黄精-大枣药对协同抗氧化及提高免疫活性的对比研究

褚福龙， 宋永佳， 刁立超， 赛 男， 张 健， 刘嘉慧， 张崇禧

（山东大学 （威海） 海洋学院， 山东 威海 264209）

黄精-大枣药对协同抗氧化及提高免疫活性的对比研究

褚福龙， 宋永佳， 刁立超， 赛 男， 张 健， 刘嘉慧， 张崇禧*

（山东大学 （威海） 海洋学院， 山东 威海 264209）

目的 观察不同配比黄精和大枣药对协同抗氧化及提高免疫活性的作用，探究最佳药对配比。方法 不同配比黄精和大枣药对 （3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 及单药测定羟基自由基考察药对体外抗氧化的作用； 各药液灌胃给小鼠， 每天 1 次， 连续 20 d， 处死小鼠， 测定 SOD和 MDA考察体内抗氧化作用， 测定免疫器官指数考察对小鼠免疫器官的影响； 测定血清溶菌酶水平考察药对对小鼠非特异性免疫的影响。 结果 体外实验表明黄精-大枣各配比药对及单药均能显著清除羟基自由基； 体内实验表明黄精-大枣各配比药对及单药均能显著提高 SOD活性、 降低 MDA水平、提高小鼠的免疫器官指数及血清溶菌酶水平。 结论 该药对表现为协同作用， 其中以1∶1配比为最佳， 药对抗氧化能力及提高非特异性免疫能力均比单药效果好。

黄精；大枣；药对；抗氧化；非特异性免疫

黄 精 为百合科黄精属植物滇黄精 Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、 黄精 Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精 Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎， 大枣 Zizyphus jujuba Mill为鼠李科植物的成熟果实。 黄精具有益肾润肺、健脾益气之功效，而大枣为益气安神，缓和药性的常用中药，两药配伍可互补不足。现代药理研究发现两药均具有抗氧化活性，课题组前期研究发现，黄精、大枣配伍后抗氧化能力提高，免疫力增强。目前对于两药的化学成分和药理作用研究比较多，但对于两药配伍后的抗氧化活性研究较少。为了探讨黄精、大枣药对的最佳配伍比例及其可能的抗氧化及提高免疫力机理，作者对黄精、大枣单煎和黄精-大枣药对不同配伍比例合煎的抗氧化及提高免疫力作用进行了比较。

1 材料与仪器

1.1 实验动物 清洁级昆明种小鼠， 购自山东绿叶制药有限公司， 合格证号 SCXK（鲁） 2011 0007， 体质量 18 ～22 g， 雌雄兼用。 环境温度 （22 ±2） ℃， 在 12 h 光照周期的动物室内饲养，自由饮水、进食，适应性饲养1周后用于本实验。

1.2 实验样品 黄精、 大枣购于山东省威海市燕喜堂药店， 经山东大学生药学专家张崇禧教授鉴定。1～7号样品依次为：黄精、大枣单味水煎浓缩液、药对的不同配伍比例 （黄精∶大枣分别为 3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 水煎浓缩液。 每种供试品均取 100 g生药， 煎煮3 次， 依次加8 倍量水、 6 倍量水、 4 倍量水， 分别煎煮 3 h、 2 h 和 1 h，过滤后合并滤液并浓缩至 1 g/mL， 置 4 ℃ 冰箱保 存，备用。

1.3 实验试剂 羟基自由基试剂盒、 超氧化物歧化酶（SOD） 试剂盒、 丙二醛 （MDA） 试剂盒、 溶菌酶 （LZM）试剂盒 （南京建成生物工程研究所）； 考马司亮蓝 G250（上海试剂新分装厂）； 牛血清白蛋白 （上海化学试剂厂）；其余试剂均为国产分析纯。

1.4 实验仪器 PL303 型分析天平 ［METTLER-TOLEDO仪器 （上海） 有限公司］， 722 型紫外可见分光光度计 （上海光谱仪器有限公司）。

2 方法

2.1 体外抗氧化活性测定［1-3］分别取各实验药液 1 mL，严格按照试剂盒说明书检测各药体外对抗羟基自由基能力，空白组加 1 mL蒸馏水， 阳性对照组给予等体积 1 g/mL的维生素 C。

