中国鸡群禽呼肠孤病毒抗体的检测与分析

靳继惠，文 楚，邵梦瑜，赵 烨，于晓慧，袁希民，张立新，张嘉栋，鹿建山，张洪昌，甘孟侯，赵继勋，吕春梅，何 佩，赵丽莉，秦秀慧，才学鹏，张国中

（1.中国农业大学动物医学院，北京 海淀100193；2.北京康牧兽医药械中心，北京 海淀100085；3.中国动物疫病预防控制中心，北京 朝阳100125）

禽呼肠孤病毒属于呼肠孤病毒科（Reovir⁃dae）、正呼肠孤病毒（Orthoreovirus），为分节段的双链RNA病毒。病毒粒子无囊膜，呈二十面体对称并具有双层衣壳结构。1954年，Fahey和Craw⁃ley首次从患慢性呼吸道病的鸡呼吸道内分离到病毒。ARV感染呈全球性分布，可感染鸡、火鸡及其他多种禽类[1]。ARV主要引起肉鸡的病毒性关节炎和腱鞘炎，还可致患鸡生长抑制、饲料转化率低以及免疫抑制造成继发感染增加等[2-3]。

1985年王锡堃证实了我国鸡群发生由ARV引起鸡病毒性关节炎[4]。近年来国内外ARV的感染情况呈现加重趋势，临床症状越来越多样化，不同类型鸡群均有疑似ARV感染情况存在，主要表现为腿和关节疾病、生长不良、腺胃肿等，ARV感染鸡群引起的经济损失越来越受到养禽业者的广泛关注[5-6]。近几年国内对部分省市ARV的血清学调查有一些报告[7-11]，而在全国范围内大规模的进行ARV抗体检测却鲜有报道。对我国鸡群开展较全面的ARV抗体监测、了解其抗体变化及感染情况十分必要。

国内目前普遍采用ELISA方法检测ARV抗体，该方法敏感性高、特异性强，适合大规模血清样本的检测。为了解我国鸡群的ARV抗体水平及其变化规律，本研究应用商品化的ARV抗体ELISA检测试剂盒对我国19个省市的不同类型鸡群进行了ARV抗体的检测与分析，以期为养禽生产中正确认识和科学防控ARV感染奠定基础。

1 材料与方法

1.1 血清样本 2010年1月至2013年6月间来自全国19个省市393个不同类型（肉鸡、肉种鸡、蛋鸡、蛋种鸡）鸡群的血清样本17 058份，包括商品肉鸡血清3 497份、肉种鸡血清12 424份、商品蛋鸡血清91份、蛋种鸡血清514份、麻鸡血清93份、父母代麻鸡血清190份、父母代芦花鸡血清121份、三黄鸡血清60份、岭南黄种鸡血清48份和土鸡血清20份。

1.2 检测试剂盒 禽呼肠孤病毒ELISA抗体检测试剂盒为美国IDEXX公司产品，购自北京爱德士元亨生物科技有限公司，检测结果以ELISA抗体效价大于396判为ARV抗体阳性。

1.3 血清抗体的检测 所有血清样品均利用ARV抗体检测试剂盒进行检测，具体操作方法和判定标准均按参照试剂盒说明书进行，样品检测工作由中国农业大学畜禽疫病诊断中心完成。

2 结果与分析

2.1 ARV抗体检测总体情况 本次检测的393个鸡群包括106个非免疫鸡群和287个免疫鸡群，共检测样本17 058份，其中阳性样本15 680份，总体阳性率为92.83%。非免疫鸡群共3 965份血清样本检测出2 963份为阳性，阳性率为74.72%。免疫鸡群共13 093份血清样本检测出12 897份血清为阳性，阳性率为98.50%，具体检测结果如表1所示。

检测的非免疫鸡群血清样品中ARV抗体阳性率较高，表明在非免疫鸡群中ARV感染较为普遍。图1显示的是某非免疫商品肉鸡群不同日龄ARV抗体变化，该鸡群ARV抗体呈现明显的高-低-高的典型变化，1日龄时由于母源抗体的普遍存在，鸡群ARV抗体水平较高，21日龄时母源抗体已逐渐消失，鸡群ARV抗体多为阴性，随后在35日龄和42日龄鸡群ARV抗体水平呈现逐渐上升趋势，表明该鸡群发生了ARV感染。图2显示有ARV感染临床表现（腿和关节疾病）部分非免疫鸡群的抗体检测情况。

表1 免疫和非免疫鸡群ARV抗体检测结果

图1 白羽商品肉鸡ARV抗体检测情况

图2 部分发病鸡群ARV抗体检测情况

检测免疫鸡群的ARV抗体阳性率为98.50%，并且存在一定比例的免疫鸡群抗体水平偏高的现象。鸡群免疫抗体ELISA滴度通常介于2 000～15 000之间，监测结果显示，部分鸡群ELISA抗体滴度值可达到20 000以上并且临床存在ARV感染的临床表现，表明部分免疫鸡群仍存在ARV感染情况。图3显示免疫肉种鸡群ARV抗体的消长情况。

图3 白羽肉种鸡群ARV抗体消长情况

2.2 不同地区鸡群ARV抗体检测结果分析 对来自不同地区的血清样本检测结果分别进行分析表明，除了山东省和广东省外，其他各个省市的样本阳性率均在90%以上，其中黑龙江和宁夏两省的样本阳性率均达到了100%，而阳性率最低的山东和广东两省也分别达到了75.31%和87.87%，具体结果如表2所示。结果表明，我国不同地区鸡群中ARV抗体的阳性率普遍较高。

