济源市猪链球菌病病原的分离鉴定及药敏试验

李天丽 卫春晓

（河南省济源市动物卫生监督所，河南济源 454650）

济源市猪链球菌病病原的分离鉴定及药敏试验

李天丽 卫春晓

（河南省济源市动物卫生监督所，河南济源 454650）

选取36家规模猪场疑似猪链球菌病猪的病料，进行细菌分离鉴定和生化试验，共分离到14株细菌，其中C群兽医链球菌8株，D群猪链球菌6株。药敏试验表明，药物最敏感的是替米考星、头孢氨苄、阿米卡星、头孢呋辛钠。

猪链球菌病；分离；鉴定；药敏试验

猪链球菌病是是由C、D、E及L群链球菌引起的猪的多种疾病的总称。主要特征是急性出血性败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎以及关节炎。猪链球菌有多种型（1～34、1/2）以及一些无法定型的菌株。目前链球菌属共有30多种，比较常见的有10余种[1]。目前，济源市规模猪场依然有该病发生，给养猪业造成重大损失。为了解该病血清型以及药物敏感性，笔者开展了本次试验，现报告如下。

1 试验材料与方法

1.1 试验材料

（1）病料：从济源市承留镇、大峪镇、思礼镇等9个乡镇36家规模猪场，无菌采集疑似猪链球菌病的猪关节液、心、肝、脾脏和肠系膜淋巴结病料。

（2）培养基、试剂和药品：细菌微量生化试管，进口兰氏分群试剂盒，BHI培养基，血液琼脂平板，5%绵羊血琼脂平板，革兰氏染色液，血清肉汤、0.1%美兰牛乳、pH9.6肉汤、6.5%NaCl肉汤、马尿酸钠、葡萄糖、乳糖等各种生化培养基等由平顶山市重大动物疫病防控中心自行配制；药敏纸片购自上海微生物试剂有限公司，替米考星、氨苄西林钠、头孢唑啉钠等13种药敏试验用抗生素。

1.2 方法

（1）病原菌分离鉴定：无菌采取病料，制作触片，干燥、火焰固定后进行革兰氏染色镜检。挑去疑似链球菌病料接种在血液琼脂平板，24h，37℃后，取菌落接种在BHI培养基，24～48h，37℃进行选择性增菌培养；增菌培养后，划线分离在5%绵羊血琼脂平板，观察菌落特征，纯培养及生化特性检查。

（2）生化试验：用分离菌纯培养物进行0.1%美兰牛乳、pH9.6肉汤、6.5%NaCl肉汤、马尿酸钠、葡萄糖、乳糖等各种生化试验，参照文献方法进行[2]。

（3）菌株分群：采用进口兰氏分群试剂盒。

（4）药敏试验：菌液的制备和抑菌圈的测定参照文献的方法进行[3]。将分离菌株均匀涂布于鲜血琼脂平板，贴上卡那霉素、替米考星、头孢氨苄、阿米卡星、氟哌酸、头孢呋辛钠、硫酸新霉素、环丙杀星、青霉素、头孢噻肟、先锋霉素、阿莫西林12种药敏纸片，用游标卡尺测量每个药敏纸片的抑菌圈直径，根据判定标准判定细菌对药物的敏感性。

2 结果

2.1 病原菌分离鉴定

镜检可见单个、成对或短链或长链排列，菌体直径1～2μm，球形或椭圆形，革兰氏阳性。镜检结果见图1。

2.2 分离培养

在鲜血平板上能长成3～4mm的粘液样大菌落，光滑、灰白色、中央隆起、边缘整齐、圆形的菌落，完全溶血，呈典型的β溶血。

2.3 菌株分群（分C、D两群）

能水解精氨酸，发酵乳糖、水杨苷、山梨醇产酸，不液化明胶，不还原硝酸盐。另外一种是猪链球菌2型在鲜血平板上长成1～2mm、呈浅灰色或半透明的小菌落，具α和β双重溶血，能发酵乳糖、菊糖、海藻糖、水杨苷、棉实糖，不发酵甘露醇和山梨醇。

2.4 生化试验（详见见表1）

2.5 药敏试验

在12中抗生素中，猪链球菌对药物最敏感的是替米考星、头孢氨苄、阿米卡星、头孢呋辛钠，其次是卡那霉素、氟哌酸、青霉素、硫酸新霉素，对环丙杀星、头孢噻肟、先锋霉素、阿莫西林不敏感。

3 讨论与小结

按照兰氏分类，链球菌分为从A-V（缺少I、J）共20个群，每个群又分为若干型或者亚型，引起猪链球菌病主要是D群的Ⅱ型，猪链球菌有35个血清型。从本试验结果看出，济源市规模化猪场猪链球菌的菌株主要是C兽医链球菌群和D群，共14株，其中C群分离出6株，D群分离出8株。这为今后济源市猪链球菌病的预防和治疗提供了依据。

在猪链球菌病的治疗中，很多养猪场户滥用抗生素，导致细菌对常用抗生素耐药性增强。本药敏试验表明，病菌对环丙杀星、头孢噻肟、先锋霉素、阿莫西林不敏感，规模化养猪场重在对疾病的预防，会定期添加抗生素，这些药物在规模养殖场大量长期使用或者不科学轮换交替使用抗生素有关。因此，建议规模养殖场在防控该病或者其他疫病使用抗菌药物时，禁止长期添加和滥用药物，以减少耐药菌株大量产生和扩散。有条件的猪场可以定期开展疫病监测和药敏试验，以便准确使用抗生素。

[1] 杜小平，郑俊梅.猪链球菌病研究进展浅谈[J].国外畜牧学（猪与禽），2009，（3）：77-78.

[2] 姚火春.兽医微生物学实验指导[M].北京：中国农业出版社，2002：36-42．

[3] 吴 静，贾桂珍.猪链球菌病病原的分离鉴定及药敏试验[J].江苏农业科学，2011，39（6）：349-351．