2.2 动物分组与给药方法［4-5］按随机数字表法分为 9 组，即空白对照组、阳性对照组、黄精、大枣单味水煎液给药组以及药对 （3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 给药组，每组10只。 各给药组均采用灌胃给药， 每日 1次， 连续给药 20 d， 给药体积 20mL/kg， 空白组给予等体积的蒸馏水，阳性对照组给予等体积 1 g/mL的维生素 C。 末次给药 24 h后，小鼠摘眼球取血后颈椎脱臼处死，测定相关实验指标。

2.3 体内抗氧化活性测定 末次给药 24 h 后， 小鼠摘眼球取 血 ， 分离 血 清备用。 取 小 鼠 肝 脏 ， 200 mg组 织 加 9 倍的生理盐 水 冰浴下制 成 10% 组织匀浆 液 ， 以3 000 r/min 离心 10min， 取上清液， 按照试剂盒说明书测定 SOD、 MDA活性。

2.4 免疫活性测定 小鼠处死前称定体质量， 处死后， 取脾脏、胸腺，分别称定。根据以下公式计算相应免疫器官指数： 脾脏指数 =脾脏质量 （m） /体质量 （m）， 胸腺指数=胸腺质量 （m） /体质量 （m）。

未抗凝血液静置后离心取血清，按照溶菌酶试剂盒说明书测定血清溶菌酶水平。

2.5 统计学处理 采用 SSPS 17.0 软件对数据进行统计分析， 采用方差分析检验， 数据均以 （） 表示， P＜0.05代表数据有显著性差异。

3 结果

3.1 对羟基自由基清除作用 与空白对照组比较， 各给药组对羟基自由基的清除作用均表现显著，各配比药对对自由基的清除能力均大于两单药煎液， 药对比为1∶1时清除作用最强，见表1。

表 1 各给药组对羟基自由基的清除作用 （n=10，）

表 1 各给药组对羟基自由基的清除作用 （n=10，）

注： 与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01； 与黄精或大枣比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

组别 ·OH清除率/% 43.62 ±1.20黄精 21.14 ±2.2*大枣 25.89 ±0.93*药对 （3 ∶7） 31.92 ±0.68**Δ药对 （4 ∶6） 38.71 ±1.01**Δ药对 （5 ∶5） 42.35 ±2.01***ΔΔ药对 （6 ∶4） 33.02 ±1.02**Δ药对 （7 ∶3） 27.50 ±2.88**Δ阳性对照组

3.2 SOD和 MDA活性影响 各给药组均可提高 SOD活性， 降低MDA水平。 与空白对照组相比， 各给药组均显著提高 SOD活性 （P＜0.05）， 其中以药对 1 ∶1 配比为最显著 （P＜0.001）； 各给药组均可降低 MDA水平， 部分药对效果显著 （P＜0.05）， 以药对 1 ∶1 配比为最显著 （P＜0.01）， 见表 2。

表 2 各给药组对 SOD和 MDA活性影响 （n=10，）

表 2 各给药组对 SOD和 MDA活性影响 （n=10，）

注： 与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001； 与黄精或大枣比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

组 别 SOD活性/（U·mg-1）MDA活性/（mmol·m L-1）空白对照组213.52 ±10.33 21.43 ±5.76阳性对照组 342 ±11.42 13.76 ±2.32黄精 253.48 ±12.40* 19.74 ±4.59大枣 282.83 ±11.54* 18.16 ±4.28药对 （3 ∶7） 287.62 ±12.46**Δ 18.63 ±4.89药对 （4 ∶6） 310.16 ±10.49**Δ 16.74 ±3.90*药对 （5 ∶5） 337.96 ±11.45***ΔΔ 14.13 ±2.17**Δ药对 （6 ∶4） 295.46 ±12.12**Δ 17.28 ±3.12*药对 （7 ∶3） 283.94 ±10.42* 17.69 ±3.93*

