槐米化学成分研究I*

刘丽丽，李晓霞，陈 玥，石萍萍，瞿 璐，张 祎

（天津市中药化学与分析重点实验室,天津 300193）

槐米化学成分研究I*

刘丽丽，李晓霞，陈 玥，石萍萍，瞿 璐，张 祎

（天津市中药化学与分析重点实验室,天津 300193）

[目的]对国槐（Sophora japonica L.）米70%乙醇提取物的化学成分继续研究，为开发利用该植物资源提供依据。[方法]采用正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20等柱色谱及高效液相色谱法等方法进行分离纯化，并通过理化性质及光谱分析鉴定化合物的结构。[结果]从国槐米体积分数为70%的乙醇提取物中分离鉴定了6个单体化合物，分别为icariside F2（1）、gallic acid 3－O－β－D－（6＇－O－galloyl）－glucopyranoside（2）、ethyl－α－L－rhamnopyranosyl（1→6）－β－D－glucoside（3）、Et－（6－O－p－hydroxybenzoyl）－β－D－glucopyranoside（4）、胸腺嘧啶脱氧核苷（5）和左旋色氨酸（6）。[结论]化合物1～5为首次从槐属植物中分离得到的化合物。

槐米；化学成分；结构鉴定

槐米性微寒、味苦，具有凉血、止血，清肝泻火等功效，临床研究表明其对改善心肌循环、清热解毒、降血脂、软化血管、消炎补肾等有良好的防治作用，对人体无毒、无害、无致死、致癌、致畸、致突变作用[1-2]。本文采用大孔吸附树脂[3]、正相硅胶、反相ODS柱层析、制备型高效液相的方法对槐米70%乙醇提取物化学成分继续研究的过程中[4-5]，分离鉴定了6个单体类化合物，并利用与文献[6-8]类似的方法进行了鉴定，分别为icariside F2（1）、gallic acid 3-O-β-D-(6′-O-galloyl)-glucopyranoside（2）、ethyl-α-L-rhamnopyranosyl（1→6）-β-D-glucoside（3）、Et－（6－O－p－hydroxybenzoyl）－β－D－glucopyranoside（4）、胸腺嘧啶脱氧核苷（5）及左旋色氨酸（6）。其中，1～5为首次从槐属植物中分离得到的化合物。

1 仪器与材料

Bruker500MR超导核磁共振波谱仪（德国Bruker公司，AvanceⅢ500 MR），安捷伦6500系列四级杆-飞行时间质谱仪（美国Aglient公司，6520 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS）。柱层析硅胶（青岛海洋化工厂，48～75 μm），薄层色谱硅胶预板（天津思利达科技有限公司），ODS（日本YMC有限公司，50μm），D101大孔吸附树脂（天津海光化工有限公司，0.3～1.25 mm）；旋转蒸发仪（德国IKA公司，IKA RV 10）；分析型高效液相色谱仪（美国Aglient公司，Aglient1260）；制备型高效液相色谱仪（日本岛津公司，LC-8A）。Cosmosil 5 C18-MS-II分析柱/制备柱（日本Nacalai Tesque Inc.，250 mm×4.6 mm/250 mm×20 mm，5 μm）。

实验所用试剂（色谱纯或分析纯）均为天津康科德科技有限公司产品。

国槐米于2010年10月购自安国市场，由天津中医药大学中药标本馆李天祥副教授鉴定为国槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾。植物标本存放于天津中医药大学中医药研究中心。

