浙东地区汉族人群低密度脂蛋白受体基因rs2228671多态性与颅内动脉瘤的关系分析

祝捷，张辉

浙东地区汉族人群低密度脂蛋白受体基因rs2228671多态性与颅内动脉瘤的关系分析

祝捷，张辉

目的探讨低密度脂蛋白受体基因（LDLR）单核苷酸多态性位点rs2228671与浙东地区汉族人群颅内动脉瘤患病风险因素之间的关系。方法在162个颅内动脉瘤患者及113个对照组中，采用病例-对照研究的方法对rs2228671单核苷酸多态性位点进行颅内动脉瘤患病风险的分析。结果颅内动脉瘤组和对照组的基因型频率及等位基因频率差异无统计学意义（＞0.05）。结论rs2228671-T与浙东地区汉族人群颅内动脉瘤患病风险没有关联性。

颅内动脉瘤；动脉硬化；低密度脂蛋白受体；单核苷酸基因多态性

颅内动脉瘤（IA）是蛛网膜下腔出血的首要原因[1]，该疾病的发生发展与环境因素和遗传因素是密不可分的[2]，且动脉硬化在诸多的动脉血管影响因素中有着主导的作用。血液中低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）浓度升高会增加IA的患病危险性[3]。血液中低密度脂蛋白受体蛋白（LDLR）主要负责结合并清除多余的胆固醇，在胆固醇代谢调节中发挥重要的作用[4]。

LDLR基因突变会引发体内血脂代谢异常，LDLR基因的突变率是引起家族性高胆固醇症（FH）的主要因素[3]，而FH是动脉粥样硬化性疾病的重要致病因素。近年来全基因组关联分析发现LDLR基因突变与血脂异常和动脉硬化有着密切的关联性[5]。目前国内外对LDLR与动脉硬化之间的关系主要是围绕着LDLR基因的多态性位点展开的。有研究发现，在欧洲人群中LDLR基因的rs2228671（C/T）位点多态性与LDLC水平以及冠状动脉粥样硬化发病密切相关[6]。本研究选取浙东地区的162例IA患者和113例非冠心病对照组，采用病例对照研究的方法，探讨了在中国人群中LDLR基因单核苷酸多态性位点与颅内动脉瘤发病的相关性。报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2009年5月至2012年4月浙江省舟山市中医骨伤联合医院及合作医院经脑血管造影检测患者162例，其中男113例，女49例；年龄（63.29±10.20）岁。此外，113例对照组样本来自于医院体检，男56例，女57例；年龄（59.24±9.68）岁。本实验参与的研究对象均为浙东地区汉族人，并经检查排除先天性心脏病、心肌病和严重肝及肾疾病等系统性疾病。

1.2 方法（1）DNA提取：经患者知情同意后，于冠状动脉造影检查时抽取动脉血10 ml，EDTA抗凝保存于4℃，长期保存于－20℃。常规苯酚-氯仿法抽提白细胞基因组DNA，核酸蛋白测定仪检测DNA质量与浓度后，－20℃保存。（2）基因型分析：合成单核苷酸多态性rs2228671引物序列。采用该引物对所有DNA样本进行PCR扩增，PCR反应条件分别为：94℃预变性15 s，然后按照每个循环94℃20 s、56℃30 s、72℃1 min进行45个循环，最终72℃延伸3 min。扩增后产物用于SEQUENOM Mass-ARRAY iPLEX平台按照其说明书进行基因型分析[7]。

1.3 统计方法采用Arlequin软件（version 3.5）计算基因型是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，＞0.05为符合该定律[8]。用CLUMP22软件分析病例对照组的基因型及等位基因频率的差异。使用Power and Sample Size Calculation软件（version 3.0.43，Nashville，Tennessee，USA）对研究的样本量进行Power分析[9]。双侧＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两组LDLR基因rs2228671多态性的基因型和等位基因进行分性别进行分析，见表1。对照组rs2228671基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律（＞0.05）。rs2228671位点在颅内动脉瘤组中均存在C/C（97%）、C/T（2%）、T/T（1%）3种基因型；对照组中仅发现C/C（98%）和C/T（2%）2种基因型。全部样本及男女分组中基因型和等位基因分布差异均无统计学意义（＞0.05）。对rs2228671多态性位点的显性模式进行分析，发现颅内动脉瘤组和对照组差异无统计学意义（＞0.05），见表2。

3 讨论

血液中LDLR浓度的变化会引起胆固醇的代谢异常，LDLR基因作为FH的主要致病基因，已被证明与动脉粥样硬化、高血压及冠心病有着密切关系[10]。LDLR基因一旦发生突变，有可能引发血液中LDL-C水平升高而出现动脉病变的早期症状[3]。

LDLR基因位于19p13.2，长度45kb，包含18个外显子和17个内含子。LDLR编码839个氨基酸组成的成熟蛋白，位于细胞膜表面，在胆固醇代谢调节中发挥着重要的作用[4]。rs2228671位于LDLR基因的第二个外显子[11]。近年来，多个全基因组关联研究发现在LDLR基因中的单核苷酸多态性位点（rs599839，rs4970834，rs646776，rs599839）与血液中LDL-C水平和动脉粥样硬化是密切相关的[12]。此外，研究表明rs2228671的T等位基因能有效减少血液中LDL-C浓度，并且与降低动脉粥样硬化和心肌梗死（MI）患病风险因素密切相关l[6]。

本研究发现rs2228671（C/T）的多态性分布具有种族差异。在HapMap计划和1000 Genomes计划中，欧洲人群中该多态性的等位基因频率为10%～17%，在非洲人群中占2%～3%，而在亚洲人群中占0～1%。本研究结果显示浙东地区人群的T等位基因频率在CHD（2%）和对照组（1%）分布较低。说明浙东地区汉族正常健康人群的rs2228671-T的等位基因型频率分布符合亚洲人群的分布特征，而与欧洲人群有明显差异。这种分布的差异性可能是由于不同种族和群体之间等位基因频率存在异质性。本研究未发现两组数据间基因型频率及等位基因频率差异有统计学意义（＞0.05）。这说明rs2228671-T多态性可能与浙东地区汉族人群的颅内动脉瘤无关。此外，本样本的Power仅为18.10%，因此不能排除样本量较少是导致阴性结果的主要原因。

表1 两组LDLR基因rs2228671多态性位点的基因型及等位基因频率分布

表2 两组LDLR基因rs2228671多态性位点显性模式分析

综上所述，本研究显示LDLR基因的rs2228671与浙东地区人群的颅内动脉瘤无明显关系。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.12.007

R743.4

A

1671-0800(2014)12-1477-03

316000 浙江省舟山，舟山市中医骨伤联合医院

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