3.3 对免疫器官指数的影响 与空白对照组比较， 大枣组及各配比药对组对两个免疫器官指数的增大作用显著（P＜0.05）， 说明大枣及各配比药对能促进正常小鼠免疫器官发育， 而黄精组对免疫器官的影响不显著 （P＞0.05）， 见表 3。

表 3 各给药组对免疫器官指数的影响 （n=10，）

表 3 各给药组对免疫器官指数的影响 （n=10，）

注： 与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01； 与黄精或大枣比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

组 别 脾脏指数 （ ×10-3） 胸腺指数 （ ×10-3）4.5 ±0.4 3.7 ±0.3阳性对照组 5.9 ±0.2 4.6 ±0.1黄精 4.7 ±0.3 3.8 ±0.1大枣 4.9 ±0.2* 4.0 ±0.2*药对 （3 ∶7） 5.2 ±0.2* 4.3 ±0.2*药对 （4 ∶6） 5.3 ±0.3* 4.5 ±0.1**Δ药对 （5 ∶5） 5.6 ±0.1**Δ 4.6 ±0.2**Δ药对 （6 ∶4） 5.1 ±0.1* 4.3 ±0.1*药对 （7 ∶3） 4.9 ±0.2* 4.2 ±0.2空白对照组*

3.4 对血清溶菌酶的影响 各药对组中血清溶菌酶与空白对照组比较均有显著性差异 （P＜0.05）。 各药对组均可显著提高正常小鼠血液溶菌酶活性， 其中配比为1∶1药对的效果极显著 （P＜0.01）， 见表 4。

表 4 各给药组对血清溶菌酶的影响 （n=10，）

表 4 各给药组对血清溶菌酶的影响 （n=10，）

注： 与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01； 与黄精或大枣比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

组 别 溶菌酶/（ μg·m L-1）8.12 ±1.66阳性对照组 10.97 ±1.35黄精 10.03 ±1.24大枣 10.12 ±1.68药对 （3： 7） 10.47 ±1.32*药对 （4 ∶6） 10.66 ±1.70*药对 （5 ∶5） 10.82 ±1.31**Δ药对 （6 ∶4） 10.62 ±1.47*药对 （7 ∶3） 10.42 ±1.73空白对照组*

4 讨论

由于黄精与大枣药对在中药复方中的配伍比例不一，本实验对黄精、大枣单用及精枣药对合用不同配伍比例水煎剂的抗氧化和提高免疫力作用进行了研究，结果证明黄精-大枣药对 1 ∶1 的配伍比例的抗氧化、 提高免疫力作用最强。

生物机体内的超氧化物歧化酶 （SOD） 具有显著的清除自由基作用，随着年龄的逐渐增长，其活性开始降低而诱导脂质过氧化， 脂质过氧化的最终代谢产物 MDA增多将诱导细胞整合性能下降［6-11］。 SOD和 MDA是检测提高体内抗氧化能力最常用的指标。同时，自由基引发的脂质过氧化，能够诱导核酸代谢错误，酶活性降低等，对细胞产生较严重的损伤作用［12］。 本实验研究表明黄精和大枣药对可显著清除羟基自由基， 提高 SOD活性和降低 MDA水平，实验结果表明精枣药对抗氧化的机制除了能直接清除自由基还可能和提高 SOD活性有关。

脾脏、胸腺是哺乳动物最主要的中枢和外周免疫器官，小鼠的免疫器官指数是其免疫器官发育和反映免疫应答强弱的重要指标［13］； 溶菌酶是固有免疫分子， 它能水解细菌细胞壁的肽聚糖使细菌崩解死亡，是机体非常重要的非特异性防御因子。本实验表明黄精和大枣药对可提高小鼠的免疫器官指数及血清溶菌酶水平，可以显著提高非特异性免疫［14-16］。

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R285.5

： B

： 1001-1528（2014）03-0614-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.038

2013-02-14

山东大学科技创新项目 （A12018）

褚福龙 （1992—） ， 男， 本科在读。 Tel： 18769198364， E-mail： 827901972@qq.com

*通信作者： 张崇禧 （1954—）， 男， 博士， 教授， 研究生导师， 执业药师， 研究方向： 中药现代化及药理。 Tel：（0631）5675313， E-mail： zcx_11@126.com