甲胎蛋白异质体检测对鉴别良恶性肝病的价值

刘焕英，刘爱玲，赵凤梅

甲胎蛋白（AFP）主要来自胚胎的肝细胞，胎儿出生后约2周甲胎蛋白从血液中消失，因此正常人血清中AFP的含量尚不到20 μg／L。目前，临床上广泛认可AFP可作为肝细胞癌的诊断以及疗效观察指标，但AFP属于胚胎性蛋白，对诊断肝癌有局限性［1］。因部分良性肝病、生殖系统和胃肠道的一些恶性肿瘤中AFP也升高，且部分肝癌患者AFP始终持续低浓度阳性。因此，肝癌早期诊断的特异性指标具有重要的临床研究意义。研究发现，血清总AFP含AFP－L1，来自良性肝病，占其主要部分；AFP－L2来自孕妇；而AFP－L3则为肝癌细胞特异［2］。总AFP因糖链组成和结构上与植物血凝素亲和性不同，采用电泳法分离出小扁豆凝集素结合AFP－L3，其正常参考值为10%～15%，＞15%即可诊断肝细胞肝癌（HCC）。即使总AFP仅轻微升高，或无影像学证据，都提示有发展为HCC可能，凡是AFP－L3＞15%的患者应严密监测并定期随访［3］。AFP在患者不同病理情况下产生的分子糖链结构各不相同，肝癌病理情况下主要产生与小扁豆凝集素具有强结合力的甲胎蛋白异质体（AFP－L3），美国食品药品监督管理局 （FDA）2005年批准检测AFP－L3指标用于肝癌预警，并把AFP－L3诊断肝癌的阳性临界值定为10%［4］。笔者采用亲和微量离心柱法分离AFP－L3，应用电化学发光法对不同肝病患者总AFP和AFP－L3进行检测，探讨AFP－L3在鉴别良恶性肝病中的应用价值。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选择笔者所在医院 2009年 07月—2013年06月肝病门诊及住院患者287例的AFP阳性血清（AFP＞20 μg／L），根据患者的临床诊断分为 5组：A 组为 AFP≥400 μg／L 的肝癌患者 86 例，男 46 例，女 40 例，年龄 31～71岁，平均（61．5±10．31）岁；B 组为 AFP＜400 μg／L 的肝癌患者62 例，男 45 例，女 17 例，年龄 25～69 岁，平均（51．3±11．03）岁；C组为肝硬化患者59例，男32例，女27例，年龄28～68岁，平均（47．5±8．41）岁；D 组 38 例慢性肝炎患者，男 25 例，女 13 例，年龄 18～67 岁，平均（37．11±8．34）岁；E 组为自身免疫性肝炎患者42例，男16例，女26例，年龄35～59岁，平均（36．1±10．64）岁。以上 5 组患者的血清标本分离后冻存－70℃环境中。

1．2 仪器与试剂 罗氏COBAS 8000免疫生化一体机及配套试剂（罗氏公司）；亲和微量离心柱系统（北京热景生物技术有限公司）。

1．3 测定方法 AFP－L3的分离采用亲和微量离心柱法，柱内预先装有耦联了小扁豆凝集素的琼脂糖，可特异性地结合AFP－L3，当血清流过离心管时，样本中的AFP－L3与管内亲和介质结合，经过清洗和离心洗脱过程，获得含有AFP－L3的样本，然后用电化学发光法检测总AFP和AFP－L3的含量，计算 AFP－L3 占 AFP 总量的百分比，AFP－L3／AFP＞10%为阳性判断标准［5］。

1．4 统计学方法 采用SPSS10．0统计软件进行数据处理。不同组别间 AFP－L3阳性率比较采用 χ2检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

