‘紫泉’萱草的组培快繁技术研究

李丹 吴海红 邢桂梅等

摘要[目的] 建立一套完整的‘紫泉萱草组织培养快繁技术体系。[方法]选取‘紫泉萱草的花托及幼嫩的茎段为外植体，旨在建立‘紫泉萱草离体培养的有效再生体系。[结果]适合花托愈伤组织产生的培养基是MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L，适合茎段愈伤组织产生的培养基是MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。诱导不定芽分化与增殖的最佳培养基为MS+6BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.4 mg/L。[结论]为‘紫泉萱草的大规模生产提供基础数据。

关键词紫泉萱草；组织培养；快速繁殖

中图分类号S188文献标识码A文章编号0517-6611（2014）23-07723-03

作者简介李丹（1984- ），女，辽宁扶顺人，助理研究员，从事花卉组织培养方面的研究。

收稿日期20140710萱草（Hemerocallis）又称忘忧草、金针菜、黄花菜等，属百合科萱草属多年生草本宿根花卉。萱草姿态优美，品种繁多，生长强健，适应性强，是庭园、花坛及街头绿化的理想花卉，同时，其花可食用，根可入药，已成为现代人们生活中不可缺少的重要花卉。萱草基因高度杂合，种子繁殖难以保持母本的优良性状，采用分株的方式进行繁殖时，繁殖系数较低，难以实现规模化的生产，无法达到萱草商品化生产需求[1]。目前，市场需求日益增加，利用组织培养方法进行萱草种苗的繁育，既可保持优良性状又可在短时间内获得大量种苗，是实现萱草产业化快速发展的有效途径。

国内外很多植物学专家先后对萱草组织培养进行了研究，但结果不尽相同。这说明萱草品种间差异性大、品种特异性强，因此针对每一萱草品种进行组培快繁研究都很有必要[2-4]。为此，笔者针对‘紫泉萱草的组织培养技术进行研究，旨在建立一套完整的‘紫泉萱草组织培养快繁技术体系。

1材料与方法

1.1试验材料供试材料为‘紫泉萱草，由辽宁省农科院花卉所提供。

1.2方法

1.2.1外植体消毒和接种。选取生长势旺盛、强壮的植株，以花托和幼嫩的花茎为外植体。将外植体用洗衣粉清洗，流水冲洗30～40 min。在超净工作台上用75%乙醇将外植体浸泡30 s，再用 0.1%的氯化汞溶液消毒10 min。然后用无菌水冲洗3～5次后备用。在无菌培养皿上将花托切成小段，幼嫩花茎切成1 cm左右的茎段接种在愈伤组织诱导培养基中。

1.2.2愈伤组织诱导。采用MS基本培养基，利用不同浓度的6BA、NAA设计试验，6BA的浓度为1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L，NAA浓度为0.01、0.10 mg/L，共8个组合（）。添加蔗糖30 g/L、琼脂5 g/L，pH 5.8。

将外植体消毒后，分别接种至6BA、NAA以上组合，每处理接种30甁外植体。

不同基本培养基及激素浓度配比对‘紫泉萱草愈伤组织诱导的影响

试验号培养基类型∥mg/LNAA6BA不同外植体的愈伤诱导率∥﹪花托茎段10.011.028.0234.2520.012.067.0855.0630.013.018.0740.3140.014.08.0321.7750.101.022.0626.5460.102.014.0369.3270.103.025.1241.6980.104.05.3212.18

1.2.3不定芽诱导与增殖培养基筛选。采用MS基本培养基，利用6BA、NAA 2因素进行试验设计，6BA的浓度为0.5、1.0、2.0 mg/L，NAA浓度为0.01、0.10 、0.50 mg/L，共9个组合（）。添加蔗糖30 g/L、琼脂5 g/L，pH 5.8。

1.2.4生根培养。基本培养基采用1/2MS，NAA的浓度为0.1、0.2、0.3、0.4 mg/L。添加蔗糖30 g/L、琼脂5 g/L，pH 5.8。14 d后统计生根率、生根数、根的长度等。

