新型硫酸盐还原菌杀菌剂的性能评价

杨 平，衣雪竹

（大连百傲化学股份有限公司,辽宁 大连 116038）

新型硫酸盐还原菌杀菌剂的性能评价

杨 平，衣雪竹

（大连百傲化学股份有限公司,辽宁 大连 116038）

采用绝迹稀释法研究了新型杀菌剂B对硫酸盐还原菌（SRB）的杀菌性能。结果表明，新型杀菌剂B相对于同类杀菌剂A具有起效快、用量少、时效长的优势，对SRB的最低抑制浓度为30mg·L-1，加60mg·L-1作用72h杀菌率为100％，药效可持续14d。

硫酸盐还原菌（SRB）；杀菌性能；绝迹稀释法

在工业冷却循环水及油田回注水中，大量微生物的生长繁殖会使水质变差，管道堵塞，设备腐蚀，若不加以控制将严重影响正常生产。循环水中最常见的危害菌为硫酸盐还原菌，它是一种厌氧菌，代谢过程中会产生黑色沉淀物和硫化氢。研究表明大部分的腐蚀破坏都是由硫酸盐还原菌生长造成的[1]，因此对硫酸盐还原菌的有效控制已成为水处理杀菌剂的研究热点。在循环水处理中最常使用氧化型杀菌剂和季铵盐类杀菌剂，这两类杀菌剂虽对硫酸盐还原菌有一定的杀菌能力[2-3]，但用久会使菌体产生耐药性，影响药效，增加使用成本。本文采用绝迹稀释法[4-5]对市售及新型非氧化型杀菌剂进行了杀菌性能对比，旨在找到一种针对硫酸盐还原菌的有效杀菌剂，为工业防腐的有效控制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验测试菌及药品

SRB由本微生物实验室培养保存；杀菌剂A为市售水处理杀菌剂；杀菌剂B由大连百傲化学公司提供；SRB测试瓶（HY-SRB-7）购自北京华运安特科技有限责任公司；其它试剂均购自国内试剂公司。

1.1.2 SRB培养基

磷酸氢二钾0.5g，氯化铵1.0g，硫酸钠0.5g，氯化钙0.1g，硫酸镁2.0g，乳酸钠3.5g，酵母粉1.0g，加水补至1000mL，pH 7.2～7.4，121℃灭菌15分钟后取出放凉；每100mL培养液加1.0mL硫酸亚铁铵溶液及1.0mL维C溶液，两种溶液配制方法均见GB/T14643.5-93[6]。

1.1.3 仪器设备

超净工作台；恒温培养箱；高压灭菌锅；AG135梅特勒-托利多天平等。

1.2 方法

（1）抑菌浓度判断：1mLSRB测试菌液加入SRB测试瓶（HY-SRB-7）中，分别加入不同剂量杀菌剂，以不加杀菌剂瓶作为空白对照，35℃培养观察，培养液不变黑或无黑色沉淀生成的浓度为抑菌浓度[4]。

（2）杀菌率：采用三管绝迹稀释法测定杀菌剂处理液不同时间的残留菌数[5-6]，以不加杀菌剂的菌数作对照，计算杀菌率=（起始菌数-残留菌数）/起始菌数×100％。

2 结果与分析

2.1 不同时间的抑菌能力对比

实验观察了7d内杀菌剂A、B对SRB的抑菌能力的变化[7]，杀菌剂加入剂量0-50mg·L-1，梯度增加值5mg·L-1，SRB菌量控制在为106-107个· mL-1。由图1，未加入杀菌剂测试瓶3h即变黑；加入30mg·L-1杀菌剂A ，24h-96h可抑制SRB菌生长，但7d时需45mg·L-1方可抑制SRB菌生长；而加入10mg·L-1杀菌剂B，24h试剂瓶仅有少量黑色沉淀，2d时20mg·L-1仍可保持不变色，随着时间的延长其抑制浓度逐渐增大，但7d后30mg·L-1仍可抑制SRB菌生长。

图1 杀菌剂A（下）杀菌剂B（上）加入不同时间状态，0-50mg·L-1（左-右）

7d后对测试瓶中菌液进行计数（MPN，3管），如表1，加入40mg·L-1杀菌剂B的测试瓶中SRB≤4个·mL-1，加入同等剂量杀菌剂A测试瓶中SRB≥9.5×104个·mL-1，两者残留菌数差4个数量级，可见杀菌剂B对SRB的抑菌能力明显优于杀菌剂A。

表1 对SRB的杀菌率（7d）对比

2.2 不同时间的杀菌效果对比

研究杀菌剂不同时间的杀菌效果可确定杀菌剂起效的最佳时间及药效时长，对于杀菌剂实际应用中的合理投加及效果检测有重要的指导意义。实验分别向装入100mL培养液的灭菌厌氧瓶（控制SRB菌量在106-107个·mL-1）中加入60mg·L-1的杀菌剂A、B，并以未加杀菌剂的厌氧培养液作为空白对照。充分混匀后放入35℃的生化箱中培养，不同作用时间后，以MPN法检测残留菌数。

由表2，杀菌剂A、B对SRB的杀菌率都均在72h时达到最佳，这是因为两种杀菌剂均属非氧化型杀菌剂，其对SRB的抑制主要是通过影响细菌代谢来完成的，故比传统的氧化型杀菌剂见效慢[8]。杀菌剂B在72h未检出SRB，结果可持续14d，此时杀菌剂A的杀菌率有明显降低，对SRB生长抑制开始减弱。分析结果，可见杀菌剂B在对SRB的抑制中具有长效性的优势，这是由于杀菌剂B中部分组份与杀菌剂A不同引起的。

表2 不同时间对SRB的杀菌率

3 结论

综上，杀菌剂B对杀灭硫酸盐还原菌较现有市售杀菌剂A有更高的杀菌能力，其对SRB的有效抑制仅需30mg·L-1，投加60mg·L-1作用72h后可达到最佳的杀菌效果，杀菌率达100％，持续14d以上无SRB菌生长，适用水处理中硫酸盐还原菌的杀灭控制。

[1]于亮，李佰广，孙琦等.硫酸盐还原菌引起的腐蚀及微生物防控研究进展[J].辽宁化工,2009,38（06）：389-392.

[2]何婷婷，周祾，王玥等.二氧化氯杀生剂在油田水和循环冷却水中的应用[J].广东化工,2013,（09）：91-92.

[3]孙玉海，马天态，张松亭等.双子表面活性剂对硫酸盐还原菌的杀菌性能[J].大连工业大学学报,2010,29（06）：452-454.

[4]何世梅，田剑临，余伟明等.测试瓶法快速检测循环水中硫酸盐还原菌[J].工业水处理,2004,24（01）：52-59.

[5]杨春雨，李进，沈莹.硫酸盐还原菌杀菌剂的杀菌能力评价[J].工业用水与废水,2008,39（02）：76-78.

[6]GB/T14643.5-93，工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定MPN法[S].

[7]高建富，李进，敬超文等.不同杀菌剂对硫酸盐还原菌杀菌能力评价[J].工业用水与废水,2013,44（06）：53-56.

[8]袁晓娟，吕荣湖.几种杀生剂的杀菌规律与作用机理探讨[J].安徽农业科学, 2008,36（17）：7425-7426.

杨平（1973—），女，大连人，硕士，工程师，主要从事：工业杀菌剂的评价及应用研究。