延寿片质量标准研究

郭 强

（河南省食品药品检验所，郑州 450003）

延寿片收载于 《卫生部药品标准》中药成方制剂第二册，由何首乌、豨莶草、菟丝子、杜仲、女贞子、桑叶等14味中药组成，具有补益肝肾、强壮筋骨之功效。用于肝肾不足，头昏目花，耳鸣重听，四肢酸麻，腰酸无力，夜尿频数，须发早白等症[1]。原质量标准只收载了性状和检查项，并无定性鉴别和含量测定，为了有效地控制该制剂的质量，本文采用TLC法对何首乌、豨莶草进行了鉴别，采用HPLC法测定何首乌中二苯乙烯苷的含量，作为控制本制剂内在质量的指标。

1 材料

Waters2695高效液相色谱仪 （配四元泵、自动进样器、Waters2487紫外检测器）；安捷伦1100高效液相色谱仪 （配四元泵、自动进样器、VWD紫外检测器）；延寿片 （内部自制）；何首乌对照药材 （批号：120934-200507，供鉴别用）；奇壬醇 （批号：111726-200604，供含量测定用）；二苯乙烯苷 （批号：110844-200607，供含量测定用），乙腈为德国Merck公司色谱醇，水为超纯水，其余溶剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1 .1 何首乌的鉴别[2]取本品0.3g，研细，加入三氯甲烷50ml，超声10分钟，放冷，滤过，残渣加乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液浓缩至3ml，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材0.25g，同法制成对照药材溶液。按其处方比例制备不含何首乌的阴性样品，照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法 (附录ⅥB)试验：吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一用羧甲基纤维素钠制备的硅胶H薄层板上使成条状，以三氯甲烷-甲醇 （7∶3）为展开剂，展至约3.5cm，取出，晾干，再以三氯甲烷-甲醇 （20∶1∶1为展开剂， 展至约7cm，取出， 晾干， 置紫外灯 （365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。

2.1 .2 豨莶草的鉴别[2-4]取本品3g，研细，加入三氯甲烷50ml，超声20分钟，放冷，滤过，残渣加入甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取奇壬醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法 (附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用羧甲基纤维素钠制备的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇 （4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。

2.2 二苯乙烯苷的含量测定[2，5-6]

2.2 .1 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，过四号筛，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，摇匀，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，上清液滤过，取续滤液，即得。

2.2 .2 对照品溶液的制备 精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加稀乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。

2.2 .3 阴性对照品溶液的制备 按处方取不含二苯乙烯苷的其他药材，照本制剂的制备工艺制成阴性对照制剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.2 .4 色谱条件 用十八烷基硅烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-水 （25∶75）为流动相，检测波长为320nm，流速1.0ml·min-1， 柱温35℃， 进样量10μl， 理论板数按二苯乙烯苷峰计算应不低于2000。

2.2 .5 阴性干扰试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪。结果表明，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上有色谱峰，而阴性对照色谱中在与对照品色谱相应位置上则未出现明显色谱峰，表明在该HPLC测定条件下，二苯乙烯苷的测定无明显干扰。见图1。

图1延寿片样品HPLC色谱图

2.2 .6 线性关系考察 精密取二苯乙烯苷对照品，分别制 成 浓 度 为 102.4μg/ml、 204.8μg/ml、 307.2μg/ml、409.6μg/ml、 512.0μg/ml的样品， 进样量10μl， 测定峰面积，将进样量与峰面积进行线性回归处理，方程为Y=2087652X-55963 （r=0.9999），二苯乙烯苷在102.4～512.0μg/ml之间呈良好的线性关系。

2.2 .7 精密度 精密吸取同一对照品溶液10μl，重复进样5次，测定峰面积积分值，结果RSD=0.53%，表明精密度良好。

2.2 .8 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 （批号：100204）10μl，分别在0， 2，4，6， 8， 10h注入液相色谱仪中，测定二苯乙烯苷峰面积，结果表明本品在10h内稳定，RSD=0.5%。

