李淑贞,顾 宇,张兰兰
(沧州医学高等专科学校,河北 沧州 061001)
肾素-血管紧张素系统(RAS)是一个复杂的多成分酶-激 素系统。除传统内分泌性RAS外,局部组织或细胞都可分泌这类活性物质,这些局部分泌的RAS在机体损伤中可能较循环中的RAS起着更重要的作用。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是肾素-血管紧张素系统的重要效应分子[1-2]。肾脏中肾素、血管紧张素的含量远远高于血液,肾皮质中AngⅡ的浓度是血浆中的1000倍[3]。本试验旨在观察新一代血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)贝那普利对顺铂肾损伤大鼠肾功能和AngⅡ的影响,阐明其防治顺铂肾损伤的作用及可能机制。
贝那普利(商品名洛汀新,北京诺华制药有限公司,国药准字H20030514,规格为14 mg×14 s)临用前用0.9%氯化钠注射液配制成0.1 g/L的混悬液;顺铂针剂(济南齐鲁制药有限公司,批号为610044CF,规格为每支10mg)临用前用0.9%氯化钠注射液配制成1 g/L的溶液。健康成年雄性 SD大鼠36只,体重180~200 g,河南省实验动物中心提供,合格证号为SCXK(鄂)2004-2007。
将健康成年SD大鼠36只适应性饲养1周后,随机分为正常组、模型组、贝那普利组,各12只。参考文献[4],并根据预试验结果,模型组、贝那普利组大鼠给予顺铂溶液(用0.9%氯化钠注射液配制成1 g/L的溶液)5mg/kg尾静脉注射,每周1次,连续3次,复制顺铂肾损伤模型;正常组用等量0.9%氯化钠注射液尾静脉注射。从第1次尾静脉注射顺铂开始,按大鼠与人等效剂量折算方法,每天定时进行药物灌胃。贝那普利组给予贝那普利1mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量0.9%氯化钠注射液灌胃,均每日1次,每次灌胃液体均按每100 g体重1mL计算。
试验期间,动物普通饲料喂养,自由摄食、饮水,6周后禁食不禁水12 h,收集24 h尿液测尿蛋白(24 h Upro)的含量;10%水合氯醛4mL/kg腹腔注射麻醉,股动脉取血4mL,检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)的含量。取血完毕迅速取出其中1只肾脏,肉眼观察大体情况后沿冠状面切成两半,一半放入10%多聚甲醛固定以备行HE、Masson、PAS染色;另一半肾脏放入液氮中保存待测肾组织AngⅡ含量。取液氮保存标本100 mg,加预冷的0.9%氯化钠注射液2mL,冰浴条件下匀浆,再将该匀浆液置于预冷的含3.0mmol/L乙二胺四乙酸二钠、3.4mmol/L 8-羟基喹啉和3.2mmol/L二巯丙醇的试管中,煮沸10min,以3000 r/min的速率,4℃时离心10min,吸取上清液,按照AngⅡ放免分析盒说明书测定AngⅡ的含量。
采用SPSS 16.0统计软件,试验数据以表示,多组间均数比较采用单因素方差分析(One-Way-ANOVA),检验水准α=0.05,若差异有统计学意义,则进一步使用q检验行两两比较。
在整个试验过程中,正常组大鼠精神状态良好,皮毛光滑润泽,紧贴身体,大便正常,进食无异常,体重直线上升;模型组大鼠注射顺铂后当日或次日开始出现少动闭眼、蜷卧拱背、精神萎靡、反应迟钝、摄食量明显减少、粪便稀薄、皮毛凌乱、缺乏光泽、体重下降,贝那普利组大鼠也有类似改变,但程度较模型组轻,恢复亦较快。
表1 各组大鼠血清BUN及Scr含量比较( ± s,n=12)
表1 各组大鼠血清BUN及Scr含量比较( ± s,n=12)
注:与正常组比较,*P<0.01;与模型组比较,△P<0.05。
组别正常组模型组贝那普利组BUN(mmol/L)5.31±0.8922.70±5.98*16.70±4.40△Scr(μmol/L)108.08±11.94142.13±12.92*123.18±14.18△
模型组大鼠 24 h Upro含量为(14.59±3.97)mg/L,明显高于正常组的(8.32±2.06)mg/L(P<0.01);经用药干预,贝那普利组大鼠 24 h Upro含量为(10.39±3.33)mg/L,明显低于模型组的含量(P<0.05)。见图 1。
图1 各组大鼠24 h Upro含量
模型组大鼠肾组织 AngⅡ含量为(1.18 ±0.13)ng/mg,显著高于正常组的(0.69±0.17)ng/mg(P<0.01);经用药干预,贝那普利组大鼠肾组织 AngⅡ含量为(0.89±0.18)ng/mg,明显低于模型组的含量(P<0.01)。见图2。
图2 各组大鼠肾组织AngⅡ的含量
光镜下,模型组大鼠部分肾小球轻度充血,近曲小管上皮细胞明显水肿,部分小管上皮细胞不同程度坏死、脱落,管腔内有大量蛋白管型,肾小管萎缩,间质水肿,大量炎性细胞浸润、纤维母细胞增生。PAS染色显示,部分肾小管基底膜皱缩,不规则增厚。Masson染色可见胶原纤维呈条索状增生,贝那普利组病理改变明显减轻,正常组大鼠肾小球和肾小管及间质结构正常。
临床研究表明,顺铂的疗效与剂量密切相关。由于其主要通过肾脏排泄,对肾脏有明显的毒性[5],且毒副作用随剂量增加而增加,在高剂量或连续给药时,可造成肾小管不可逆性损伤。连续3次尾静脉注射顺铂后,大鼠24 h Upro及血清中BUN、Scr含量明显升高,光镜下近曲小管上皮细胞明显水肿、坏死、脱落,肾小管萎缩,管腔内有大量蛋白管型,间质水肿,大量炎性细胞浸润,胶原纤维呈条索状、网状增生,表明顺铂肾损伤模型复制成功。
许多大规模的前瞻性研究表明,ACEI能够通过阻断RAS对肾脏起保护作用,显著减慢了糖尿病和非糖尿病患者肾衰竭的进展[6-7],其保护机制依赖于其血流动力学的影响,即降压作用和非降压作用。ACEI能抑制 RAS,同时激活激肽 -缓激肽系统(KKS),发挥双系统保护作用,能有效抑制AngⅡ的产生,使出球小动脉扩张,灌注压降低,尿蛋白减少。本试验结果显示,贝那普利能减轻肾脏病理改变,降低血清BUN,Scr,Upro/24 h和肾组织AngⅡ含量水平,提示贝那普利能通过抑制AngⅡ的产生,对肾脏起保护作用,显著减慢顺铂肾损伤的进展。
参考文献:
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