滋阴补肾法防治男性不育症的实验研究进展

郭军华，何清湖*

（湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

滋阴补肾法防治男性不育症的实验研究进展

郭军华，何清湖*

（湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

滋阴补肾法；男性不育症；实验研究进展

世界卫生组织指出正常育龄夫妇同居一年以上，有规律性生活，而未采取任何避孕措施，由男方原因造成女方不孕者，称为男性不育症。通过临床文献的调查和对男性不育患者的中医症候研究发现，肾精亏虚、肾阴不足患者比率从30.0%到81.1%不等，呈逐年升高的趋势，其中某些疾病如精液不液化症患者，肾阴虚比率高达74.0%，而肾阳不足患者比率仅占2.1%至40.0%，且有下降趋势[1-5]。其原因可能是，随着社会的发展与进步，由于人们不良生活习惯的影响如熬夜工作、通宵玩乐，夜晚本应入睡而不眠，阳应入于阴而浮于外，导致阳不入阴、阳长阴消，致使肾中阴液消耗过多，出现肾阴外泄的表现如熬夜后头皮部油脂分泌过多，肾阴不潜阳的表现如熬夜后上火、牙龈红肿、痤疮等，最终导致生育能力日趋下降。由于男性不育中，以肾阴虚、肾精不足者居多，精亦属于阴，故将近10余年来运用滋阴补肾方法治疗男性不育症的实验研究进行总结，为滋阴补肾法治疗男性不育症的作用机制提供一定理论依据。

1 肾阴虚动物造模

动物实验造模至关重要，所造模型能否代表研究疾病的证型，决定了动物实验有无说服力、所得到的数据是否能让人信服。对于肾阴虚的造模方法，主要有以下几种：（1）甲状腺素法。该方法始于1957年，造模周期为21 d，此法的不足主要有：大鼠形体比较消瘦，竖毛、毛发无光泽易脱落，易怒多动，常有打斗行为，尿液颜色较深，粪便形小干燥[6]。该法使用甲状腺素促使机体分解代谢加快而造成全身阴虚模型，不只是单独的肾阴虚的模型，用于研究男性不育不能完全符合实验要求。再者，该方法造模时间较长，后续的治疗时间也较长，这样实验动物就处于老年期，使男性不育的研究缺乏代表性。灌胃甲状腺素后，虽然实验动物出现了阴虚的表现，但是随之也出现了肝阴虚表现——易怒多动、打斗。可能会出现实验动物的相互残杀，尤其是大鼠，最后导致实验无法进行。亦有去势加甲状腺素法[7]，去势后雄性激素分泌减少，和老年男性生理上相似，更符合老年肾阴虚模型，故不适合用于男性不育的研究。（2）甲状腺素加利血平法。该方法始于1977年，造模周期10～20 d。该方法由于利血平的应用，大大缩短了造模时间。动物出现体质量减轻、活动次数减少，易疲劳等肾阴虚表现[8]，但亦有报道发现动物出现萎靡不振、畏寒、少活动、反应迟钝、饮食减少等阳虚表现[9]，这可能和用药时间过长（4周）有关，导致阴损及阳。（3）肾上腺皮质激素法。此法造模周期为4～14 d，但是有人采用sc氢化可的松50 mg/kg，给药5 d，得到肾阴虚模型；sc氢化可的松25 mg/kg，给药10 d，得到肾阳虚模型[10]。虽然此法可以得到符合肾阴虚要求的动物模型，但由于其给药剂量和时间的不同会得到类型相反的模型，剂量和时间难以把握，是该方法的缺陷。而从临床用药来看，此类药物用后多是先导致阳虚，表现为怕冷、体虚易感、肥胖、夜尿多、舌淡苔白有齿痕等，长时间使用后，才会出现阳损及阴的表现，如口干、易上火、小便黄等，与上述造模方法相违背。（4）热性中药法。此法是给实验动物如大鼠灌胃附子、肉桂等热性药物，耗伤体内的阴液而形成阴虚内热的模型[11]。造模时间较长，2～3周左右。由于中药脏腑归经不尽相同，此种方法可以通过选用不同脏腑归经的中药准确制备某个脏腑阴虚模型，更适合于男性不育症的模型复制。（5）左旋谷氨酸单钠法。此法造模后动物出现神疲乏力、爪甲枯燥、睾丸萎缩等肾阴虚表现[12]，但本法多用于新生动物，且成模时间较长，需要12周，更适合由于先天肾阴不足导致不育症的模型复制方法。（6）激怒法。此法造模时间约5～7 d，动物出现活动减少、倦卧、嗜睡、毛无光泽、大便干燥、易激怒等现象[13]，怒伤肝，肝肾同源，由肝阴虚继而引起肝肾阴虚。此法适用于由于工作压力大出现情志异常导致的男性不育症的模型复制。