2.2 .9 重复性试验 取同一批号 （批号：100204）样品6份，按供试品溶液制备方法制备6份供试液，分别测定二苯乙烯苷含量，结果含量平均值为6.25mg·g-1，RSD=1.2%，表明样品的重复性良好。

2.2 .10 加样回收率试验 取本品已知含量的样品 （批号：100204，二苯乙烯苷含量：6.25mg·g-1）6份，每份约0.3g， 精密加入对照品溶液 （浓度：0.076mg·ml-1，配制方法：精密量取二苯乙烯苷对照品15.20mg，加入稀乙醇溶解并定容至200ml）25ml，按上述含量测定方法进行测定，结果见表1，平均回收率为100.0%，RSD=2.17%。

表1二苯乙烯苷回收率测定 (n=6)

2.2 .11 样品测定 取10批样品按供试品溶液制备方法制成供试品溶液，注入液相色谱仪，按2.2.4的色谱条件进样并按外标一点法测定，测定十批样品的含量测定结果见表2。

表2样品含量测定

根据表2结果，10批样品含量测定结果的平均值为6.25mg·g-1，按含量结果平均值的80%折算成每片的含量作为含量测定的指标，暂定本品每片含何首乌以二苯乙烯苷（C20H22O9）计，不得少于5mg。

3 讨论

3.1 指标选定依据 何首乌为方中君药，具有解毒、消痈、截疟、润肠通便的疗效，用于疮痈，瘰疬，风疹瘙痒，久疟体虚，肠燥便秘。制法中一部分何首乌与黑豆煎煮浓缩成稠膏，具有补肝肾、益精血、乌须发、强筋骨、化浊降脂的功效，主要用于血虚萎黄，眩晕耳鸣，须发早白，腰膝酸软，肢体麻木，崩漏带下，高脂血症。二苯乙烯苷是何首乌的主要药理活性成分，因此将鉴别何首乌对照药材和何首乌中二苯乙烯苷的定量列入本品质量标准。豨莶草为方中臣药，具有祛风湿、利关节、解毒的功效，用于风湿痹痛，筋骨无力，腰膝酸软，四肢麻痹，半身不遂，风疹湿疮。选定豨莶草列入本品鉴别项。

3.2 薄层鉴别方法选定过程 薄层色谱研究中，曾选定对桑叶、地黄、牛膝进行鉴别研究，结果供试品色谱相应的位置上，斑点微弱不易见，同时阴性对照有干扰。考虑是处方投料较少，同时处方药味较多。考虑暂不列入标准。

3.3 含量测定方法的选择 参照相关文献，二苯乙烯苷含量测定方法比较成熟，而且HPLC方法准确度高，专属性好。

3.4 含量测定提取方法选择 含量测定中，对供试液提取溶剂选用了甲醇、70%甲醇、乙醇、稀乙醇四种，结果只有稀乙醇提取的二苯乙烯苷含量相对较高，且药典何首乌项下也是用稀乙醇提取，故选定稀乙醇作为提取溶剂。提取方法比较了超声提取和回流提取，结果同为30分钟时间条件下，回流所得含量更高；加入稀乙醇量比较了10ml、25ml、50ml，结果同样条件下，10ml所得含量结果较小，而25ml与50ml的结果接近，故选用加入稀乙醇25ml，回流30分钟作为本品的提取方法。

[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂，第二册[S].北京，1990：98.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典，一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：164-165，345-346.

[3]林达，洪美华.薄层色谱法鉴别心舒宁片中的豨莶草[J].现代食品与药品杂志，2007，17（4）：41-42.

[4]王术平，张淑香，张彦文，等.舒乐冲剂中豨莶草的定性鉴别[J].中国中医药现代远程教育，2011，9（5）：188.

[5]李涛，王天志.HPLC测定制首乌及首乌延寿片中二苯乙烯苷的含量[J].华西药学杂志，2005，20（5）：436-438.

[6]陈小凯，段启，何伟，等.麒麟丸质量标准的提高研究[J].中国药房，2013，24（23）：2164-2166.