1.2.5试管苗炼苗及移栽。当甁苗的根长3～4 cm时，进行炼苗移栽。扦插前打开瓶盖，在自然散射光条件下炼苗2～3 d，然后用镊子小心地从培养瓶中取出苗，并用自来水冲掉粘在根上的培养基。而后移栽到蛭石、细河沙、草炭∶沙子=1∶1和蛭石∶珍珠岩=1∶1 4种不同基质中，温室内保持温度在20～25 ℃，相对湿度在80%左右，并用遮阴网遮阴，喷水2次/d，待幼苗挺直、叶片展开时，可去掉遮荫网，28 d后调查不同炼苗天数和不同基质中试管苗的成活率及生长情况。

不同激素浓度配比对‘紫泉萱草不定芽诱导与增殖的影响

试验号培养基类型∥mg/LNAA6BA接种愈伤

组织块数 诱导出不定

芽块数诱导率

2结果与分析

2.1愈伤组织的诱导选取‘紫泉萱草的花托及幼嫩的茎段作为外植体分别接种到8种培养基上。花托在接种14 d后产生愈伤组织，愈伤组织呈淡绿色，形成瘤状突起（），花托于MS+6BA ‘紫泉萱草花托诱导出的愈伤组织2.0 mg/L+ NAA0.01 mg/L培养基上诱导率较高，可见6BA浓度为2.0 mg/L，NAA浓度为0.01 mg/L的激素比例适合花托愈伤组织的产生。

幼嫩的茎段接种于培养基上20 d后，与培养基接触部位开始膨大，30 d左右开始出现愈伤组织（），茎段在8种培养基中均能诱导出愈伤组织，但不同激素配比对愈伤组织的诱导率有很大影响，在MS+6BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L培养基中的诱导率最高，说明茎段是初代培养较适宜的外植体，合适的激素浓度为6BA2.0 mg/L、NAA0.1 mg/L有利于诱导茎段产生愈伤组织。

‘紫泉萱草花茎诱导出的愈伤组织2.2不同激素浓度配比对‘紫泉萱草不定芽诱导与增殖的影响将上述诱导出的愈伤组织转接到9种不定芽诱导培养基上，14 d后愈伤组织上可见不定芽，继续培养，不定芽可长成具有明显茎叶结构的小植株（图 3）。将长至5 cm左右的小苗切下接种到生根培养基上生根，将带有不定芽的愈伤组织切块接种到分化培养基，不定芽可不断增殖。

‘紫泉萱草愈伤组织分化不定芽由可知，‘紫泉萱草不定芽诱导与增殖得最佳激素配比为6BA浓度为2.0 mg/L，NAA浓度为0.1 mg/L。

2.3不同NAA浓度对‘紫泉萱草试管苗生根的影响从可以看出，不同NAA浓度对‘紫泉萱草生根情况的影响，所设置的4个浓度之间存在差异，生根率和根长均随着NAA浓度增加而增加，当NAA浓度为0.1 mg/L时，虽然根有一定的长度，但生根率和平均根数较低，NAA浓度为0.2 mg/L与NAA浓度为0.3 mg/L各项指标之间差异均不显著，当NAA浓度达到0.4 mg/L时生根率﹑平均根数和根长都达到较好状态，综上所述，适合‘紫泉萱草不定芽生根的培养基为1/2MS+NAA 0.4 mg/L（）。

2.4炼苗与移栽试验表明，炼苗时间短，试管苗对外界环境不适应，严重影响了移栽成活率，试管苗炼苗1 d的移栽成活率极低，炼苗2、3 d的移栽成活率均达到90%以上，因此萱草试管苗炼苗时间应以2～3 d为宜。细河沙或蛭石∶草炭=1∶1较适合作为‘紫泉萱草的移栽基质。

（1）茎段和花托适合作为‘紫泉萱草组培快繁的外植体。

（2）‘紫泉萱草不同部位的外植体都可以以MS作为基本培养基使用，但不同外植体对激素配比的要求不同，这就要求根据不同类型的外植体配置不同的激素浓度，才能达到更好的培养效果。

参考文献

[1] 高凤，王雪.萱草引进新品种“Forgotten Dreams”的组织培养技术[J].江苏农业科学，2012，40（8）：60-62.

[2] 何月秋，祝志勇.大花萱草新品種“御衣黄”组织培养及植株再生[J].江苏林业科技，2011，38（3）：12-15.

[3] 姜风英，栾绍武.多倍体萱草“金娃娃”的离体培养研究[J].辽宁农业科学，2007（1）：51-52.

[4] 兰丽婷，李冲，任爽英，等.萱草新品种组织再生体系的建立[J].东北林业大学学报，2011，39（4）：15-17.4