IL-17+CD4+T(Th17)细胞和IL-17+CD8+T(Tc17)细胞在肺癌患者外周血中的表达水平比较

谢志翔

(达州市中西医结合医院检验科，四川 达州 635000)

·论著·

IL-17+CD4+T(Th17)细胞和IL-17+CD8+T(Tc17)细胞在肺癌患者外周血中的表达水平比较

谢志翔

(达州市中西医结合医院检验科，四川 达州 635000)

目的对比白细胞介素(IL)-17+CD4+T(Th17)细胞和IL-17+CD8+T(Tc17)细胞在肺癌患者外周血中的表达水平。方法选择2010年3月至2013年3月我院接诊的70例肺癌患者进行研究(肺癌组)，同时选择40例健康体检者作为对照组。采用流式细胞术对两组的Th17细胞和Tcl7细胞表达情况进行检测并分析。结果检测发现，腺癌、鳞癌、小细胞癌三种病理类型患者的Th17细胞和Tcl7细胞表达水平差异无统计学意义(F=1.762 1，P=0.179 8；F=0.161 3，P=0.853 0)。表明Th17细胞和Tc17细胞表达水平与肺癌患者的病理类型无关。不同TNM分期的肺癌患者的Th17细胞和Tc17细胞表达水平差异有统计学意义(F=5.783 1，P=0.004 8；F=3.751 4，P=0.028 7)，且随着患者TNM分期的升高，Th17细胞和Tc17细胞表达水平也逐渐增高(P＜0.05)。结论Th17细胞和Tc17细胞在不同TNM分期肺癌患者的外周血中的表达水平不同，Th17细胞和Tc17细胞在肺癌患者中表达水平明显升高。

肺癌；Th17细胞；Tc17细胞

临床研究显示外周血的免疫状况与肺癌的发生有着密切的联系[1-2]，而T淋巴细胞是肿瘤的微环境的主要效应细胞[3]，最新研究发现调节性T细胞(Treg细胞)和白细胞介素(IL)-17+CD4+T(Th17)细胞在传统CD4+T细胞的基础上为肿瘤的免疫机制提出了新的观点[4-5]。本文旨在对比分析Th17细胞和IL-17+CD8+T(Tc17)细胞在肺癌患者外周血中的表达水平，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2010年3月至2013年3月我院接诊的70例肺癌患者进行研究，同时选择40例健康体检者作为对照组。入选标准：肺癌组患者均经肺部组织病理活检及各项影像学资料检查确诊为肺癌。两组均无糖尿病、高血压、肾脏疾病等临床基础疾病，排除合并有肺部及全身重症疾病的患者。肺癌组70例中男性45例，女性25例，年龄41～88岁，平均(56.4±2.3)岁；其中病理诊断腺癌31例，鳞癌22例，小细胞癌17例；TNM分期情况：Ⅰ～ⅢA期19例，ⅢB期18例，Ⅳ期33例。健康组40例，其中男性23例，女性17例，年龄43～86岁，平均(55.6±2.5)岁。两组的年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法具体的操作方法是流式细胞术检测。步骤为：(1)于清晨，患者在空腹状态下收集外周静脉血于真空的采血管中。(2)将收集到的外周血进行分离，得到外周血中的单个核细胞200 μl置于细胞培养板内。(3)在平板的细胞培养板上，加入新生小牛血清RPMI 1640培养液、50 ng/ml的PMA、10 μg/ml的BFA培养，并加以混匀。(4)在平板内加入固定剂，并于室温内培养15 min后加入磷酸盐缓冲液(PBS)进行洗涤离心，离心半径为14.6 cm，1 500 r/min离心5 min，将上清液去除。(5)采用10 μl CD3PreCP和10 μl CD8-APC进行混匀，并在避光的室温内进行培养20 min。(6)再次采用PBS进行洗涤离心，离心半径为14.6 cm，1 500 r/min离心5 min，将上清液去除。在其中加入10 μl的PE-IL-17单抗，在室温内培养20 min。再次进行重复的离心。(7)对Th17细胞和Tc17细胞水平进行分析。

1.3 统计学方法应用SPSS18.0软件进行数据分析，计量数据采用均数±标准差(±s)表示，其组间比较采用t检验，多组计量资料比较采用F检验，计数资料的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组的Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较通过流式细胞术检测发现，肺癌组患者的Th17细胞表达的比例明显高于健康组，两组比较差异有统计学意义(t=3.265 4，P=0.001 5)，肺癌组患者的Tc17细胞表达比例明显高于健康组，两组比较差异有统计学意义(t=3.763 1，P=0.000 3)，见表1。

表1 两组Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较(±s)

表1 两组Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较(±s)

2.2 不同病理类型肺癌患者Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较检测发现，腺癌、鳞癌、小细胞癌三种病理类型患者的Th17细胞和Tc17细胞表达水平差异无统计学意义(F=1.762 1，P=0.179 8；F=0.161 3，P=0.853 0)。表明Th17细胞和Tc17细胞表达水平与肺癌患者的病理类型无关，见表2。

表2 不同病理类型肺癌患者Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较(±s，%)

表2 不同病理类型肺癌患者Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较(±s，%)