2 滋阴补肾法对机体的影响

2.1 滋阴补肾法对雄性生殖器官的作用

赵建生等[14]研究发现六味地黄丸对性器官的生长发育有一定的促进作用，幼年雄鼠连续服药14 d，睾丸、附睾及前列腺与体质量之比，较对照组分别增加 10.7%、12.9%和 27.8%。 黄晓兰等[15]通过温水浴构造大鼠睾丸损伤模型，连续14 d给予枸杞子提取物枸杞多糖灌胃，发现枸杞多糖能降低高温引起的生精细胞损伤，促进睾丸生殖细胞正常发育。由此可见，滋阴补肾方剂具有性激素样作用，能明显增加睾丸和附睾的质量和修复其损伤，并可以通过促进和修复附性器官发育，来提高精子质量，增加受孕能力。

2.2 滋阴补肾法对雄性内分泌系统的作用

肾阴虚证与下丘脑-垂体-性腺轴联系密切，而滋阴补肾法能够调整下丘脑-垂体-性腺轴功能。景晓平等[16]研究表明，六味地黄丸能够使雷公藤多苷损伤的大鼠血清中睾酮值明显升高，其原因可能是六味地黄丸能够提高细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达。孙祝美[17]研究表明，左归丸能够提高老年大鼠血清睾酮的含量。由此可见，滋阴补肾方剂，能够通过调整性腺轴的功能，调节雄性内分泌系统继而提高生育能力。

2.3 滋阴补肾法对精液微量元素的影响

微量元素是精子和体内抗氧化酶的重要组成部分。精液微量元素的异常也是引起男性不育症的重要原因之一。吴志荣等[18]通过实验研究发现不同的方法对左归丸中的微量元素提取的效果不一样，同时发现微量元素对生殖系统有直接影响，能够增加小鼠睾丸和精囊腺的质量，是补肾中药的物质基础之一。孙祝美[17]研究表明，左归丸能够提高老年大鼠血清锌(Zn)的含量，其原因可能是左归丸能够改善Zn转运体的水平，从而调节Zn水平。王磊等[19]用原子吸收分光光度法测定发现，六味地黄汤中含有大量的锌、铁、钙、锰、铜等微量元素。可见，滋阴补肾方剂本身就含有多种必需微量元素，通过补充微量元素有效改善生育功能。

2.4 滋阴补肾法对机体抗氧化作用的影响

氧自由基使精子质膜、线粒体膜上的蛋白巯基氧化，膜结构受损，损及精子获能和顶体反应的发生，从而影响精子的受精能力[20-22]。滋阴补肾中药具有抗氧自由基和提高抗氧化酶活性的作用。如孙琳林[23]研究发现，六味地黄丸和左归丸均能提高大鼠总抗氧化能力，同时提高肝组织中过氧化氢酶（CAT）的含量，其原因可能与下调P16蛋白表达有关。赵建生等[14]的研究表明，六味地黄丸能明显降低肝脏与脑中过氧化脂含量，显著升高红细胞中CAT活性和超氧化物歧化酶（SOD）活性，说明六味地黄丸减少自由基对机体的损害作用，是通过提高抗氧化酶的活力来实现的。孙琳林等[24]研究同样发现，六味地黄丸能够提高SOD活性，同时还可以提高谷胱甘肽过氧化物酶活性，降低丙二醛含量，减少海马区脂褐素沉积和超微结构损伤，说明其抗衰老作用可能与提高抗氧化能力、减少脂褐素沉积和减轻脑组织损伤有关。犹如运动过度一样，消耗的氧气超过了体内储存量，机体进行无氧呼吸产生乳酸，当机体肾的阴液不足时，肾化阴阳就不足，各脏器运行出现问题，而产生氧自由基，而滋阴补肾方剂可以提高各脏器中氧自由基清除酶的活性。