A、B、C、D 及 E 组患者血清 AFP－L3／AFP 阳性者分别为77 （89．53%）、50 （80．65%）、6 （10．17%）、4 （10．52%） 及 3（7．14%）例。肝癌组与非肝癌组AFP－L3／AFP阳性率比较差异有统计学意义（85．81%vs 9．35%，χ2＝124．34，P＜0．01）；肝癌AFP≥400 μg／L 组与 AFP＜400 μg／L 组间、 肝硬化组与慢性肝炎组（P＝0．08，P＞0．05）、慢性肝炎组与自身免疫肝炎组（P＝0．06，P＞0．05）、自身免疫肝炎组与肝硬化组（P＝0．07，P＞0．05）的AFP－L3／AFP阳性率比较差异均无统计学意义。

3 讨 论

肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种，人们日常说的肝癌指的多是原发性肝癌。原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约60万，居恶性肿瘤的第五位。原发性肝癌按细胞分型可分为肝细胞型肝癌、胆管细胞型肝癌及混合型肝癌。甲胎蛋白由新生的幼稚肝细胞分泌，胎儿的肝细胞没有发育（分化）完全，分泌的甲胎蛋白量很大，所以孕妇的甲胎蛋白会呈阳性。过去一直认为是诊断原发性肝癌的特异性肿瘤标志物，具有确立诊断、早期诊断、鉴别诊断的作用［6］。近年大量的临床却发现，部分肝硬化患者会长期出现AFP达到上千，但多年都没有肝癌的迹象；同时发现约20%的晚期肝癌患者，直至病故前，AFP 仍不超过 10 μg／L［7］。

本文结果显示，AFP≥400 μg／L 和 AFP＜400 μg／L 的肝癌组其总AFP－L3／AFP阳性率明显高于非肝癌组，差异有统计学意义，表明用本方法检测的AFP－L3／AFP＞10%为诊断指标时，可以有效地区分良、恶性肝病患者；而低浓度AFP阳性肝癌组与高浓度AFP阳性肝癌组相比，其AFP－L3阳性率差异无统计学意义，表明AFP－L3用于肝癌诊断不受AFP≥400 μg／L作为肝癌诊断标准的限制，如果患者血清中总AFP只有轻微升高，而AFP－L3所占比例超过10%，就提示肝癌发生的可能性较大［8］。对这样的患者进行随访和严密监控是很有必要的。笔者同时对非肝癌患者之间AFP－L3／AFP阳性率进行比较，结果显示差异均无统计学意义，与文献报道基本一致［9］。

［1］韩 风，邱大鹏，陈伟瑜，等．甲胎蛋白异质体和甲胎蛋白信使核糖核酸用于诊断肝细胞癌［J］．中国临床医学，2010，17（1）：45－46．

［2］沈 铮，沈 霞．甲胎蛋白及其异质体检测的临床应用价值［J］．上海医学检验杂志，2000，15（6）：361－362，370．

［3］邝妙欢，欧阳文婷，林建华，等．甲胎蛋白异质体3、异常凝血酶原、甲胎蛋白检测肝细胞癌的对照研究［J］．中华普通外科学文献（电子版），2010，04（4）：311－314．

［4］ 董怀平，王 力，赵岐刚，等．AFU、AFP－L3、HCY联合检测对原发性肝癌早期诊断临床价值的研究［J］．中国实验诊断学，2007，11（4）：485－487．

［5］高 锦，徐爱芳，郑虹英，等．微量离心柱法检测AFP－L3的临床应用研究［J］．中华实验和临床病毒学杂志，2010，24（6）：461－463．

［6］ 张国庆，王 斌，刘振疆，等．AFP、AFP－L3和AFU联合检测在原发性肝癌诊断中的应用［J］．新疆医科大学学报，2005，28（2）：150－152．

［7］ 周文策，易剑锋，李玉民．AFP－L3、GP73 及 DLC－1在原发性肝癌中的研究进展［J］．国际外科学杂志，2009，36（10）：712－715．

［8］ 王向臣，曲建香，鹿理友，等．AFP、AFP－L3、GP73 联合检测在肝癌诊断中的应用［J］．医学检验与临床，2011，22（6）：50－52．

［9］ 蒋 英，谢 延，宫 贺，等．AFP－L3在肝细胞癌早期诊断中的应用价值研究［J］．中国热带医学，2009，9（2）：292－293．