瑶宝克癌灵胶囊抗肿瘤作用机制研究

赵成国，秦书芝，毛晶磊，吴丽艳，肖洪彬

1吉林大学珠海学院，广东 珠海 519041；2大庆油田总医院；3黑龙江中医药大学

方 药·药理研究

瑶宝克癌灵胶囊抗肿瘤作用机制研究

赵成国1，秦书芝1，毛晶磊2，吴丽艳1，肖洪彬3△

1吉林大学珠海学院，广东 珠海 519041；2大庆油田总医院；3黑龙江中医药大学

目的：从分子生物学角度探讨瑶宝克癌灵胶囊抗肿瘤的作用机理。方法：采用双抗体夹心ELISA法检测S180荷瘤小鼠外周血白细胞介素-2（IL-2）、γ-干扰素（IFN-γ）的含量；采用免疫组化法检测凋亡相关基因突变型p53和Bcl-2基因的表达。结果：瑶宝克癌灵胶囊可明显增加小鼠外周血IL-2、IFN-γ的含量，可抑制突变型基因p53和Bcl-2基因的表达。结论：瑶宝克癌灵胶囊抗肿瘤的作用机制可能与增强荷瘤小鼠免疫功能，抑制突变型基因p53和Bcl-2基因的表达有关。

瑶宝克癌灵胶囊；IL-2；IFN-γ；p53；Bcl-2

瑶宝克癌灵胶囊由救必应、半边莲、夏枯草、了哥王等1 9味药物组成，其中瑶药6味，临床上治疗乳腺癌、乳腺纤维瘤、白血病、骨肉瘤及淋巴肉瘤效果明显，尤其对乳腺肿瘤具有独特的疗效。本研究以瑶宝克癌灵胶囊为研究对象，从分子生物学水平探讨瑶宝克癌灵胶囊的作用机制，为开发更为有效的治疗肿瘤的中药新药和民族药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 动物与瘤株 昆明种小白鼠（黑龙江中医药大学动物中心提供，合格证：黑动字第P00101006号；发证单位：黑龙江省试验动物管理委员会）；小鼠肉瘤S180（黑龙江省肿瘤医院研究所提供，每7～10天腹腔传代一次）。

1.2 药品与试剂 瑶宝克癌灵胶囊（大庆德昆瑶医提供）；环磷酰胺（CTX，上海华联制药有限公司，批号：050205）；小鼠TNF-α、小鼠IFN-γ以及小鼠IL-2定量ELISA检测试剂盒均由上海森雄科技实业有限公司提供；p53、Bcl-2蛋白免疫组化染色试剂盒均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。

1.3 仪器 2010安图酶标仪（郑州安图生物技术有限公司提供）；RM2245组织切片机（LEICA德国提供）；超净工作台（苏州净化设备厂提供）；KDC-4 0低速离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司提供）；DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司提供）；金怡牌H H-S恒温水浴锅（江苏医疗仪器厂提供）。

1.4 方法

1.4.1 分组及给药 小鼠50只右腋皮下接种S180瘤细胞悬液（l×107瘤细胞/mL）0.1mL/只，造模24小时后，荷瘤动物按体质量随机分为5组，每组10只，分别为模型组、瑶宝克癌灵胶囊高剂量组（25.0g/kg）、瑶宝克癌灵胶囊中剂量组（12.5g/kg）、瑶宝克癌灵胶囊低剂量组（6.25/kg）、阳性对照组［CTX组，环磷酰胺30mg/kg（体质量）］。各组均灌胃给药，给药体积为0.02mL/g，连续给药14天。

1.4.2 标本采集 停药后次日摘取小鼠眼球取血，静置l0分钟，放入台式低速离心机，2000rpm/min离心l0分钟，分离血清，迅速放入冰箱-20℃保存，待测血清IFN-γ、IL-2［1］；脱颈椎处死小鼠，剥离瘤组织，10%甲醛固定，采用免疫组化法检测p53、Bcl-2蛋白。免疫组化判断标准：免疫组化阳性着色为棕黄色，p53蛋白主要位于细胞核，检测结果作半定量处理，无着色计0分、浅黄色计1分、棕黄色计2分、棕褐色计3分。按阳性细胞数占整个肿瘤细胞的百分比例评分：取10个高倍视野，每个高倍视野计数100个肿瘤细胞中的阳性细胞数，计算其平均数，≤25%计1分，26%～50%计2分，51%～7 5%计3分，＞75%计4分。以上2项相加，≤2分为（-），3分为弱阳性（+），4分为中度阳性（++），≥5分为强阳性（+++）。

