泥鳅冻干粉抗CCl4小鼠肝纤维化作用

张倩，商萌萌，凌去非，刘春宇，*

（1.苏州大学药学院，江苏苏州215123；2.苏州大学水产研究所，江苏苏州215123）

泥鳅冻干粉抗CCl4小鼠肝纤维化作用

张倩1，商萌萌1，凌去非2，刘春宇1，*

（1.苏州大学药学院，江苏苏州215123；2.苏州大学水产研究所，江苏苏州215123）

采用CCl4小鼠肝纤维化模型，给予不同剂量泥鳅冻干粉，检测小鼠血清中ALT、AST活性及肝组织中羟脯氨酸（Hyp）含量，并观察肝组织病理变化，探讨泥鳅冻干粉抗CCl4小鼠肝纤维化作用。结果表明，与模型组相比，泥鳅粉冻干粉明显降低CCl4诱导的肝纤维化小鼠血清ALT、AST活性，显著降低肝组织Hyp含量（P＜0.05）。病理学观察结果，泥鳅粉冻干粉给药组小鼠胶原纤维沉积明显减轻，假小叶结构明显减少。泥鳅冻干粉能预防小鼠肝纤维化的形成，具有抗肝纤维化作用。

泥鳅冻干粉；肝纤维化；CCl4

泥鳅（Misgurnus anguillicaudatus Cantor）属鳅科，药食两用，肉或全体入药，性味甘、平，收载于《中药大辞典》[1]，具有补脾益气、保肝除黄等功效，对治疗肝炎、小儿盗汗、痔疮、皮肤瘙痒、跌打损伤、手指疔、阳痿、乳痈等症有一定疗效。目前已从泥鳅中提取多种营养成分，蛋白、多糖、氨基酸等[2]，并有提高免疫力、抗炎、抗氧化[3-5]等多种功效。我们先前的实验证明泥鳅冻干粉具有显著的保肝作用，本文报道泥鳅冻干粉抗CCl4小鼠慢性肝纤维化的作用。

1材料与方法

1.1 泥鳅冻干粉制备

泥鳅去头，去内脏后，冻干粉碎，过30目筛制备，即得泥鳅冻干粉（Misgurnusanguillicaudatus lyophilized powder，MLP），临用前用生理盐水配成混悬液。

1.2 实验动物

ICR小鼠，雄性，清洁级，体重18 g～22 g，由苏州大学实验动物中心供应，实验动物生产许可证（SCXK（苏）2007-0007），实验动物使用许可证（SYXK（苏）2007-0035）。

1.3 实验试剂及器材

CCl4（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：20100107），用花生油配成20%油溶液；联苯双酯片（江苏鹏鹞药业有限公司，批号：1010071）磨粉，用生理盐水配成混悬液；谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）试剂盒、羟脯氨酸（Hyp）试剂盒（南京建成生物工程研究所）。紫外可见分光光度仪UV-2401PC：日本岛津；高速冷冻离心机：Cwntrifuge5417R eppendorf。

1.4 模型制备及处理

60只ICR小鼠随机分为6组，每组10只。分别为空白组、模型组、阳性对照组、泥鳅冻干粉低剂量组、中剂量组和高剂量组。空白组和模型组每天口服生理盐水0.2mL/10g，其余各组每天口服相应的药物0.2mL/10 g，阳性对照组给予联苯双酯，除空白组外每3天腹腔注射20%四氯化碳0.1mL/10 g，空白组腹腔注射等体积的花生油。连续造模1个月，眼眶取血，不加抗凝剂，放置30min，8 000 r/min离心4min，制备血清。取肝脏加冷生理盐水制成10%肝匀浆，-20℃保存；取肝左叶小块置10%甲醛液固定做病理切片。

1.5 检测指标及方法

按试剂盒说明测血清中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）活性（赖氏法）。测肝组织中羟脯氨酸（Hyp）含量（碱水解法）。病理组织采用常规石蜡切片，HE染色，Masson三色染色，光镜下观察。根据2000年西安全国肝病会议通过的纤维化SSS半定量计分系统，以此评判肝纤维程度。纤维化半定量计分系统。