2.3 不同TNM分期肺癌患者的Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较检测发现，不同TNM分期的肺癌患者的Th17细胞和Tc17细胞表达水平差异有统计学意义(F=5.783 1，P=0.004 8；F=3.751 4，P= 0.028 7)，且随着患者TNM分期的升高，Th17细胞和Tc17细胞表达水平也逐渐增高(P＜0.05)，见表3。

表3 不同TNM分期肺癌患者Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较(±s，%)

表3 不同TNM分期肺癌患者Th17细胞和Tc17细胞表达水平比较(±s，%)

3 讨论

肺癌是临床中呼吸科常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率增长较快，是威胁人群健康和生命最大的恶性肿瘤之一[6]。肺癌在病理分型上分为腺癌、鳞癌、小细胞癌三种类型，TNM分期分为I～ⅢA期、ⅢB期、Ⅳ期[7]。多项研究发现恶性肿瘤的患者均存在着免疫功能的紊乱，但是肿瘤细胞也存在逃离免疫系统的攻击[8-9]。在肿瘤免疫中，以T淋巴细胞为主的细胞免疫为主导，地位十分重要。目前，国内外对于调节性T细胞(Treg细胞)和Th17细胞的采用成为抗肿瘤治疗的一个热点。尤其是对于Th17细胞的深入研究发现白细胞介素(IL)-17可能在肿瘤免疫中发挥着重要的作用，可帮助肿瘤细胞实现免疫逃逸和免疫耐受，从而不被体内的免疫系统消除[10]。CD4+T细胞是细胞免疫中的一种新的细胞类型，而Th17细胞以分泌IL-17为主。因此，多项临床研究发现肺癌患者外周血中会出现Th17细胞的明显升高，从而可用于早期肺癌患者的诊断和检查。与此同时，有学者研究发现CD8+T细胞也可分泌IL-17，且在产生的过程中与Thl7细胞有着许多相似的地方。因此，多位学者探讨发现肺癌患者的Th17细胞和Tc17细胞表达水平存在正相关关系[11]。

国内外的最新研究也发现CD8+T细胞是抗肿瘤免疫的关键淋巴细胞，可通过识别肿瘤细胞表面的MHC-I抗原肽，从而激活分化成为细胞毒性的T细胞，而且，在对不同分期肺癌患者的体内免疫因子的检测中得到了相同的结果[12]。综合多项研究的结果，均显示肺癌患者免疫系统中的成分会发生明显的改变，患者的Th17、Tc17细胞表达会明显升高，且两种细胞数目上存在正相关的关系。对于不同病理类型，不同分期的肺癌患者，均存在着Th17细胞和Tc17细胞表达情况的差异，可用于对不同分期的肺癌患者的诊断和鉴别[13]。

本研究中选择我院接诊的70例肺癌患者和40例健康体检者进行研究。采用流式细胞术对两组的Th17细胞和Tc17细胞表达情况进行检测分析。结果显示，肺癌患者Th17、Tc17细胞表达的比例明显升高。腺癌、鳞癌、小细胞癌三种病理类型的肺癌患者Th17细胞和Tc17细胞表达情况差异无统计学意义，表明Th17细胞和Tc17细胞表达水平与患者的肺癌病理类型无关。不同分期的肺癌患者Th17细胞和Tc17细胞表达水平差异有统计学意义，且随着患者TNM分期的逐渐升高，Th17细胞和Tc17细胞表达水平均呈现逐渐的升高。

综上所述，Th17细胞和Tc17细胞在不同TNM分期肺癌患者的外周血中的表达水平不同，Th17细胞和Tc17细胞在肺癌患者中表达水平明显升高。

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Comparison of the expression levels of IL-17+CD4+T(Th17)cells and IL-17+CD8+T(Tc17)cells in the peripheral blood of patients with lung cancer.

XIE Zhi-xiang.Department of Laboratory,Dazhou City Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine,Dazhou 635000,Sichuan,CHINA.

ObjectiveTo study the expression levels of Interleukin IL-17+CD4+T(Th17)cells and IL-17+CD8+T(Tc17)cells in the peripheral blood of patients with lung cancer.MethodsSeventy cases of lung cancer from March 2010 to March 2013 in our hospital were studied.And 40 healthy volunteers were selected as the control group.Flow cytometry was used in both groups Th17 cells and Tc17 cell expression were detected and analyzed.ResultsThe difference of expression levels of Th17 and Tc17 cells were not found between adenocarcinoma,squamous cell carcinoma and small cell carcinoma(F=1.762 1,P=0.179 8;F=0.161 3,P=0.853 0).This indicates that the expression levels of Th17 and Tc17 cells is independent of pathological types of lung cancer patients.Statistical significance was found between the expression levels of Th17 and Tc17 cells in different TNM stages of lung cancer(F=5.783 1,P=0.004 8;F=3.751 4,P=0.028 7),and the expression of Th17 and Tc17 cells in patients with advanced disease(stageⅢandⅣ)were significantly higher than in those with stageⅠandⅡ(P＜0.05).ConclusionWe found that the expression levels of Th17 and Tc17 cells in the peripheral blood were different in different TNM stages of lung cancer,and Th17 cells and Tc17 cells in patients with lung cancer were increase significantly.

Lung cancer;Thl7 cells;Tcl7 Cell

R734.2

A

1003—6350(2014)13—1953—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0757

2013-10-26)

谢志翔。E-mail：xiang54126@163.com