2 提取分离

取干燥的槐米8.0 kg，用5、3、3倍量体积分数70%的乙醇溶液加热回流提取3次，每次分别为2、2、1.5 h，减压回收溶剂，得到浸膏2.3 kg。取浸膏670 g，用EtOAc-H2O萃取，得到EtOAc、EtOAc层沉淀及H2O层萃取物分别为78、197、385 g。取H2O层萃取物（330.3 g）溶于6 L水中，经D101大孔吸附树脂色谱柱分离（H2O→95%EtOH→Acetone），得到H2O、95%EtOH及丙酮洗脱物分别为213.1、122.1、8.2 g。取上述EtOAc萃取物（50 g）经硅胶柱层析[CHCl3-MeOH（100∶0→100∶2→100∶3→100∶5，V/ V）→CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1，V/V/V，下层）→MeOH]，共得7个组分（Fr.1～7）。Fraction 6（7.5 g）经ODS柱层析[MeOH-H2O（10∶90→45∶55→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]得到12个组分（Fr.6-1～12）。Fraction 6-2（139.8 mg）经制备型高效液相色谱法（PHPLC）分离制备[MeOH-H2O（12∶88，V/V）]，得到5（7.8mg）。Fraction6-3（1462.0mg）经高效液相色谱制备[MeOH-H2O（45∶55，V/V）；230 nm]得到11个组分[Fr.6-3-1～11]。Fraction 6-3-5（58.8 mg）经PHPLC分离制备[MeCN-H2O（20∶80，V/V）]，得到4（2.5 mg）。

取上述95%EtOH洗脱物（72 g）经硅胶柱层析[CHCl3→CHCl3-MeOH（100∶2→100∶5→100∶7，V/V）→CHCl3-MeOH-H2O（10∶3∶1→7∶3∶1→6∶4∶1，V/V/V，下层）→MeOH]，共得19个组分（Fr.1～19）。Fraction 12（3.3 g）经PHPLC制备[MeOH-H2O（20∶80→40∶60→50∶50→60∶40→100∶0，V/V）]，共得到21个组分（Fr.12-1～12-21）。Fraction12-11（107.6mg）经Sephadex LH-20柱层析[MeOH-H2O（1∶1，V/V），共得到5个组分（Fr.12-11-1～12-11-5）。Fraction 12-11-2（58.7 mg）经PHPLC[CH3CN-H2O（15∶85，V/V）+1%HAc]分离制备，得到1（8.0 mg）。Fraction 13（5.0 g）经ODS柱层析[MeOH-H2O（10∶90→20∶80→30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→100∶0，V/V）]，共得到 15个组分（Fr.13-1～13-15）。Fraction 13-5（50.4 mg）经PHPLC分离制备[MeOHH2O（12∶88，V/V）+1%HAc]，得到3（16.8 mg）。Fraction 14（6.0 g）经ODS柱层析[MeOH-H2O（30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）]，共得到10个组分（Fr.14-1～14-10）。Fr.14-2（23.2 mg）经PHPLC分离制备[MeOH-H2O（15∶85，V/V）+1%HAc]，得到6（8.8 mg）。Fraction 19（5.5 g）经PHPLC制备[CH3CN-H2O（13∶87，V/V）+1%HAc，V/V）]，共得到17个组分（Fr.19-1～19-17）。Fraction 19-3（246.9 mg）经分离制备PHPLC [CH3CN-H2O（10∶90，V/V）+1%HAc]，得到2（21.1mg）。

3 结构鉴定

从槐米中分离得到的化合物结构见图1。

3.1化合物1 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 425.141 2[M+Na]+，确定其分子式为C18H26O10（calcdforC18H26O10Na，425.1418）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.40（2H，br.d，ca.J=8 Hz，H-2,6），7.35（2H，t like，ca.J=8 Hz，H-3,5），7.28（1H，t like，ca.J=8 Hz，H-4），4.57、4.78（1H each，both d，J=12.0 Hz，H2-7），4.22（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），3.04（1H，dd，J=7.5、8.5 Hz，H-2′），3.14（1H，dd，J=8.5、9.0 Hz，H-3′），3.02（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4′），3.27（1H，m，H-5′），[3.44（1H，dd，J= 7.0、11.5 Hz），3.88（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6′]，4.91（1H，d，J=3.0 Hz，H-1″），3.79（1H，d，J=3.0 Hz，H-2″），3.60、3.88（1H each，both d，J=9.0 Hz，H2-4″），3.35（2H，s，H2-5″）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：137.8（C-1），127.7（C-2,6），128.0（C-3,5），127.3（C-4），69.4（C-7），101.8（C-1′），73.3（C-2′），76.5（C-3′），70.2（C-4′），75.6（C-5′），67.6（C-6′），109.2（C-1″），75.8（C-2″），78.7（C-3″），73.2（C-4″），63.1（C-5″）。该化合物的结构经1D-NMR及包括1H-1H COSY、HSQC及HMBC在内的2D-NMR谱的解析，鉴定为icariside F2[9]。