表1 SSS纤维化半定量计分系统Tab le1 Sem i-quantitative score system of fibrosis

1.6 统计学分析

2实验结果

2.1 泥鳅冻干粉对肝纤维化小鼠血清指标的影响

如表2所示，与空白组相比，模型组小鼠血清中ALT、AST活性均显著提高（P＜0.01），说明模型组小鼠肝明显损伤，造模成功。与模型组相比，联苯双酯阳性对照组ALT、AST活性显著降低（P＜0.01），说明联苯双酯能明显减轻小鼠肝损伤程度。泥鳅粉低、中、高3个剂量组与模型组相比，酶活性均有明显下降，尤其高剂量组效果最明显（P＜0.01）。结果提示，泥鳅冻干粉有保肝作用。

表2 泥鳅冻干粉对肝纤维化小鼠血清ALT和AST的影响（±S，n=10）Table2 EffectsofM LP on serum ALT and AST activity in CCl4-induced fibroticmouse（±s，n=10）

表2 泥鳅冻干粉对肝纤维化小鼠血清ALT和AST的影响（±S，n=10）Table2 EffectsofM LP on serum ALT and AST activity in CCl4-induced fibroticmouse（±s，n=10）

注：*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比；“—”表示不给药。

分组剂量/（mg/kg）ALT（U/L）AST（U/L）空白组—48.980±6.308 40.011±12.346模型组—100.736±17.739 122.904±12.218联苯双酯组150 62.186±6.079**55.574±24.468** MLP低剂量组50 71.586±14.315 111.699±5.571* MLP中剂量组100 70.269±9.683*66.544±7.186* MLP高剂量组200 60.120±16.966*62.331±8.041**

2.2 泥鳅冻干粉对肝纤维化小鼠Hyp的影响

羟脯氨酸（Hyp）是肝纤维化的特征物质。如表3所示。

表3 泥鳅冻干粉对肝纤维化小鼠羟脯氨酸含量的影响（±s，n=10）Table3 EffectsofM LP on contentof Hyp in CCl4-induced fibroticmouse（±s，n=10）

表3 泥鳅冻干粉对肝纤维化小鼠羟脯氨酸含量的影响（±s，n=10）Table3 EffectsofM LP on contentof Hyp in CCl4-induced fibroticmouse（±s，n=10）

注：*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比；“—”表示不给药。

分组剂量/（mg/kg）羟脯氨酸含量/（μg/g湿重）空白组—67.021±13.782模型组—135.781±30.011联苯双酯组150 95.507±32.235* MLP低剂量组50 120.867±47.849 MLP中剂量组100 106.919±26.201* MLP高剂量组200 93.715±19.111**

与空白组相比，模型组的羟脯氨酸含量明显升高（P＜0.01），与模型组相比，泥鳅冻干粉给药组羟脯氨酸含量明显下降（P＜0.05），尤其高剂量组效果好（P＜0.01）。结果提示，泥鳅冻干粉具有一定的抗CCl4小鼠肝纤维化作用。

2.3 泥鳅冻干粉对小鼠肝组织病理学影响

图1肝组织HE染色和图2Masson染色结果可以看出：空白对照组中肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列，肝小叶结构正常，汇管区无炎性细胞浸润，无纤维增生。肝纤维化模型组中正常肝小叶结构破坏，肝细胞呈气球样变性、羽毛样变性，有桥接坏死、界板坏死，汇管区有大量炎症细胞浸润。胶原纤维构成纤维间隔，完整的假小叶形成，说明造模成功。泥鳅冻干粉3个剂量组中肝小叶结构基本正常，肝细胞肿大和变性程度都轻于模型组。尤其高剂量组细胞基本正常，炎症细胞少见，胶原纤维少。

图1 泥鳅冻干粉对CCl4肝纤维化小鼠病理变化的影响Fig.1 EffectofM LP on pathological changesof liver fibrosis in CCl4-induced fibroticmouse

