青海不同产区大黄的HPLC指纹图谱的对比研究

摘要[目的]建立青海不同地区大黄的HPLC指纹图谱。[方法]采用HPLC法测定青海地区唐古特大黄和掌叶大黄的HPLC指纹图谱，并对其进行相似度比较。[结果]青海不同采集地唐古特大黄和掌叶大黄的平均相似度都在90%以上，说明大黄指纹图谱具有比较好的稳定性和重复性，它们之间既有较好的相关性，又有区别。[结论]采用HPLC法可以鉴别青海的不同大黄，方法简便，图谱重复性好。

关键词青海；唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）；掌叶大黄（Rheum palmatum L.）；HPLC；指纹图谱；相似度

中图分类号S188文献标识码A文章编号0517-6611（2014）12-03477-02

作者简介王宁芳（1964- ），女，陕西华县人，教授，从事有机合成及分析研究。

大黄系蓼科多年生高大草本植物，又名火参、金木、破门、绵纹。藏语叫“君木扎”。青海大黄生长于海拔2 000～3 500 m的高寒地带，在高山灌丛和山坡草地常见。大黄（RADIX ET RHIZOMA RHEI ）是一味十分重要的中药，同时也是藏医、蒙医常用的良药。其有效成分主要是蒽醌类衍生物，如大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚等，具有泻热通肠、凉血解毒和逐淤通经等功能[1]。笔者采用高效液相色谱法测定青海不同产地大黄的指纹图谱，并对其进行相似度比较，以期为不同大黄的鉴别和质量评价提供参考依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1研究对象。不同产地的唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）和掌叶大黄（Rheum palmatum L.），见表1～2。

1.1.2主要仪器。美国Waters2695 高效液相色谱仪，购自美国Waters公司；HH26 数显恒温水浴锅、二极管阵列检测器和电子天平，均购自常州国华电器有限公司。

1.1.3主要试剂。无水甲醇为色谱纯，购自山东禹王公司；冰醋酸为分析纯，购自北京化工厂；重蒸去离子水，实验室自制。

1.2方法

1.2.1色谱分析条件。Inertsil ODS3分析柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），浓度1%HAcH2O与浓度1%HAcCH3CN梯度洗脱；流速为1 ml/min；柱温为30 ℃；检测波长为280 nm；参比波长为380 nm。

1.2.2大黄待测液的制备[2]。将唐古特大黄粉粹，粉末过20目筛，精密称量0.500 g分别加40 ml无水甲醇，水浴加热回流1 h，过滤；残渣中加40 ml無水甲醇，继续水浴加热回流1 h，过滤，合并2次滤液。在蒸发皿中，水浴蒸发溶剂至干，残渣中加无水甲醇溶解并定容至25 ml，摇匀，通过孔径为045 μm 、的微孔滤膜过滤，所得滤液为唐古特大黄待检测液。同法，可得掌叶大黄待检测液。

1.2.3样品的测定。取供试品溶液适量，在“1.2.1”色谱条件下进样进行分析，记录色谱图。

2结果与分析

2.1唐古特大黄的HPLC指纹图谱图1表明，唐古特大黄药材指纹图谱具有较好的稳定性和重现性，5批唐古特大黄药材样品指纹图谱的特征性和专属性很强，共有峰稳定性很良好，较全面地反映唐古特大黄的化学信息，可作为唐古特大黄药材的专属性指纹图谱[3]，为青海地区不同海拔唐古特大黄药材品质提供有效、稳定的质量评估依据。

图1唐古特大黄的指纹图谱2.2掌叶大黄的HPLC指纹图谱从指纹图谱的峰差异评价及整体性评价可以看出，各地掌叶大黄之间相似度较高，它们之间既有较好的相关性，又有区别（图2）。

图2掌叶大黄指纹图谱特征峰2.3大黄样品相似度比较由表3可知，不同产地、不同采集时间的样品的指纹图谱的相似度都在90 %以上，说明大黄指纹图谱具有比较好的稳定性和重复性；采用AFLP分析唐古特大黄掌叶大黄间的亲缘关系，发现不同种大黄和不同来源的大黄样品间除了具有共有带外，还有一些特异带，说明种间甚至不同来源的样品间都有一定程度的特异性[4]。

2.4唐古特大黄、掌叶大黄样品与大黄对照药材之间的相似度比较由表3可知，青海不同采集地唐古特大黄和掌叶大黄的平均相似度都在90%以上，说明大黄指纹图谱具有比较好的稳定性和重复性，它们之间既有较好的相关性，又有区别。

由于陆生植物在生长过程中，一方面从大气中吸收所需物质，另一方面也必须从土壤中吸收矿物元素，由于土壤中所含有的元素成分的差异以及植物本身对元素吸收选择力的不同，植物对矿质养分的吸收具有选择性、累积性、基因型差异[ 5]，使得青海不同种大黄中各种矿物质元素含量具有明显的差异性[6]；青海主要生长于海拔2 000～4 200 m的林缘、林下、沟谷灌丛及草地，大黄的生长因海拔增高、紫外线强烈、昼夜温差大而生长缓慢，但主要成分的积累相对增高而质量偏好；相反，低海拔地区因环境优异，生长快，主要成分积累都相对偏低而质量偏差[7]。

3讨论

从大黄样品的高效液相色谱指纹图谱中可以看到，不同产地、不同采集时间的样品的指纹图谱的相似度都在90%以上，这说明大黄指纹图谱具有比较好的稳定性和重复性；从指纹图谱的峰差异评价及整体性评价可以看出，各地样品之间相似度较高，2种大黄样品之间既有较好的相关性，又有区别。采用HPLC法测定青海不同产地的不同大黄，方法简便，图谱重复性好，为青海大黄药材质量控制提供参考。

参考文献

[1] 曹纬国，刘志勤，绍斌，等.青海省道地药材唐古特大黄中4 种蒽醌衍生物的含量测定[J].西北植物学报，2004，24（11），2140-2142.

[2] 陈斌 ，蔡宝昌，潘扬，等.不同产地掌叶大黄HPLC指纹图谱的比较[J].中草药，2003，34（5）：457-460.

[3] 李锦萍 ，陈桂琛 ，纪兰菊，等.青海地区唐古特大黄药材HPLC 指纹图谱研究[J].中草药，2006，37（5）：762-765.