图1 从槐米中分离得到的化合物结构

3.2化合物2 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 483.080 7[M-H]-，确定其分子式为C20H20O14（calcd for C20H19O14，483.078）。1HNMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.26（1H，br.s，H-2），7.14（1H，br.s，H-6），4.81（1H，br.s，H-1′），3.18（1H，dd，J=7.5、8.5 Hz，H-2′），3.42（1H，dd，J=8.5、9.0 Hz，H-3′），3.69（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4′），4.25（1H，br.d，ca.J=11 Hz，H-5'），[3.44（1H，m，overlapped），4.44（1H，br.d，ca.J=11 Hz），H2-6′]，7.04（2H，br.s，H-2″，6″）。13C-NMR（DMSO-d6，125MHz）δ：122.2（C-1），111.9（C-2），145.3（C-3），139.0（C-4），145.2（C-5），108.5（C-6），102.5（C-1′），73.2（C-2′），75.2（C-3′），69.3（C-4′），74.0（C-5′），63.1（C-6′），119.1（C-1″），108.5（C-2″），145.5（C-3″），138.4（C-4″），145.5（C-5″），108.9（C-6″），165.8（C-7″），167.6（1-COOH）。该化合物的结构经1D-NMR及包括1H-1H COSY、HSQC及HMBC在内的2D-NMR谱的解析，鉴定为gallic acid 3-O-β-D-（6′-O-galloyl）glucopyranoside[10]。

3.3化合物3 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 377.142 6[M+Na]+，确定其分子式为C14H26O10（calcd for C14H26O10Na，377.141 8）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：1.14（3H，t，J=6.5 Hz，H3-1），3.49、3.76（1H each，both dd，J=7.0、10.0 Hz，H2-2），4.11（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），2.94（1H，dd，J=7.5、8.5 Hz，H-2′），3.13（1H，dd，J=8.5、9.0 Hz，H-3′），2.98（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4′），3.25（1H，m，H-5′），[3.43（1H，m，overlapped），3.80（1H，br.d，ca.J=11 Hz），H2-6']，4.59（1H，br.s，H-1″），3.61（1H，br.s，H-2″），3.42（1H，m，overlapped，H-3″），3.18（1H，dd，J=9.5、9.5 Hz，H-4′），3.45（1H，m，H-5′），1.13（3H，d，J=6.5 Hz，6″-CH3）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：15.1（C-1），63.8（C-2），102.5（C-1′），73.3（C-2′），76.5（C-3′），70.2（C-4′），75.3（C-5′），67.1（C-6′），100.8（C-1″），70.4（C-2″），70.5（C-3″），71.9（C-4″），68.2（C-5″），17.8（6″-CH3）。该化合物的结构经1D-NMR及包括1H-1H COSY、HSQC及HMBC在内的2D-NMR谱的解析，鉴定为ethyl－α－L－rhamnopyranosyl（1→6）－β-D-glucoside[11]。

