复合螺旋藻多糖对小鼠抗辐射损伤的作用机制研究

刘永举　唐超　葛蔚　王清吉

摘要[目的]研究复合螺旋藻多糖对X射线辐射损伤小鼠的保护作用。[方法]将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶提取物（GBE）按1∶1比例配制不同浓度的复合螺旋藻多糖。昆明种小白鼠随机分为5组（空白对照组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组），空白对照组不做处理，对照组灌服生理盐水，高、中、低剂量组灌服相应药物，连续14 d，对小鼠进行X射线全身照射，照射后继续灌服药物7 d。[结果]高、中、低剂量组外周血白细胞数与对照组差异性均显著（P<0.01），并可显著提高小鼠脾脏和胸腺指数（P<0.01），CD4+/CD8+比例上升（P<0.01），细胞恢复明显加快，高剂量组CD4+/CD8+比例更接近空白对照组。[结论]复合螺旋藻多糖对X射线辐射损伤小鼠的免疫功能有一定的保护作用。

关键词复合螺旋藻多糖；X射线；白细胞；脾指数；胸腺指数；CD4+/CD8+

中图分类号S986.1文献标识码A文章编号0517-6611（2014）22-07305-02

随着科学技术的进步和人们生活的现代化，人们越来越多地接触射线如电脑、手机、电视机、微波炉、空调以及医疗设备等，辐射性损害日益受到重视。因此，近年来辐射生物学、生物耐辐射机理及抗辐射药物的开发利用等研究引起了人们的极大关注[1-2]。多糖类物质是一种天然的非特异性免疫增强剂，通过被作用于网状内皮系统、巨噬细胞、淋巴细胞、白细胞参与调节蛋白质的合成、抗体的生成、补体的生成以及对各种细胞因子表达功能，增强机体免疫力[3]。螺旋藻具有超强的抗电离辐射能力，某些藻株对60Coγ射线的致死剂量高于6.4 kGy [4]，同时螺旋藻多糖能明显提高蚕豆和小鼠等其他生物抵抗电离辐射的生理活性，并且已开发出抗辐射医药保健品[1，5-6]。研究表明，螺旋藻多糖和银杏叶提取物单独使用具有较好的抗辐射作用[7-9] 。笔者将螺旋藻多糖和银杏叶提取物按1∶1复合，观察不同剂量复合物的抗辐射作用，为进一步阐明复合螺旋藻多糖的抗辐射机理、开发高效能的天然抗辐射新药物等提供依据。

1材料与方法

1.1螺旋藻多糖与银杏叶提取物供试螺旋藻购于中国科学院南海海洋研究所三亚站，为浅绿色粉末。采用三氯乙酸除蛋白法提取螺旋藻多糖（PSP），多糖含量93%以上；银杏叶提取物（GBE）为实验室自提，总黄酮含量≥24%，萜内酯含量≥6%。

1.2动物及肿瘤细胞供试昆明种小白鼠购于青岛市药检所，体重20～24 g，雌雄各半。

1.3试剂抗小鼠单克隆抗体FITCCD4+，FITCCD8+（欣博盛生物科技有限公司），红细胞裂解液（Solarbio公司）。

1.4小鼠饲养管理小鼠自由采食，自由饮水（凉开水），自然光照，定期更换垫料。

1.5照射条件X射线一次性全身均匀照射，源皮距100 cm，剂量率为250 pps，照射量4 Gy。

1.6试验设计药品均以螺旋藻多糖与银杏叶提取物1∶1复合。将小鼠随机分为5组：空白对照组（不处理），对照组（生理盐水），高剂量组（300 mg/（kg·d）），中剂量组（200 mg/（kg·d）），低剂量组（100 mg/（kg·d））。除空白对照组外，用灌胃器给各组小鼠灌服生理盐水及相应药物，一日一次，连续灌服14 d，对小鼠进行X射线全身照射，照射后继续灌服药物。

1.7指标测定与方法

1.7.1外周血白细胞计数。小鼠于照射前和照射后1、7 d，眼底采血20 μl，加入WBC（白细胞）稀释液380 μl，混匀，加入血球计数板中，显微镜下进行白细胞计数。

1.7.2免疫器官指数的测定。在小鼠辐射7 d后，眼眶放血处死小鼠，称体重，解剖后取胸腺和脾脏，并且称重，计算各组小鼠的胸腺指数、脾指数。

1.7.3CD4+和CD8+含量的测定。在小鼠辐射7 d后，各取抗凝血100 μl，分别加入2 ml红细胞裂解液，室温15 min，离心，弃上清后加入1 ml PBS，混匀，离心，再弃上清后加100 μl PBS重悬，再各加相应抗体混匀，避光孵育15 min，加入400 μl的PBS，离心，弃上清，加入浓度1%甲醛PBS 500 μl，固定30 min，过200目筛，上流式细胞仪检测。

1.8统计学分析试验数据用x±s表示。采用SPSS17.0统计软件进行数据处理，用LSD分析法来比较各指标组间差异，P<0.01为有统计学意义。

2结果与分析

2.1复合螺旋藻多糖对辐射损伤小鼠外周白细胞数的影响由表1可知，辐射前，空白对照组与对照组白细胞数差异不显著（P>0.01），复合组白细胞数与对照组和空白对照组差异显著（P<0.01），辐射后对照组与复合组白细胞数都下降，与空白对照组差异显著（P<0.01），但复合组优于对照组，且复合组中的高剂量组白细胞数更接近于空白对照组水平。这说明复合螺旋藻多糖对辐射损伤小鼠恢复骨髓造血功能有明显的促进作用。