内皮脂肪酶584C/T基因多态性与高血压病相关性研究——299例常州地区汉族人群分析

蔡高军，翁伟进，师干伟，薛社亮，杨丽萍，黄晓凤，宋艳斌

（江苏大学附属武进医院心内科，常州 213000）

高血压病（essential hypertension，EH）在我国人群知晓率、治疗率和控制率仍较低[1]。EH的发病受遗传和环境因素共同作用[2,3]。有研究资料显示单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）可能与EH发病有关[3]。近来研究表明，内皮脂肪酶（endothelial lipase，EL）可能通过裂解高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）及其他多条途径参与动脉粥样硬化和冠心病的发病。EL编码基因定位于18q21.1，编码产物由483个氨基酸组成，相对分子质量约55ku[4]。近来，Shimokawa等[5]在自发性EH模型中发现主动脉平滑肌细胞中EL的表达上调。2002年deLemos等[6]首先发现人群中EL 584C/T基因多态性（ThrlllIle）。研究表明，不同人群该多态性的变异性较大[7,8]。该多态性可能与我国汉族人群冠心病相关[9]，与白库瑶族人群EH之间存在相关性[3]。但目前国内未见该多态性与我国汉族人群EH之间关联性的研究。本研究旨在探讨EL 584C/T多态性与常州地区汉族人群EH的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象

入选江苏大学附属武进医院2008年8月～2011年1月心内科住院患者，EH患者共160例，其中男80例，女80例，年龄29～78（62.0±10.1）岁，均符合《2010高血压防治指南》[1]的诊断标准；对照组139例，其中男72例，女67例，年龄31～93（57.8±9.8）岁。所有研究对象均行冠状动脉造影检查排除冠心病，根据患者病史和症状排除脑梗死（部分患者行头颅电子计算机X射线断层扫描技术或磁共振成像检查），入选患者还排除有肿瘤、感染性疾病及肝肾功能异常者，均来自常州地区汉族人群。该研究征得所有入选对象知情同意。

1.2 方法

1.2.1 生化指标检测 制定专门表格统一登记入选对象的基本资料，包括年龄、性别、EH史及服药情况、是否有糖尿病史和吸烟史等。血脂和血糖指标检测采用奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪检测分析。

1.2.2 DNA的提取及PCR检测 抽取患者次日清晨静脉血3ml，以酚-氯仿法提取基因组DNA。采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段多态性检测（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）方法检测EL 584C/T基因多态性。具体过程参照文献[10]，引物由大连宝生物合成。PCR反应体系：1μl基因组DNA，1μl引物，0.25μl TaKaRa Ex Taq DNA聚合酶，5μl 10×Ex Taq缓冲液，4μl dNTP混合液。PCR反应条件：首先94℃预变性5min，然后94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环后72℃延伸10min。反应产物经限制性内切酶NdeⅠ酶切，37℃温育过夜。酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后，在紫外灯下分型。选取部分PCR产物送上海生物工程有限公司测序分析。

1.3 统计学处理

数据统计采用SPSS17.0统计软件包分析。计数资料采用直接计数法，率的比较采用χ2检验；计量资料采用均数±标准差（±s ）表示，比较采用独立样本t检验，基因多态性与EH的相关性行多因素logistic回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 EH组和对照组一般资料比较

与对照组比较，EH组患者年龄偏大，合并糖尿病患者的比例明显升高，而且EH组患者甘油三酯（triglycerides，TG）水平明显升高（P＜0.05；表1）。

表1 EH组和对照组一般资料比较Table1 Comparison of clinical characteristics between EH and control groups

2.2 EH组和对照组基因型和等位基因频率比较

对照组基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），说明本研究资料具有群体代表性。EH组CC、CT、TT基因型和T等位基因频率分别为56.3%、42.5%、1.1%和22.5%；对照组CC、CT、TT基因型和C、T等位基因频率分别为56.1%、38.8%、5.0%和24.5%。两组间基因型和等位基因频率比较差异均无统计学意义（P＞0.05；表2）。

表2 EH组和对照组基因型和等位基因频率比较Table2 The genotype and allele frequencies of EL 584 C/T gene polymorphism between EH and controls groups [n(%)]

