HPLC法测定五黄养阴颗粒中姜黄素的含量

吕紫璇等

【摘 要】目的：建立HPLC法测定五黄养阴颗粒中姜黄素含量的方法。方法 色谱柱为C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈-0.4%冰醋酸（48：52），流速为1.0mL/min，检测波长为430nm，柱温35℃。结果：姜黄素进样量在0.0239～0.478ug范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9998），加样回收率为99.14%，RSD为0.48%（n=6）。结论：本方法操作简便准确，可用于五黄养阴颗粒的质量控制。

【关键词】五黄养阴颗粒；高效液相色谱法；姜黄素

【文章编号】1004-7484（2014）04-2422-02

五黄养阴颗粒由黄连、黄芪、姜黄、地黄和黄芩5味中药制成，是以石柱黃连为主药治疗2型糖尿病合并脂代谢异常的纯中药制剂。原标准未对主要药物姜黄作质量控制，不能有效控制产品质量。笔者采用高效液相色谱法建立姜黄素的测定方法，该方法简便准确，可以用于五黄养阴颗粒的质量控制。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪；Sartorius-ME215S电子天平。

姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110823-201004，含量98.8%）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯；五黄养阴颗粒样品由重庆东田药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.4%冰醋酸（48：52）；流速：1.0mL/min；检测波长：430nm；柱温：35℃；进样量：10μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取姜黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含 0.01195mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品装量差异项下2袋，研细，取0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超 声处理（功率250W，频率50kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备 按照五黄养阴颗粒剂制备工艺，制备缺姜黄的阴性样品，照供品溶液的方法制备，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性考察 取上述3种溶液，分别进样，记录色谱图。结果阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱峰相应保留时间位置上未出现吸收峰，说明处方中其他成分对测定无干扰，专属性好。理论塔板数按姜黄素计算大于3000，分离度大于1.5。见图1。

2.3.2 线性关系考察 取姜黄素对照品溶液，分别进样量2μL、4μL、10μL、20μL、40μL，按拟定的色谱条件测定峰面积，以进样量（X）

2.3.3 精密度试验：取姜黄素对照品溶液，连续测定6次，结果姜黄素的峰面积的RSD为0.1% （n=6）。

2.3.4 重现性试验：精密取同一批号样品（批号为130503），按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液测定，姜黄素的含量的RSD为0.24% （n=6）。表明此方法重现性良好。

2.3.5 稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24 h进样10μL，考察其稳定性，结果姜黄素峰面积的RSD分别为0.37%。表明供试品溶液在24h内稳定。

2.3.6 加样回收试验：取已知含量的样品（批号130504）6份，精密加入姜黄素对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，计算回收率，结果姜黄素平均回收率为 99.14%，RSD%为0.48%（n=6）结果见表1。

2.4 样品测定

取3批五黄养阴颗粒样品，测定。结果批号为130502、130503、130504的样品姜黄素含量分别为2.91，3.01，2.96mg/g.

3 讨论

提取时间的考察： 参照《中国药典》2010年版一部 “姜黄”项下的含量测定方法 ，采用甲醇为溶剂，超声提取 ，考察了超声20、30 、40分钟对提取效率的影响，结果含量基本一致 ，因此提取时间定为20分钟。

本实验采用的处理方法简便易行，姜黄素能达到较好的分离效果，结果准确可靠，专属性强，重现性好，可用于该制剂的质量控制。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].中国医药科技出版，2010.

[2] 梁坚，梁艺坚，曹耘，陆玮，廖伟成.HPLC法测定清肝败毒丸中姜黄素的含量 [J] 临床合理用药杂志，2013，6（8）：33-34

作者简介：

吕紫璇（1983-），女，理学学士，中药师，执业药师，质量工程师，主要从事药品检验工作。