键合纤维素手性固定相拆分奥美拉唑对映体

邵 红

（郑州人民医院，河南 郑州 450000）

键合纤维素手性固定相拆分奥美拉唑对映体

邵 红

（郑州人民医院，河南 郑州 450000）

目的 建立采用键合纤维素手性固定相拆分奥美拉唑对映体的高效液相色谱法。方法 在正相条件下，采用Chiralpak IB色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）对奥美拉唑对映体进行拆分，考察了流动相组成、流速和柱温对对映体分离的影响。结果 确立了最佳拆分条件：流动相为正己烷-乙醇（90∶10），流速0.8 mL/min，检测波长280 nm，柱温25 ℃。结论 本法简便，准确，适用于奥美拉唑对映体的拆分。

高效液相色谱；键合纤维素手性固定相；奥美拉唑；对映体拆分

奥美拉唑是第一代苯并咪唑类质子泵抑制剂，主要用于胃溃疡、十二指肠溃疡和反流性食管炎等疾病。分子中含有1个手性硫原子，存在1对对映体，其对映体在药动学方面存在明显差异，S-对映体抑酸作用比消旋体更强，更持久[1,2]。目前，采用高效液相色谱法对奥美拉唑进行拆分的报道主要有手性固定相法[3,4]和柱前衍生化法[5]。尚未有采用Chiralpak IB色谱柱对其进行拆分的报道。本文采用Chiralpak IB色谱柱对奥美拉唑对映体进行拆分，同时考察了影响分离的因素：流动相组成、流速和柱温。

1 仪器与试药

Agilent HP1100高效液相色谱仪（1100VWD紫外可见检测器，1100自动进样器，HP化学工作站）；Chiralpak IB色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm；日本大赛璐公司）；BP211D1/10万天平（德国Sartorius公司）；奥美拉唑（外消旋体，中国食品药品检定研究院）；正己烷、异丙醇、乙醇和三氯甲烷（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Chiralpak IB柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：正己烷-乙醇（90∶10）；流速：0.8 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：25 ℃。

2.2 样品溶液的制备与测定

精密称取奥美拉唑1.0 mg置10 mL容量瓶中用乙醇溶解并定容至刻度，得浓度为0.1 mg/mL的样品溶液，经0.45 μm微孔滤膜过滤并超声脱气后取10 μL进样，按所选色谱条件操作，色谱结果见图1。

图1 奥美拉唑对映体手性拆分色谱图

3 讨 论

3.1 流动相组成对分离的影响

在固定流速为0.8 mL/min，柱温为25 ℃，流动相正己烷的比例为90%的条件下，分别选择乙醇和异丙醇为流动相改性剂，考察醇类流动相改性剂对分离的影响（表1）。由表1可知，采用乙醇为流动相改性剂时，奥美拉唑对映体的分离度较大。Chiralpak IB为5 μ硅胶表面共价键合有纤维素-三（3，5-二甲苯基氨基甲酸酯）的色谱柱，其氨基及羰基可以与对映体和醇类形成氢键作用。与异丙醇相比，乙醇和固定相形成氢键的能力较弱，对对映体和固定相的氢键作用点竞争较弱，有利于对映体与固定相之间形成非对映体结合物，从而有利于分离。

此外，由于Chiralpak IB柱将纤维素衍生物共价键合在硅胶基质上，从而拥有更广泛的溶剂耐受性。本文考察了三氯甲烷为流动相改性剂时对分离的影响。结果表明，随着三氯甲烷含量的减少，流动相的洗脱能力降低，容量因子逐渐增大，分离因子和分离度也随之增大。与乙醇为流动相改性剂相比，其分离度较小。因此，选择乙醇为流动相改性剂。

表1 醇的种类对分离的影响

3.2 流动相改性剂比例对分离的影响

固定流速为0.8 mL/min，柱温为25 ℃，选择乙醇为流动相改性剂，考察乙醇比例对分离的影响（表2）。由表3可知，随着乙醇含量的增加，流动相和固定相的分子作用增强，流动相的洗脱能力增强，使对映体的柱保留减弱，容量因子和分离因子下降，分离度也随之降低。乙醇含量在5%时，分离度最大，但出峰时间过长，影响分离效率，故选择流动相为正己烷-乙醇（90∶10）。

表2 醇的比例对分离的影响

3.3 流速对分离的影响

在流动相为正己烷-乙醇（90∶10），柱温为25 ℃的条件下，考察流速对分离的影响。结果表明，随着流速的增加，分离度逐渐减小，在流速为0.4 mL/min时分离度达到最大。随着流速的增加，对映体与固定相的作用时间缩短，不利于对映体与固定相间形成非对映体结合物，故分离度减小。综合考虑出峰时间和分离度，选择流速为0.8 mL/min。

3.4 柱温对分离的影响

固定流动相为正己烷-乙醇（90∶10），流速为0.8 mL/min，考察柱温（20～35 ℃）对分离的影响。结果表明，随着柱温的升高，对映体与固定相之间的结合能力减弱，保留时间变短，分离度降低。低温时，对映体与固定相形成的非对映体结合物比高温时稳定，有利于分离。由于25 ℃接近室温，且分离度较好，故选择25 ℃为柱温。

4 结 论

本文采用Chiralpak IB色谱柱，在正相条件下对奥美拉唑对映体进行拆分，考察了影响分离的因素：流动相组成、流速和柱温。本法简便，准确，适用于奥美拉唑对映体的拆分。

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R975

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：1671-8194（2014）08-0039-02