of geniposide in fruits of caesious color is up to 13.01%.ConclusionThere is a negative correlation between thematurity and the contentof geniposide in themature fruitofGardenia jasminoidesEllis.Caesious fruit has the best maturity degree.It is reasonable to use the whole fruit as medicine according to theChinese Pharmacopoeia.

Gardenia jasminoidesEllis,fangxian;Geniposide;Content;Maturity degree

R282.71;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1631-03

2014-01-14

2014-03-05

*湖北省高等学校创新能力提升计划(鄂教科函[2012]56号)

张晓燕(1969-),女,湖北十堰人,主任药师,副教授,硕士生导师,主要研究方向:药用植物资源研究。电话: 0719-8637262,E-mail:coarff66@126.com。

谢勇(1965-),男,湖北鄂州人,副教授,硕士,主要研究方向:中药药理。电话:0719-8872192,E-mail: 1041154080@qq.com。