表2 不同地区鸡群ARV抗体检测结果

2.3 不同类型鸡群ARV抗体检测结果分析 商品肉鸡、肉种鸡、商品蛋鸡和蛋种鸡的ARV抗体阳性率分别为72.66%，98.48%，93.40%和95.53%，结果如表3所示，结果表明，我国不同类型鸡群均具有较高的ARV抗体阳性率，其中商品肉鸡群和部分商品蛋鸡群均为非免疫鸡群，同样表明不同类型鸡群ARV感染较为普遍。

表3 不同类型鸡群ARV抗体检测结果

2.4 部分地方品种鸡群ARV抗体检测结果分析

我国不同地区的铁脚麻鸡、黄鸡、土鸡和岭南黄鸡ARV抗体平均ELISA滴度均在2 000以上，其中广西省黄鸡的ARV平均ELISA抗体滴度达到了12 000以上，具体检测结果如图4所示。结果表明，我国地方品种鸡群也普遍存在ARV感染。

图4 部分地方品种鸡群ARV抗体检测情况

3 讨论

2006年崔治中等采用ELISA方法对山东、吉林、北京、河南、辽宁5个省市8个公司不同品种不同日龄鸡群进行了ARV抗体检测，在检测的75个鸡群中有74个鸡群为ARV抗体阳性（96%），其中1 764份鸡血清的ARV平均抗体阳性率为75.1%，研究表明，我国多数鸡群中都存在着ARV的感染[9]。2011年，赵圆圆等采用ELISA方法进行了安徽省ARV感染的血清学调查，结果表明，所有被检的鸡群都存在不同程度的抗体阳性率，ARV感染在安徽鸡群中已经普遍存在[11]。

本研究首次在全国范围内对不同类型鸡群ARV抗体进行大规模检测，所有的血清样本都来自中国大陆的主要养禽生产地区。检测结果表明，采样的19个省市、393个鸡群的17 058份鸡血清中，共检测出15 680份ARV抗体阳性血清，平均阳性率为92.83%，其中免疫鸡群的阳性率为98.50%，非免疫鸡群的阳性率为74.72%。部分免疫鸡群存在的抗体偏高现象、非免疫鸡群存在较高的抗体阳性率表明我国鸡群ARV感染普遍存在。临床上也存在部分鸡群有疑似ARV感染的表现，比如生长不良、腿和关节疾病等，并且分离出了病原，分离的病原和临床发生疾病的关系问题还需要进一步分析和探讨[8]。在我们采样的省份中，除了山东省和广东省外，其他各个省市的血清阳性率均在90%以上，并且不同类型鸡群的血清阳性率及部分地方品种鸡群的ARV抗体水平也较高。这些结果表明，ARV抗体水平与鸡群的地域分布、鸡群类型和品种关系不大，ARV感染在我国鸡群中较为普遍。

ARV可水平传播亦可经卵垂直传播，鸡群由于感染了ARV会导致机体的免疫功能降低、对其他传染病的易感性增加，同时该病毒在感染鸡群后多呈现亚临床感染，诱发非特异性并发症或免疫抑制，导致其处于免疫抑制状态，当对鸡群进行新城疫和高致病性禽流感等疫苗免疫时易于造成免疫失败[12]。本研究表明，我国鸡群中ARV的感染可能普遍存在，并且可能潜在对我国的养禽业构成了威胁。本研究仅对国内鸡群ARV抗体情况进行了检测分析，从血清学水平了解了我国鸡群的ARV感染的初步情况，要想进一步搞清楚ARV在我国鸡群的危害和流行状况，还应继续开展ARV感染的分子流行病学调查及免疫保护分析研究。

[1]Saif Y.M.禽病学[M].12版.苏敬良，高福，索勋主译.北京：中国农业出版社，2012：355-371.

[2]Jones R C.Avian reovirus infections[J].Rev Sci Tech.2000，19（2）：614-625.

[3]Van Der Heide L.Viral arthritis/tenosynovitis：a review[J].Avian Pathol，1977，6（4）：271-284.

[4]王锡堃，唐秀英，刘庆祥，等.应用琼扩试验检查鸡病毒性关节炎[J].畜禽传染病，1985，7（3）：26-27.

[5]Troxler S，Rigomier P，Bilic I，etal.Identification ofa new reovirus causing substantial losses in broiler production in France,despite routine vaccination of breeders[J].Vet Rec，2013，172（21）：556.

[6] Davis J F，Kulkarni A，Fletcher O.Myocarditis in 9-and 11-day-old broiler breeder chicks associated with a reovirus infection[J].Avian Dis，2012，56（4）：786-790.

[7] 谢芝勋，邓显文，刘加波，等.鸡病毒性关节炎血清学调查[J].中国家禽，1998，20（12）：15.

[8] Pu J，Liu X，Guo Y，etal.Seroprevalence of avian reovirus in egglaying chicken flocks in China[J].Avian Dis，2008.52（4）：675-679.

[9]崔治中，孟珊珊，姜世金，等.我国白羽肉用型鸡群中CAV、REV和REOV感染状况的血清学调查[J].2006，37（2）：152-157.

[10]窦春香，范秀兰.鸡病毒性关节炎的血清学调查[J].上海畜牧兽医通讯，2007（2）：43.

[11]赵圆圆，黄晓慧，王蓓，等.安徽省禽呼肠孤病毒感染的血清学调查[J].中国微生态学杂志，2011，23（9）：813-815.

[12]崔治中.免疫抑制性病毒多重感染在鸡群疫病发生和流行中的作用[J].畜牧兽医学报，2003，34（5）：417-421.