不同产地芫花根皮药材中西瑞香素含量比较

王 瑞 ，张朋俊 ，翟晓晓 ，徐 雯 ，王 沛 ，薛冰洋 ，张 颖 ，李晓天

(1.郑州大学药学院，河南 郑州 450001； 2.漯河医学高等专科学校第一附属医院，河南 漯河 462000)

芫花 Dephe genkwa Sieb.et Zucc.为瑞香科植物，始载于《神农本草经》，列为下品。其为传统泻水逐饮药，传统用于治疗水肿胀满、胸腹积水等症状，现代医学多用于抗炎、免疫调节、抗风湿等[1－3]。其主要化学成分为黄酮类、香豆素类、二萜原酸酯类、绿原酸类、木脂素类化合物等[4]。西瑞香素属香豆素类化合物，是其有效成分之一，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤的作用，同时也能明显改善小鼠心肌营养血流量，明显降低心肌耗氧量[5－9]。此外，其是治疗风湿性、类风湿性关节炎药物消络痛片、消络痛胶囊含量测定的标准物质，对于芫花根皮作为配伍用药用于风湿病方面的治疗具有重要意义。目前，关于芫花方面的研究较多，且大部分集中于芫花酯甲、芫花素[10－11]，而系统比较不同产地芫花根皮药材中西瑞香素含量的研究却未见报道。本试验中采用高效液相色谱（HPLC）法对不同产地芫花根皮中西瑞香素进行含量测定，为评价不同产地药材质量，也为临床采购药材提供了一定的依据。

1 仪器与试药

Ultimate 3000型高效液相色谱系统，包括四元泵、自动进样器、在线脱气机、柱温箱、自动进样器和紫外检测器（美国热电公司）；XK96－A型快速匀浆机 （姜堰市新康医疗器械有限公司）；Metter Toledo XS－105型分析天平 （瑞士梅特勒－托利多公司）；anke TGL－16G型离心机 （上海安亭科学仪器厂）；Milli－Q Advantage A 10 systems 超纯水机(Millipore Inc，USA)。西瑞香素对照品（中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号为111758－201101）；甲醇（色谱纯），磷酸（分析纯），无水乙醇 （分析纯），水为超纯水。芫花根皮药材共12批，经郑州大学中药系潘成学教授鉴定为芫花根皮正品药材。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Prodigy 5u 100A C18柱（250 mm ×4.60 mm，5μm，美国菲罗门公司），同时配备有C18预柱（KJO－4282，美国菲罗门公司）；流动相：甲醇 －0.2% 磷酸水溶液（55 ∶45）；流速：1.0 mL /min；进样量：20 μL；柱温：30 ℃ ；紫外检测波长：46 nm；运行时间：20 min。西瑞香素对照品及样品甲醇提取液色谱图见图1，可见，西瑞香素的保留时间在8.8 min附近。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取西瑞香素对照品适量，加甲醇定容至50 mL容量瓶中，制成每1 mL含20 μg西瑞香素溶液，作为对照品溶液，定容后超声处理3 min。取芫花根皮药材粉末0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20 mL，密塞，称重，超声处理1 h，冷却至室温，称重，用甲醇补足损失的质量，摇匀后取出滤液，4 000 r/min离心10 min，取上清液过0.22 μm滤膜，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察：取2.2项下西瑞香素对照品溶液不同体积配制成 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 μg/mL 系列浓度进行进样，记录色谱图。以峰面积为纵坐标、质量浓度为横坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y＝1.688 3 X－0.356 1，r＝0.998 4(n＝6)。结果表明，西瑞香素质量浓度在 0.5～20 μg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系。

重复性试验：取同一产地芫花根皮药材6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，进样分析，记录色谱图。结果的 RSD为1.32%，表明该方法重复性好。

稳定性试验：取同一芫花根皮供试品溶液，在室温下分别放置 0，2，4，6，8，12，24 h 后进行进样分析，记录色谱峰面积。结果的 RSD为1.24%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

精密度试验：精密吸取对照品贮备液5 mL，用甲醇稀释至10 mL（10 μg/mL），连续测定5次。结果的 RSD ＝0.42% （n ＝5），表明该方法的精密度良好。

加样回收试验：精密称取芫花根皮（河南登封产）6份，每份0.5 g，按2.2项下方法制备供试品溶液，进样测定。取供试品溶液各1 mL，分别加入不同体积西瑞香素对照品溶液，进样分析。结果见表1。

表1 西瑞香素加样回收试验结果(n＝6)

2.4 样品含量测定

取各产地药材各3份，按2.2项下方法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液及对照品溶液依法进样，按外标法测定含量。结果表明，芫花根皮中西瑞香素含量以河南登封产最高，达5.37%；广州产含量最低，为3.19%；禹州与安徽亳州产居中。详见表2。

表2 12批样品中西瑞香素含量测定结果

3 讨论

本试验中，流动相的pH对分离效果影响较大。以甲醇及磷酸水溶液作为流动相，pH越低，分离效果越好，考虑到柱子的耐酸能力以及保留时间，采用0.2%的磷酸水溶液与甲醇配比作为流动相。对西瑞香素进行全波长扫描，发现西瑞香素在346 nm波长处有最大吸收，因此选择346 nm作为检测波长。

本试验中，对河南登封市售品芫花根皮药材分别应用不同的溶剂及不同的方法来进行提取，分别采用乙醇、80%乙醇、甲醇进行超声提取1 h和乙醇浸泡24 h进行提取，结果提取相对含量分别为 3.05% ，4.81% ，5.37% ，3.87% ；对广州市售芫花根皮药材同法采用不同的溶剂以及不同的方法进行提取，结果提取相对含量分别为 0.07% ，0.94% ，3.02% ，1.27% 。可见，甲醇的提取效率较高，且相对提取时间较短，因此本试验中采用甲醇超声提取的方法。

对不同产地的芫花根皮药材进行含量测定，发现不同地区的药材该成分含量差别较大，可能与不同地方的环境不同具有密切的关系[12]。安徽属北亚热带湿润气候，广州属南亚热带典型季风海洋气候，而河南属黄河流域暖温带半干旱气候，不同的气候条件导致其所含有效成分含量不同。相比而言，河南地区芫花根皮中西瑞香素的含量较高，而广州地区药材中西瑞香素的含量较低。可见，在选购药材的时候应注重药材的内在质量、有效成分含量，从而保证临床用药的安全性与有效性。

致谢：特别感谢郑州大学药学院生药系潘成学教授对试验用药材进行相关鉴定。

参考文献：

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