2.3 不同基因型血脂水平及年龄比较

由于TT基因型数量较少，我们将CT+TT基因型视为T等位基因携带者与CC基因型进行比较。由表中数据我们可以看出，无论是总体还是亚组分析，与CC基因型比较，T等位基因携带者血脂水平差异无统计学意义（P＞0.05）。女性T等位基因携带者年龄偏大（62.5±9.6vs58.8±9.0，P＜0.05；表3）。

2.4 EL 584C/T基因多态性与EH的相关性logistic回归分析

以EH为因变量，性别、年龄、TC、TG、LDL-C、HDL-C和EL 584C/T基因多态性等为自变量，Logistic回归结果显示，EH与年龄、合并糖尿病、高TG有关，与EL 584C/T基因多态性无关（表4）。

3 讨论

2005年，Shimokawa等在小鼠自发性EH模型中发现主动脉平滑肌细胞表达EL上调。EL能降解HDL-C，产生游离脂肪酸等[11]。Badellino等[12]研究也表明EL与EH、脂质代谢异常、肥胖和胰岛素抵抗等相关。我国学者杨晓静等[13]研究表明EH组患者血浆EL水平明显高于对照组，而且EH组内患者EL水平与收缩压、舒张压呈正相关。

目前已发现人类EL基因17个位点的多态性，研究较多的是584C/T位点和-384A/C位点多态性[14]。2012年，Yin等[3]研究白库瑶族人群血压与血脂相关基因多态性关系，研究纳入682例对照人群和670例EH患者。该研究发现，EL 584C/T多态性与女性EH之间存在明显相关性；同时研究还发现在EH组内，该多态性与男性收缩压、舒张压之间也存在明显相关性，CT基因型组收缩压、舒张压水平明显高于CC基因型组，而TT基因型组舒张压明显高于CC基因型组。但本课题组前期研究表明，该多态性与苏南地区汉族人群冠心病和血脂水平无明显相关性[10]。本研究表明，EL 584C/T多态性与常州地区汉族人群EH之间也无明显相关性。logistic回归分析显示，EH与年龄、是否有糖尿病、TG等因素有关，与EL 584C/T无关。本研究与Yin等的研究结论不一致，考虑主要可能与种族不同有关，同时也因为本研究样本量偏小，未按不同EH水平进行亚组分析。虽然EL与血压水平明显相关，但其多态性与EL水平无相关性，这也可能是该多态性与EH无相关性的原因之一[15]。

综上所述，本研究未发现EL 584C/T多态性与常州地区汉族人群EH之间有明显相关性。但由于本研究样本量较少，有待后续大样本的研究进一步验证。

表3 不同基因型间血脂水平比较Table3 Comparison of lipids level and age between different genotypes (±s)

表3 不同基因型间血脂水平比较Table3 Comparison of lipids level and age between different genotypes (±s)

EH: essential hypertension; TC: total cholesterol; TG: triglycerides; HDL-C: high density lipoprotein-cholesterol; LDL-C: low density lipoprotein cholesterol.Compared with CC group, *P＜0.05

Item n Age(years) TC(mmol/L) TG(mmol/L) HDL-C(mmol/L) LDL-C(mmol/L)Total(n＝299)CC 168 59.2±9.6 4.5±0.9 1.7±1.3 1.2±0.3 2.6±0.7 CT+TT 131 61.1±10.8 4.7±1.1 1.8±1.2 1.2±0.4 2.7±0.8 EH group(n＝160)CC 090 61.2±9.0 4.6±1.0 1.9±1.3 1.2±0.3 2.6±0.7 CT+TT 070 63.1±11.3 4.6±1.0 1.9±1.4 1.2±0.4 2.7±0.7 Control(n＝139)CC 078 56.8±9.8 4.5±0.9 1.6±1.3 1.2±0.3 2.7±0.6 CT+TT 061 58.9±9.9 4.7±1.3 1.6±0.9 1.2±0.3 2.7±1.0 Male(n＝152)CC 086 59.5±10.2 4.3±0.9 1.7±1.3 1.1±0.3 2.5±0.7 CT+TT 066 59.8±11.9 4.5±1.2 1.9±1.4 1.2±0.4 2.6±0.9 Female(n＝147)CC 082 58.8±9.0 4.8±0.9 1.8±1.3 1.2±0.3 2.7±0.7 CT+TT 065 62.5±9.6* 4.8±1.0 1.6±0.9 1.3±0.3 2.8±0.8

表4 基因多态性与EH相关性logistic回归分析Table4 Logistic analysis of EL 584 C/T polymorphism and EH risk

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