1.5 统计学方法 数据采用SPSS10.0统计学软件分析，计量资料以）表示，采用t检验，等级资料采用R i d i t检验，检验水准为α=0.0 5。

2 结果

2.1 瑶宝克癌灵胶囊对荷瘤小鼠血清IFN-γ含量的影响 瑶宝克癌灵胶囊高、中、低剂量组及环磷酰胺组同模型组比较，小鼠血清γ-IFN水平均有不同程度的提高，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 瑶宝克癌灵胶囊对S180荷瘤小鼠血清IFN-γ含量的影响

2.2 瑶宝克癌灵胶囊对荷瘤小鼠血清IL-2含量的影响 瑶宝克癌灵胶囊高、中、低剂量组同模型组比较，小鼠血清I L-2水平均有不同程度的提高，差异有统计学意义（P＜0.0 1），环磷酰胺组同模型组比较无明显差异（P＞0.0 5），见表2。

表2 瑶宝克癌灵胶囊对S180荷瘤小鼠血清IL-2含量的影响

2.3 瑶宝克癌灵胶囊对荷瘤小鼠p53、Bcl-2蛋白表达水平的影响 各组突变型p53均有不同程度的表达，其中模型组突变p53蛋白高表达，各给药组也有不同程度的表达，但较模型组表达有所减弱，其中高剂量组同模型组比较有显著性差异（P＜0.0 5）；环磷酰胺组同模型组比较，表达也减弱，差异具有显著性（P＜0.05）；各组Bcl-2均有不同程度的表达，其中模型组Bcl-2高表达，各给药组也有不同程度的表达，但较模型组表达有所减弱，高剂量组同模型组比较具有显著性差异（P＜0.05）；环磷酰胺组同模型组比较，表达也减弱，差异有显著性（P＜0.05），见表3—4。

表3 瑶宝克癌灵胶囊对S180荷瘤小鼠p53蛋白表达的影响

表4 瑶宝克癌灵胶囊对S180荷瘤小鼠Bcl-2蛋白表达的影响

3 结论

IL-2具有促进N K细胞增殖与活化，提高M ф对肿瘤细胞的杀伤作用等功能［2］；IFN-γ可抑制肿瘤细胞DNA合成，减缓细胞增殖各时相的进展和细胞分裂速度［3］；p53基因是一种与细胞凋亡相关的抑癌基因，如果p53基因突变，就会丧失抑制细胞凋亡的作用，从而导致肿瘤细胞的过度增殖［4］；Bcl-2属原癌基因，是一种广义的抗凋亡基因，可促进癌细胞增殖及增殖细胞的存活，导致各种肿瘤发生［5］。

研究结果表明瑶宝克癌灵胶囊可不同程度地提高IFN-γ、IL-2水平，抑制突变型基因p53和Bcl-2的表达。瑶宝克癌灵胶囊抗肿瘤的作用机制可能与调节机体细胞因子水平，增强荷瘤小鼠免疫功能，抑制突变型基因p53和Bcl-2基因的表达有关，但其中更深层的机制有待于进一步的研究。

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［2］陈慰峰.医学免疫学［M］.3版.北京：人民卫生出版社，2001：46-52.

［3］任伟，周国平.干扰素调节因子的抑制肿瘤作用［J］.生命的化学，2007（6）：541-544.

［4］Levi ne，A.J.Mom and，J.Fi nl ay，C.A.The p53 tum our suppressor gene［J］.N at ure，1991，351：453-456.

［5］田辉，高蔚.肺癌的细胞凋亡相关基因研究进展［J］.肺癌杂志，1999，2（2）：129-130.

Investigation on Anti-tumor Mechanism of YaoBao KeAiLing Capsules

ZHAO Chengguo1，QIN Shuzhi1，MAO Jinglei2，WU Liyan1，XIAO Hongbin3△
1 Zhuhai College of Jilin University，Zhuhai 519041，China；2 Daqing Oilfield General Hospital；3 Heilongjiang University of Chinese Medicine

Objective：To explore anti-tumor mechanism of YaoBao KeAiLing capsules with molecular biology.Methods：The contents of interleukin-2（IL-2）and interferon-γ（IFN-γ）were detected with double antibody sandwich ELISA method；the expressions of Bcl-2 gene and p53 were measured by immunohistochemical method.Results：YaoBao KeAiLing capsules could increase the contents of IL-2 and IFN-γ in peripheral blood of mice，inhibit the expressions of p53 and Bcl-2.Conclusion：Anti-tumor mechanism of YaoBao KeAiLing capsules might be related to increasing the immunity of the mice，inhibiting the expressions of p53 and Bcl-2.

YaoBao KeAiLing capsules；IL-2；IFN-γ；p53；Bcl-2

R273.5

A

1004-6852（2014）05-0007-03

2013-10-10

赵成国（1978—），男，硕士研究生，讲师。研究方向：中药药理学研究。

△通讯作者：肖洪彬（1957—），男，博士后合作导师，博士研究生导师，教授。研究方向：方剂配伍规律及方剂疗效客观化的研究。