表4 小鼠SSS肝纤维化半定量计分（n=10）Table4 EffectsofM LP on hepatic fibrosisscoreof SSS in CCl4-induced fibroticm ouse（n=10）

有效疗效判断标准：肝纤维化SSS评分较治疗前下降≥2分。联苯双酯组和泥鳅粉给药组与模型组相比，评分均下降＞2分，说明泥鳅粉给药组均有治疗肝纤维化的疗效。

3讨论

肝病是目前发病率很高的疾病之一，肝纤维化是肝病发展的必经阶段，是所有慢性肝病的共同病理基础。肝纤维化是由于多种因子刺激，激活肝星状细胞（HSC），致使细胞外基质（ECM）异常增多或过度沉积。目前认为肝纤维化是可逆的，如何防治肝纤维化，成为肝病研究的热点[6]。

泥鳅性味甘、平，传统功效有补脾益气、保肝除黄、清热解毒、祛湿邪等。近代用于传染性肝炎和消渴症。CCl4可诱导小鼠肝纤维化模型，且方法简便、病变典型，是最常用的造模方法[7]。本实验采用20%四氯化碳造模，Masson染色观察到胶原纤维构成纤维间隔，假小叶形成，造模成功。泥鳅冻干粉给药后，血清中ALT、AST活性明显下降（P＜0.05），羟脯氨酸的含量也显著降低，同时从病理切片可观察到给药后肝小叶结构正常，胶原纤维少，提示泥鳅冻干粉能明显减轻小鼠肝纤维化程度，但其作用机制尚不明确，有待进一步研究。

[1]江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1992: 1457-1458

[2]钦传光,韩定献,董先智,等.泥鳅及其提取物中营养成分的研究[J].食品科学,2002,23(2):123-125

[3]钦传光,黄开勋,徐辉碧.泥鳅多糖抗炎作用的实验研究[J].中国药理学通报,2001,17(6):715-716

[4]李红枝,黄青松,陈伟强,等.泥鳅有机提取物抗氧化作用的实验研究[J].中国中医药科技,2005,12(4):231-232

[5]李金华,顾振纶,张玉英,等.泥鳅粉强身保健作用的实验研究[J].江苏中医,2000,21(1):42-43

[6]Tsukada S,Paisons C J,Rippe R A.Mechanismsof liver fibrosis[J]. Clinica Chinica Acta,2006,364(1):33-60

[7]Iredale JP.Modelsof liver fibrosis:Exploring the dynamic natureof inflammation and repair in a solid organ[J].JClin Invest,2007,117 (3):539

Effect of M isgurnus anguillicaudatus Lyophilized Power on Liver Fibrosis Induced by CCl4in M ice

ZHANGQian1，SHANGMeng-meng1，LINGQu-fei2，LIUChun-yu1，*
（1.Collegeof Pharmaceutical Science，Soochow University，Suzhou 215123，Jiangsu，China；2.Fisheries Institute，Soochow University，Suzhou 215123，Jiangsu，China）

Tostudy theeffectof Misgurnusanguillicaudatus lyophilized poweron liver fibrosis，themodelinmice wasestablished by using CCl4.Given differentdosesof Misgurnusanguillicaudatus lyophilized power，the serum ALT and AST activitiesand tissue Hyp contentwere detected.The pathological changesof liverwere observed. Resultsshowed that the ASTand ALTactivitiesand Hyp levelswere significantly decreased（P＜0.05）in three dosesgroupsof MisgurnusAnguillicaudatus lyophilized power，comparedwith themodelgroup.The pathological improvementswere observed.The fibrogenesis in liver tissuesweremarkedly reduced and the formation of liver pseudoluboliwasalleviated.The Misgurnusanguillicaudatus lyophilized power can prevent the formation of liver fibrosisinduced byCCl4inmice.

Misgurnusanguillicaudatus lyophilized power；liver fibrosis；CCl4

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.011.031

2013-03-06

江苏省水产三项工程（PJ2011-62）；连云港市赣榆县泥鳅协会项目（P113400310）

张倩（1988—），女（汉），硕士，研究方向：中药药理研究。

*通信作者