浅析血脂检验的现状及标本的采集与处理

严君洁

血脂检验对于临床高脂血症和异常脂蛋白血症的诊断及动脉粥样硬化﹙AS﹚性心血管﹙如冠心病﹚的危险评估和防治具有重要意义，并已经渗透应用于其它诸多临床相关专业疾病的研究。我国血脂、脂蛋白及其与AS关系的研究虽然起步较晚，但改革开放的20多年以来，在血脂的基础与临床研究等方面发展迅速。血脂检验及其临床应用已越来越受到临床各学科的重视。本文旨在探讨血脂检验的方法学，试剂的选择原则与血脂测定的技术指标，分析前的变异对血脂检验结果的影响进行浅析。

1 血脂检验的方法学

临床血脂检验主要包括血清总胆固醇﹙TC﹚、甘油三酯﹙TG﹚、高密度脂蛋白胆固醇﹙HDL-C﹚、低密度脂蛋白胆固醇﹙LDL-C﹚、载脂蛋白A1、载脂蛋白B、脂蛋白﹙a﹚测定。

1.1血清TC测定 血清TC测定一般可分为化学法和酶法两大类。目前国内建议酶法如胆固醇氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法作为临床实验室测定TC的常规方法。

1.2血清TG测定 二氯甲烷-硅酸-变色酸法是美国疾病预防与疾控中心﹙CDC﹚测定TG采用的参考方法。建议酶法〔如甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶-4氨基安替比林和酚法〕作为临床实验室血清TG的常规方法。

1.3血清 HDL-C测定 超速离心结合ALBK法为HDL-C测定的参考方法。建议匀相测定法作为临床实验室测定血清HDL-C的常规方法。

1.4血清HDL-C测定 超速离心结合ALBK法为LDL-C测定的参考方法。建议匀相测定法作为临床实验室测定血清LDL-C的常规方法。

1.5血清apoA1和apoB测定 目前尚无公认的血清apoA1和apoB测定的参考方法。建议免疫浊度法作为临床实验室测定血清的常规方法。

1.6血清Lp﹙a﹚测定 目前尚无公认的血清Lp﹙a﹚测定的参考方法。建议免疫浊度法作为临床实验室测定血清Lp﹙a﹚的常规方法。

2 血脂检验试剂的选择原则与测定的技术指标

2.1不精密度与不准确度 各实验室进行血脂检验并非要求统一的测定方法，而是要求对同一批标本血脂测定值取得基本一致，卫生部检验中心及各省检验中心均要求各县级医疗单位实验室参加其组织的室间质评活动。要求测定值在可允许的"不精密度"﹙用变异系数CV表示﹚及不准确度﹙用偏差表示﹚范围内。对于TC、TG、HDC-C和LDCL-C 4项，建议不精密度应分别不大于3%、5%、4%、4%，不准确度应尽量分别不大于±3%、±5%。±5%、±4%。对于apoA1、apoB和Lp﹙a﹚3项，建议不精密度应分别不大于3%、3%和4%，不准确度应分别不大于±5%、±5%和±10%。

2.2灵敏度 酶法测定血清TC显色剂用酚时，TC5.17mmoL∕L时的吸光度约0.30～0.35，故A500nm=0.005时的TC浓度约0.08nmol/L.酶法测定TG灵敏度为2mmol/LTG的吸光度A500nm≧0.2.匀相测定法测定HDL-C、LDL-C时，最小检测水平至少为0.01mmol/L。免疫浊度法测定血清apoA1、apoB检测下限至少为0.5g/L，Lp﹙a﹚至少为5mg/L。

2.3可检测上线 酶法测定血清TC血清与酶试剂用量之比为1：100时，测定上线为13mmol/L。酶法测定TG线性至少应达11.3mmol/L。匀相测定法测定HDL-C、LDL-C时线性至少分别应达2.59mm/L和7.77mmol/L。免疫浊度法测定血清apoA1、apoB线性至少不低于2.0g/L，Lp﹙a﹚至少应达800mg/L。

2.4干扰因素 酶法测定TC时，血红蛋白高于2g/L会引起正干扰，胆红素﹥0.1g/L时有明显负干扰。酶法测定TG干扰因素与胆固醇测定类同。胆红素﹥100umol/L时出现负干扰。血红蛋白的干扰是复杂的。它本身的红色会引起正干扰，溶血后，红细胞中的磷酸酶可水解磷酸甘油产生负干扰。当Hb﹤1g/L时反映为负干扰，Hb﹥1g/L时反映出正干扰，但Hb≤2g/L时干扰不显著。明显溶血标本不宜作TG测定。TG﹤5.65mmol/L、胆红素﹤513umol/L、Hb﹤5g/L时，对匀相测定法测定HDL-C、LDL-C，免疫浊度法测定血清apoA1、apoB和Lp﹙a﹚测定结果基本无干扰。

2.5试剂稳定性 干粉试剂未开瓶2～8℃应至少稳定1年。复溶后的胆固醇和TG酶试剂在2～8℃应至少稳定两天。在此期间出现肉眼可辨的粉红色建议不要使用。液体试剂未开封的试剂盒在2～8℃应至少稳定6个月，开封后应至少可保存1个月。

2.6反应速度 酶法测定血清TC反應到达终点37℃不应超过5min。酶法测定TG37℃不应超过10min.匀相测定法测定HDL-C和LDL-C反应到达终点时间37℃不应超过10min。免疫浊度法测定血清apoA1、apoB和Lp﹙a﹚可根据自动分析仪反应曲线确定读取终点时间，一般以8～10min为宜。

3 样本的采集与处理

3.1受检者的准备 除TC测定不一定用空腹血外，测定TG、Lp与apoA1、apoB时受检者﹙体检对象或患者﹚应在禁食﹙可少量饮水﹚至少12h后抽血。24h内不饮酒，以免影响TG水平。对于体检对象抽血前应有两周时间保持平时的饮食习惯，近期内体重稳定，无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂指标都会增高，应在产后终止哺乳后3个月检查才能反映其基本血脂水平。

3.2静脉采血 除非是卧床的患者，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，影响血脂水平。例如站立5min可使血脂浓度提高5%，15min提高16%，故在抽血前至少应静坐5min。静脉穿刺过程止血带使用不应超过1min。静止阻滞5min可使TC增高10%～15%。

3.3抗凝剂 我国生化实验室多用血清作血脂分析。如用血浆，多主张用EDTA.2Na抗凝剂﹙1mg/ml血﹚，EDTA抗凝血浆中的TC和TG水平比血清约低3%。EDTA浓度越高血浆中TC和TG偏低越明显。

3.4标本处理 血标本应尽快送往检验科，室温下放置30～45min后离心，放置时间不得超过3h。血清必须吸出，转移至有盖小试管中﹙或有封口膜防止水分挥发﹚，如不能当天测定，可暂存4℃冰箱，至少可稳定4d。如需长期保存，用作TC测定者-20℃已足够，用作TG、Lp、apo测定者标本最好保存在-70℃，不要反复冰冻与融化。编辑/刘小燕