3.4化合物4 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 327.109 5[M-H]-，确定其分子式为C15H20O8（calcd for C15H19O8，327.109 85）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：1.21（3H，t，J=7.0 Hz，H3-1），3.58、3.88（1H each，both dd，J=7.0、10.5 Hz，H2-2），4.31（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），3.21（1H，dd，J=7.5、8.5 Hz，H-2′），3.40（2H，m，overlapped，H-3′and H-4′），3.57（1H，m，overlapped，H-5′），[4.40（1H，dd，J=5.5、11.5 Hz），4.52（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6′]，7.89（2H，d，J=8.0 Hz，H-2″,6″），6.82（2H，d，J=8.0 Hz，H-3″,5″）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：15.5（C-1），66.4（C-2），104.1（C-1′），75.1（C-2′），78.0（C-3′），71.9（C-4′），75.5（C-5′），64.9（C-6′），122.1（C-1″），132.9（C-2″，6″），116.3（C-3″，5″），163.9（C-4″），168.2（C-7″）。该化合物的结构经1D-NMR及包括1H-1H COSY、HSQC及HMBC在内的2D-NMR谱的解析，鉴定为Et－（6－O－phydroxybenzoyl）－β－D－glucopyranoside[12]。

3.5化合物5白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 265.081 1[M+Na]+，确定其分子式为C10H14N2O5（calcdforC10H14N2O5Na，265.0795）。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.81（1H，s，H-6），6.28（1H，t，J=7.0 Hz，H-1′），2.24（2H，m，H2-2′），4.40（1H，m，H-3′），3.90（1H，q like，ca.J=4 Hz，H-4′），[3.72（1H，dd，J=4.0、12.0 Hz），3.79（1H，dd，J=3.0、12.0 Hz），H2-5′]，1.85（3H，s，5-CH3）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：152.4（C-2），166.5（C-4），111.6（C-5），138.2（C-6），86.3（C-1′），41.2（C-2′），72.2（C-3′），88.9（C-4′），62.9（C-7′），12.5（5-CH3）。上述1H-NMR和13C-NMR谱数据与文献中报道的胸腺嘧啶脱氧核苷的数据基本一致，故鉴定化合物5为胸腺嘧啶脱氧核苷（2′-deoxythymidine）[13]。

3.6化合物6白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 205.096 6[M+H]+，确定其分子式为C11H12N2O2（calcd for C11H13N2O2，205.097 2）。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.21（1H，s，H-2），7.57（1H，d，J=8.0 Hz，H-4），6.97（1H，t like，ca.J=8 Hz，H-5），7.06（1H，t like，ca.J=8 Hz，H-6），7.35（1H，d，J=8.0Hz，H-7），[2.96（1H，dd，J=9.0、15.0Hz），3.31（1H，dd，J=3.5、15.0 Hz），H2-8]，3.46（1H，dd，J= 3.5、9.0 Hz，H2-9）。上述1H-NMR和13C-NMR谱数据与文献中报道的左旋色氨酸的数据基本一致，故鉴定化合物6为左旋色氨酸（L-tryptophan）[14]。

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Isolation and identification of chemical constituents from Flos Sophorae I

LIU Li-li，LI Xiao-xia，CHEN Yue，SHI Ping-ping，QU Lu，ZHANG Yi
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin,Tianjin 300193,China）

[Objective]To study the chemical constituents from Flos Sophorae.[Methods]The chemical components were obtained by using chromatographies such as silica gel,ODS,Sephadex LH-20 and HPLC,and identified by the chemical and physical methods,especially spectral analysis.[Results]Six compounds were obtained and identified as icariside F2 (1),gallic acid 3-O-β-D-(6'-O-galloyl)glucopyranoside(2),ethyl-α-L-rhamnopyranosyl(1→6)-β-D-glucoside(3),Et(6-O-p-hydroxybenzoyl)-β-D-glucopyranoside(4),L-tryptophan (5)and 2'-deoxythymidine(6),respectively.[Conclusion]Compounds 1～5 were obtained from Sophora genus firstly.

Flos Sophorae;chemical constituents;structural identification

R284

：A

：1673－9043（2014）04－0230-04

2014-03-15）

10.11656/j.issn.1673-9043.2014.04.11

国家自然基金项目资助（81202995）；国家科技重大专项项目-重大新药创制（2011ZX09307-002-01）；新世纪优秀人才支持计划资助（NCET-12-1069）。

刘丽丽（1986-），女，硕士研究生，主要从事中药化学研究。

张 祎，E-mail:zhwwxzh@hotmail.com。