猕猴B病毒抗体的检测报告

王计平，鄔继文，吕龙宝

（中国科学院昆明动物研究所，云南 昆明650223）

非人类灵长类动物在世界各国生物医学研究中的作用日趋重要。猴疱疹病毒1型（B病毒）可以使人产生致死性感染[1]。B病毒感染猕猴、食蟹猴非常普遍，而且常常不伴有临床症状或者潜伏感染。感染动物黏液、皮肤、口腔、生殖道分泌物均可传染给其他动物。目前用于检测实验用猴群中B病毒感染主要是用人单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）作为抗原片、玻片免疫酶（IEA）检测抗体的方法。曾有报道[2]，按照实验动物质量国家标准ELISA检测方法用于猴B病毒抗体检测。

随着生物医学的迅速发展，无B病毒感染灵长类动物需求量越来越大，本文采用HSV-1为抗原，IEA检测抗体方法对我中心饲养768只，2～4岁龄猕猴B病毒抗体进行检测。检出482只每隔2周连续检测4次及每年检测1次，连续检测3年B病毒感染1.05%，说明B病毒抗体阴性猴再次感染率不高。用人单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1），猴疱疹病毒为抗原，采用IEA和ELISA检测方法抽检，72只B病毒抗体阳性母猴所生仔猴，5～6个月龄断奶单笼关养后，检测B病毒抗体，有3只仔猴B病毒抗体阳性，69只仔猴B病毒抗体阴性，阴性率为98.6%，说明母猴抗体阳性垂直传染给仔猴几率极低[3-5]。

1 材料与方法

1.1 大笼饲养健康实验猕猴768只，雌雄各半。129只生育母猴，其中72只B病毒抗体阳性母猴生仔猴，单笼关养5～6月龄。

1.2 静脉采血，3 000 r／min离心8min，分离血清。56℃、灭活30min，用样品稀释液1∶10稀释，待查。

1.3 HSV-1抗原片，购自中国医学科学院实验动物研究所。

1.4 B病毒ELISA检测试剂盒，购自珠海海泰生物制药有限公司。

1.5 其余试剂均采用国产AR级。

1.6 B病毒ELISA检测试剂盒。结果判定：以空白孔调零，450 nm波长测A450＜0.15为阴性，A450=0.1-0.2为可疑，A450＞0.21为阳性。

1.7 猴B病毒抗体检测，以HSV-1为抗原，用IEA检测法，检查猴B病毒抗体，结果判定按说明书的指导进行。

表1 自繁殖仔猴B病毒抗体检测

2检测结果

2.1 猕猴B病毒检查结果。用IEA方法检查768只，B病毒抗体阴性482只，阳性286只。

2.2 将482只B病毒抗体阴性猕猴分群单独饲养，1个月后每隔两周用IEA法进行B病毒抗体检测。于2005年3月1日、3月15日、3月30日和4月15日分4次检测结果表明，第1次检出B病毒抗体阳性猴3只，第2、第3次各检出4只，第4次检出6只。检出率分别0.62%；0.83%；1.26%

2.3 将476只B病毒抗体阴性猕猴大笼群养，每笼8～10只。2006年3月至2008年3月每隔1年用IEA法进行B病毒抗体检测，连续检测3年。3次检测结果发现，第1年检出B病毒抗体阳性猴3只，检出率0.6%；第2、第3次各检出5只，检出率1.05%。每次检出B病毒抗体阳性动物隔离关养，次年再检为阳性。3年的连续检测，阳性感染率1.05%。为日后群养动物提供可行依据。

2.4 用HSV-1抗原片IEA方法和ELISA，抽检129只母猴所生仔猴，其中72只B病毒抗体阳性母猴所生仔猴，5～6个月龄离乳单笼关养，每隔1周检测1次，共检3次。B病毒检测结果（见表1）。其中1只B病毒抗体为阳性，71只B病毒抗体为阴性，阴性率为98.6%。

3讨论

用人单纯疱疹病毒1型（HSV-1）为抗原[6]，玻片免疫酶检测抗体的方法，对动物研究所动物中心饲养猕猴B病毒抗体阴性动物分区，起到了很大促进作用。该方法方便快捷，而且普通实验室条件就可进行。用该方法检测B病毒抗体阴性动物，得到日本食品农医药品安全评价中心认可。他们用这些动物进行药理、病理试验。

B病毒抗体阴性482只动物，进行4次检测，第1次检出9只B病毒抗体阳性动物，检出率1.88%。第2次、第3次各检出11只，检出率分别为2.28%、2.28%。第4次检出12只B病毒抗体阳性动物，检出率2.49%。检测是否表明B病毒感染的动物未排毒，因为我们仅采用一种检测方法还须进一步证实。另外由于饲养环境改变和动物健康、应急等因素，也可能导致病毒活化，出现抗体阳性。Weir[7]报道，B病毒潜伏感染，发生病毒活化和排毒，常不伴有临床症状。感染猴子虽然从黏膜排毒，但并不经常排泄B病毒，通常排毒时间需要几小时。他们对常规动物检疫、繁殖、剖腹产、正常分娩等是否会引起血清阳性猴子病毒的排泄和传播也进行研究。发现16只血清阳性猴仔在剖腹产或正常分娩后每周检疫1次持续3周的检疫中，也没有排毒。

HSV-1作为抗原，用IEA和ELISA方法，对72只B病毒抗体阳性母猴和离乳后5～6月龄单笼关养仔猴进行检测。检测结果71只B病毒抗体阴性，阴性率98.6%。表明母猴直接传播给仔猴的几率极低。饶军华[8]等报道，仔猴体内携带B病毒母源抗体随着月龄变化，5月龄时B病毒水平下降至最低水平，之后病毒抗体水平逐渐上升。这也给我们提供仔猴最佳的离乳时间。采用两种方法检测72只仔猴和72只B病毒抗体阳性母猴，3次检测结果都一致，表明两种方法都可行，用HSV-1抗原片IEA方法更简单快捷，结果说明母猴抗体阳性垂直传染给仔猴几率极低。

[1]田克恭.实验动物病毒性疾病[M].北京：农业出版社，1992．

[2]贺争鸣，卫礼，巩薇，等.猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和研究成果[J].中国实验动物学报，2003，11（3）：161-164．

[3]饶军华，刘晓明，田克恭，等.猕猴SPF种群的建立及保持过程中B病毒抗体监测研究[J].中国比较医学杂志，2003，13（5）：294-296.

[4] Weigler B J，Roberts JA，Hird DW，etal.A cross sectionalsur⁃vey for B virus antibody of group housed rhesusmacaques[J].Lab Anim Sci，1990，40：257-261．

[5] 饶军华，王海英，刘晓明，等.B病毒感染的预防和治疗方法[J].中国比较医学杂志，2005，15（4）：240．

[6]李绍东，周亚敏，段幸生，等.猴B病毒相关抗体及B病毒抗体检测的比较研究[J].中国实验动物学报，1995，3（2）：94-97．

[7] Weir E C，et al.Infresvirus simiae from seropositive macaques Lab Anim Sci[J].1993Dec 1；42（6）：541-544．

[8]饶军华，刘晓明，王海英，等.人工驯养条件下食蟹猴B病毒抗体水平变化规律研究[J].中国实验动物学报，2007，17（1）：12-14．