HPLC法测定参芪生血颗粒中黄芪甲苷的含量

徐晓艳 贾光伟

【摘 要】目的：建立高效液相色谱法测定生血颗粒中黄芪甲苷含量的方法。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（75：25）为流动相；对参芪生血颗粒中的黄芪甲苷进行测定。结果：过方法学的系统考察和三批样品的含量测定，建立了制剂中黄芪甲苷的高效液相色谱含测方法。其回归方程为Ln（A）=1.7542 Ln（m）+5.3466，r=0.9998；加样回收率为99.42%，RSD=1.59%。根据3批样品的含量测试结果，规定含量限度为不少于7.4mg/袋。结论：建立的含量测定方法是控制本品内在质量的较理想方法。

【关键词】参芪生血颗粒；黄芪甲苷；含量测定

【中图分类号】R743.34 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）04-1965-01

Determination of Astragaloside in Ginseng and astragalus shengxue particles by HPLC

XU Xiao-yan JIA Guang-wei

（Liaocheng People's Hospital of Shandong Province， Shandong Liaocheng 252000， China）

【Abstract】Objective：To establish a method for the determination of astragaloside in shengxue particles by HPLC.Methods：the content determination used HPLC，chromatographic conditions were carried out as following：column was packed with the octadecyl silane chemically bonded silica，flowing phase was composed with methanol-water （75：25）. Results：The HPLC method for determination of Astragaloside in this preparation was established through methodology of systematic investigation and determination of three batch sample.The regression equation was Ln（A）=1.7542 Ln（m）+5.3466，r=0.9998； recovery was 99.42%， RSD=1.59%. According to the content of the test results of three batches of samples requiring content limit is not less than 7.4mg / bags. Conclusion：The quality standard research method was the ideal way to control the quality of the products.

【Key words】Ginseng and astragalus shengxue particles；Preparation； Quality standard research

参芪生血颗粒是在我院自制制剂生血汤的基础上改造而成。方中含有当归、地黄、人参、黄芪、川芎、仙茅、淫羊藿、茯苓等。临床上用于治疗血虚等症，目前主要用于治疗再生障碍性贫血。为控制本品的内在质量，制定可控性强的质量标准，采用HPLC法对本制剂中黄芪甲苷进行了含量测定方法的研究，通过方法学的系统考察和三批样品的含量测定，建立了本制剂中黄芪甲苷的含测方法，并建立其质量标准控制方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪器： Agilent 1100系列高效液相色谱仪、ELSD-Alltech蒸发光散射检测器、TSP-AS3000自动进样器，色谱柱：CAPCELL PAK C18 5?；250×4.6mm（UG120）。

1.2 试剂：乙醇、正丁醇、甲醇（GR），黄芪甲苷对照品（批号： 0781-200311，中国药品生物制品检定所），其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水（75：25）为流动相，蒸发光散射检测器，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品（批号： 0781-200311，中国药品生物制品检定所）5.17mg，至5ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取2ml至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含黄芪甲苷0.2068mg的溶液，即得对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取各水提工艺项下所得提取液体积的1/25（相当于黄芪2g），蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，加氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去氨洗液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇定量转移至5ml量瓶中并加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液。

2.3 線性关系考察 精密称取黄芪甲苷对照品2.06mg，加甲醇定溶至5ml，分别吸取2、4、6、8、10?l，分别注入高效液相色谱仪，测其峰面积积分值，以对照品相应的峰面积的对数值为纵坐标，黄芪甲苷进样量的对数值为横坐标，绘制标准曲线，得黄芪甲苷回归方程为Ln（A）=1.7542 Ln（m）+5.3466，r=0.9998（n=5），

黄芪甲苷含量测定标准曲线

结果表明进样量在2.024～10.12?g范围内，进样量与峰面积积分值呈现良好的线性关系。

2.4 精密度实验 分别精密吸取对照品溶液4?l，连续进样5次，测定峰面积积分值的自然对数及其平均值，计算精密度，测定对照品的平均值 =6.563，RSD%为0.323%。

结果RSD小于2%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性实验 取供试品溶液，在12小时内分别进样5次（0、2、4、8、12小时），测定峰面积积分值，结果峰面积积分值的自然对数及其平均值、RSD%见表3。

结果RSD小于2%，表明供试品溶液在12小时内稳定性较好。

2.6 重现性实验 取同一批号样品，按3.4.3项下供试品溶液制备方法，平行制备5份供试品溶液，分别进样20?l，按上述色谱条件操作，测定结果见表4。

结果RSD小于2%，表明此方法重现性好。

2.7 加样回收率实验 取批号为070502的样品15g，平均分5份，分别加入对照品溶液（黄芪甲苷对照品7.00mg，加甲醇至10ml）1ml，按3.4.5方法测定，计算出回收率。结果见表5。

结果RSD小于2%，该方法回收率良好。

2.8 样品测定 取三批样品，分别平行制备2份供试品溶液，按上述方法分别测定黄芪甲苷的含量，结果见表6。

根据三批样品测定结果，并结合药典中有关规定[1]，暂规定本品每袋含黄芪以黄芪甲苷，不得少于7.4mg。

2.9 空白实验 取不含黄芪的空白样品，照正文方法进行试验，结果：空白品在与对照品峰保留时间相同的位置，无干扰峰出现。

3 小结与讨论

3.1 本文采用HPLC法對制剂中的活性成分黄芪甲苷进行了含量测定，通过方法学的系统考察和三批样品的含量测定，建立了制剂中黄芪甲苷的高效液相色谱含测方法。

3.2 本方法具有灵敏度高，重现性好等优点，是控制本品内在质量较好的含量测定方法。

3.3 在制剂质量标准研究中，根据三批样品测定结果，并结合药典中有关规定[1]，并规定黄芪甲苷含量限度为不少于7.4mg/袋。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）[S].北京中国医药科技出版社， 2010