2.5滋阴补肾法对其他方面的影响

泌尿生殖道解脲支原体 （Ureaplasma urealyticum，UU）感染影响男性生殖功能。郑毅春[25-26]研究发现，UU感染能引起精子计数明显减少，精子活率降低，精子畸形率增高，精子活力减弱。运用滋阴补肾方剂知柏地黄汤能有效抑制UU生长、繁殖，促进受损组织的修复；降低炎性生精细胞凋亡率；降低精子畸形率，提高精子活率和精子活力。何清湖等[27]发现知柏地黄汤具有抗UU作用，通过下调UU感染诱导的Fas、FasL表达水平，从而达到抗生殖细胞凋亡作用。刘朝圣[28]研究发现，UU感染大鼠生精细胞凋亡效应因子Caspase-3、Caspase-9表达水平增强，导致大鼠生精细胞凋亡增加。知柏地黄汤可以下调Caspase-3、Caspase-9表达水平，通过抗细胞凋亡，提高生育能力。毛武塬[29]研究发现，UU感染大鼠生精细胞Bax、Bak表达水平增强，说明生精细胞凋亡效应因子Bax、Bak的表达增加是促进细胞凋亡的重要因素。知柏地黄汤可以下调Bax、Bak表达水平，通过抗细胞凋亡提高精液质量。李轩[30]研究发现，UU感染会破坏精子膜完整性，导致精子膜尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）含量降低，知柏地黄汤能使精子膜uPA含量上升，提高精子的受精能力，有效治疗UU感染性不育症。

3 思考与展望

从以往的研究可以看出，滋阴补肾法在治疗男性不育症方面有很好的疗效，可以从多个方面和途径改善下丘脑-垂体-性腺轴功能、睾丸生精功能和附睾中精子成熟过程，提高精子质量，从而达到治疗男性不育症。但是“是药三分毒”，滋阴补肾方剂是否具有生殖毒性，尤其是因为男性不育症治疗需要长时间服药，现有相关研究较少，有待进一步探索。《黄帝内经·六元正纪大论篇》提出：“有故无殒，亦无殒也。”[31]具有生殖毒性的滋阴补肾中药能否用于治疗男性不育症，应用于人体代谢情况如何，此亦有待研究。目前临床上对于男性不育症的治疗多采用中西结合的方法，滋阴补肾方剂和西药联合使用，产生协同还是拮抗作用，目前暂未发现此方面的报道，如使用知柏地黄丸联合强力霉素治疗UU感染性男性不育症，两者合用是疗效增强还是减弱，该方面的研究有助于指导临床用药的配伍。临床上，常用滋阴补肾方剂来补肾阳，取意“善补阳者阴中求阳”，如常用三才封髓丹来治疗肾阳不足型男性不育症，然滋阴补肾方剂实现补阳功能的具体作用机制尚不明确，有待进一步研究。此外，肾阴虚证的辨证依据为一组症状，由于目前尚未有实验动物肾阴虚症状评分与分级标准，缺乏统一公认的客观检测指标，造成不同研究团队肾阴虚证程度不相一致，从而影响其结果之间的可比性。对于中医证型动物模型病情资料的量化、规范化和客观化，在中医药学科内部有待形成标准并达成共识。

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（本文编辑 匡静之）

Experimental Study on Prevention and Treatment of Male Infertility by Nourishing Yin and Strenthening Kidney Method

GUO Junhua,HE Qinghu*
(Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China)

nourishing yin and strengthening kidney;male infertility;experimental research

R256.56

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.06.017.057.04

2013－06－04

国家自然科学基金资助项目（81373641）；湖南省科技厅资助项目（2011sk3104）；长沙市科技局资助项目（K1301014-31）；湖南省研究生科研创新项目（CX2012A014）。

郭军华，男，在读博士研究生，主要从事中西医结合男科病研究。

* 何清湖，男，教授，博士研究生导师，E-mail：hqh1111@tom.com。